全 文 ：物多糖被看成是有广泛免疫活性的有效部位[ 1 , 2] 。
红细胞免疫是机体整个免疫系统不可分割的重要组
成部分 , 红细胞可通过膜上的 C3b 受体结合可溶性
循环免疫复合物(IC), 从而促进 IC 的清除 , 还可以
通过其它机制增强淋巴细胞引导的免疫功能[ 3] 。本
次实验结果表明 , 川牛膝多糖对红细胞免疫功能有
显著的促进作用 , 从一个角度提供了川牛膝补益作
用的实验依据 。至于其作用机理 , 有学者认为红细
胞膜上存在多糖受体[ 4] , 川牛膝多糖增强小鼠红细
胞免疫作用是否通过多糖受体介导尚待进一步研
究。
参考文献
1　田庚元 ,等.中国中药杂志 , 1995;20(7)∶441
2　周　静.中草药 , 1994;25(1)∶40
3　胡传根 ,等.红细胞免疫功能.中国免疫学杂志 , 1988;
4(1)∶27
4　郭　峰 ,骆永珍.红细胞免疫新探.南京大学出版社 ,
1993∶160
山大黄多糖的抗肿瘤及免疫增强作用
唐小江　祝寿芬1
(广东省职业病防治院　广州　510310;　1山西医科大学公共卫生学院　太原　030001)
　　提　要　从山大黄中提得的山大黄多糖(RRP)100mg/kg对小鼠 S180实体瘤抑瘤率为 56.2 ～ 64.4%, RRP
与环磷酰胺联合的抑瘤率达 90.4%;ig 10mg/ kg , 200mg/ kg 连续 7d RRP 可明显提高小鼠 NK 细胞的活性 ,并能
增强 ConA诱导的淋巴细胞增殖能力。
　　关键词　山大黄多糖;S180肉瘤;T 淋巴细胞;NK 细胞
　　山大黄(Rheum rhaponticum)为三大非正品大黄
之一的华北大黄(R.franzenbachii Mǜnt)的主要变
种 ,由于泻下作用弱而未入药 ,大部分用于出口作染
料或兽药等原料 , 价格特低。近年发现大黄除泻下
作用外 , 还有抗肿瘤 、增强免疫功能等多种作用 , 其
机理与富含多糖有关[ 1] 。我们从山大黄中分离得到
水溶 性多 糖(Rheum rhaponticum polysaccharide ,
RRP),并对其抗肿瘤及免疫学作用进行了探讨。
1　材料和方法
1.1　试验药物　RRP 是从山西省五台县产的山大
黄(Rheum rhaponticum)中提取 , 纯化 ,并经山西医科
大学药学系鉴定的山大黄多糖成分 , 纯度>98%, 以
主成分 RRP(经硫酸蒽酮法[ 2] 水解后用岛津 UV-
260 紫外可见光分析仪检测)作为质控指标(97 ±
2%, n≥20)。 RRP 为淡黄色粉末 , 溶于水 , 0.2%生
理盐水 pH 值为 6.2 ,临用前用蒸馏水溶解。
1.2　药物与试剂　RPMI 1640、ConA、M TT 均为
Sigma公司 , M TT 临用前用 HBSS(pH =7.2)配成
1g/ L。
1.3　动物及瘤株　S180瘤株 , 由北京市肿瘤防治研
究所提供 ,选择接种 S180腹水型瘤株一周的小鼠 , 按
常规方法取腹水 , 调节细胞浓度为 1×1010/ L , 用于
移植注射 ,每鼠注入 0.2ml;YAC-1 细胞 , 购自北京市
职业病防治研究所;昆明种小鼠 ,体重 18 ～ 22g , 由山
西医科大学动物中心提供。
1.4　山大黄多糖的抗肿瘤作用
1.4.1　RRP 对小鼠 S180实体瘤的抑制作用　♂小
鼠 40只随机分4 组 ig 给药 ,连续 10d , d6 接种 S180瘤
株于右腋皮下 ,给药后 d15(即接种瘤株后 d10)处死
小鼠 ,分别取瘤称重 ,计算抑瘤率。
1.4.2　RRP 与环磷酰胺的联合抑瘤作用　♂鼠 50
只随机分 5 组 ig 给药 12d , d6 接种瘤株 , 环磷酰胺
(Cyclophosphamide , Cy)于接种瘤株后 d2 ip , 连续 7d ,
接种瘤株后 d9 处死小鼠 , 分别取瘤 、胸腺 、脾 、肝称
重 ,求抑瘤率 。
1.5　山大黄多糖的免疫增强作用
1.5.1　RRP 对 S180荷瘤小鼠免疫器官的影响　见
1.4.2 , 计算脾指数和胸腺指数。
1.5.2　RRP 对 NK 细胞活性的影响　小鼠随机分 4
组 , ig给药连续 7d , d8 断头放血处死 , 常规无菌取脾
制成单细胞悬液 ,调节细胞浓度为 4×109/ L , NK 细
胞活性的测定采用 MTT 法[ 3 , 4]并加以改进 , 取生长
良好的 YAC-1 细胞 , 临用前 1d 换培养液 , 使用前用
培养液洗两遍 , 用含 10%小牛血清的 RPMI 1640 培
养液调节细胞浓度为 2×108/ L , 加入 40 孔培养板
中 ,每孔 100μl , 同时加入脾细胞悬液每孔 100μl , 使
效靶比为 20∶1 , 并设效应细胞(脾细胞)和靶细胞
27中药药理与临床 1999;15(4)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.1999.04.011
(YAC-1 细胞)对照孔。以上均设三个复孔 , 置 37℃
5%CO 2箱中培养 20h , 100×g 离心 10min ,小心吸弃
上清 100μl ,加入 M TT 液每孔 50μl , 继续培养 4h , 150
×g 离心 10min , 弃上清 , 加入 0.04N 的盐酸异丙醇
每孔 200μl , 吹打 ,使结晶充分溶解 , 用 ELISA 检测仪
于 570nm 波长处测 OD 值 , NK细胞的活性按下式计
算:细胞杀伤率(%)=1-(M-T)/ C。式中 M:靶细
胞加效应细胞孔 OD;T:效应细胞孔 OD值;C:靶细
胞孔 OD值。
1.5.4　RRP 的淋巴细胞增殖试验　小鼠随机分 4
组 , ig 给药连续 7d , d8 取脾制成单细胞悬液 , 调节细
胞浓度为 4×109/ L ,加入 40 孔板内 , 每孔 100μl , 再
加入含 ConA 5mg/ L 的培养液每孔 100μl , 每个小鼠
设 3 个复孔 , 同时设不含 ConA 的培养液作对照组 ,
置孵箱中培养 68h , OD值测定与 1.5.3相同。
2　结果
2.1　山大黄多糖的抗肿瘤作用
2.1.1　RRP 对小鼠 S180实体瘤的抑制作用　结果
见表 1 , RRP 100mg/kg抑瘤率达 56.2%。
　　表 1　RRP 对 S 180实体瘤的抑制作用( x ±s)
药物 剂量(mg/ kg) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
NS 0 1.78±0.80 -
PUP 100 0.86±0.53 51.5＊
RRP 100 0.78±0.66 56.2＊＊
RRP 400 1.20±0.67 32.5
　　＊ P<0.05 , ＊＊ P<0.01　PUP:猪苓多糖
2.1.2　RRP 与 Cy 的联合抑瘤作用　结果见表 2 ,
RRP+Cy 联合抑瘤率达 90.4%;Cy 抑瘤率为 85%,
但体重下降 ,而其余各组体重增加。
　表 2　RRP 与Cy 对 S180实体瘤的联合抑瘤作用( x±s)
药物 剂量(mg/ kg) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
NS 0 1.47±0.78 -
Cy 20 0.22±0.18 85.0＊＊
PRP+Cy 100+20 0.14±0.08 90.4＊＊
PRP 50 0.64±0.56 56.6＊＊
PRP 100 0.44±0.47 64.4＊＊
　　与对照组比较 ＊＊P<0.01
2.2　山大黄多糖的免疫增强作用
2.2.1　RRP 对免疫器官的影响　结果见表 3 , Cy 组
体重呈负增长 ,脾指数和胸腺指数均显著下降 , 其它
三个试验组体重和脏器指数与对照组比较均无显著
性差异 , 说明 Cy 对免疫功能有抑制作用 , 而 RRP
100mg/ kg 对 Cy 造成的免疫损害有保护作用。
2.2.2　RRP对NK细胞活性的影响　RRP三个剂
　　表 3　RRP 与Cy 联合作用对 S180荷瘤小鼠免疫器官脏
器指数的影响( x ±s)
药　物 剂量(mg/ kg) 脾指数 胸腺指数
对照 0 5.4±1.8 1.6±0.9
Cy 20 4.4±1.0＊＊ 1.3±0.5＊＊
Cy+RRP 20+100 5.3±1.6 1.6±0.4
RRP 50 5.6±2.0 1.9±1.5
RRP 100 5.6±1.0 1.9±0.9
量 NK 细胞对靶细胞的杀伤率均大于空白对照组 ,
其中 100mg/ kg 和 200mg/ kg 的杀伤率分别达到
41.62%和 42.33%, 两者差异很小 , 是阴性对照组
(15.30%)的 2.7 倍以上 , 结果见图 1。
图 1　RRP 对小鼠 NK 细胞杀伤率的影响
RRP ig , A∶0mg/ kg;B∶50mg/ kg;C∶100mg/ kg;D∶200mg/
kg , x±s , n=9 ,与对照组比较 ＊＊P<0.01
2.2.3　RRP 的体内淋巴细胞增殖作用 　RRP
100mg/ kg 和 200mg/kg 对小鼠脾淋巴细胞增殖有促
进作用 , OD值分别为 0.145 , 0.171 , 与对照组(OD=
0.085)相比均有显著性差异 ,结果见图 2。
图 2　RRP 对小鼠脾 T 细胞增殖的影响(OD值)
RRP ig , A∶0mg/ kg;B∶50mg/ kg;C∶100mg/ kg;D∶200mg/
kg , x±s , n=6 ,与对照组比较 ＊P<0.05
3　讨论
　　植物多糖的抗肿瘤作用主要是通过调节机体免
疫功能 ,刺激巨噬细胞 、T 细胞及 NK 细胞等的功能 ,
并促进干扰素等淋巴因子的产生 , 从而提高了机体
的防御能。 RRP 抗肿瘤作用高剂量反而较低 , 这与
多糖通常有一个最佳剂量相吻合[ 5] 。有趣的是 ,
28 中药药理与临床 1999;15(4)
RRP对 NK 细胞的活性和体内淋巴细胞增殖试验的
结果 , 也存在免疫最佳剂量 , 并与抑瘤试验结果一
致。有人曾观察到枸杞多糖的免疫抑瘤作用与其提
高 T 淋巴细胞增殖能力和 NK 细胞活性密切相
关[ 6] 。提示提高 NK 细胞活性可能是 RRP 发挥抑瘤
作用的重要机制之一。
在排斥肿瘤的免疫反应中 , 细胞毒 T 细胞及
CT L也发挥着重要的作用 , CTL 通过其抗原受体识
别瘤细胞上的特异性抗原 , 并与之结合而直接杀伤
之 ,或通过淋巴毒素杀伤肿瘤细胞。因而 , CTL 细胞
要在肿瘤生长一定时间后才能发挥作用 , RRP能提
高 ConA刺激的淋巴细胞增殖能力 , 说明 RRP 可活
化 T 细胞 , 这与抗肿瘤作用密切相关 , 但本试验检测
的是总的 T 淋巴细胞的增殖情况 , 由于 T 细胞中 , Th
或 CTL亚群的增殖可提高对肿瘤的杀伤效应 , 而 Ts
亚群的增殖反而会抑制机体对肿瘤的免疫反应 , 因
此有必要对不同 T 淋巴细胞亚群进行分析研究 , 以
进一步阐明 RRP 的作用机理。
参考文献
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～ 43
丹参酮对实验性脑梗塞大鼠血液发光学的影响
王　军(成都中医药大学附属医院　成都　610072)
邱玉兰(四川省合江县人民医院　合江　646200)
　　近年许多研究表明 , 自由基所引起的脂质过氧
化反应与脑缺血和脑梗塞有着密切的关系[ 1] 。 由于
血液的超弱发光性与氧自由基浓度的平方成正
比[ 2] ,本实验通过凝闭大鼠一侧大脑中动脉造成局
灶性脑缺血 ,观察了丹参酮对其血液发光学的影响。
1　材料与方法
1.1　试验药物　丹参酮(Tanshinone , Tan)中国药品
生物制品检定所供给 , 以灭菌生理盐水配制成混悬
液 ,摇匀后使用。
1.2　动物　Wistar大鼠 , 体重 280±65g , 雌雄各半。
1.3　仪器　超弱发光仪 , PXT-Ⅱ型 , 南京光学仪器
厂 ,灵敏度±20counts/180″,本底为 0。
1.4　方法　大鼠随机分 3 组 , 即丹参酮组 、生理盐
水对照组及正常对照组 , 按 Bederson 法[ 3]制作大鼠
局灶性脑缺血模型 , 分别于造模前 30min 肌肉注射
丹参酮(90mg/ kg)或等量生理盐水 , 缺血 24 小时后
双侧颈动脉取血 ,作用液和血清超弱发光性测定。
2　结果
2.1　对血液超弱发光性的影响　见表 1。
　　表 1　对血液及血清超弱发光性的影响( x ±s)
组　　别 n 血液(counts/ 180秒)
血清
(counts/ 180秒)血清/血液
正常组　 21 4138±168 4673±198＊ 1.13
模型对照 22 6194±272 6644±299 1.07
丹参酮组 22 4734±208＊ 5224±212＊ 1.10
　　与模型对照组相比 ＊ P<0.05
　　由表结果可知 , 模型对照组血液和血清超弱发
光性显著高于正常组 , 而丹参酮组血液和血清超弱
发光性与正常组相近 , 显著低于模型组。
2.2　丹参酮对脑缺血区病理变化的影响　模型对
照组大体标本可见脑缺血区向外隆起 , 颜色苍白。
光镜下 , 大鼠脑组织呈典型的缺血性改变 , 充血 、水
肿明显;丹参酮组大体标本脑缺血有所减轻 , 光镜下
脑组织充血 、水肿 ,坏死明显减轻。
29中药药理与临床 1999;15(4)
四川省教委资助课题