全 文 ：57※基础研究 食品科学 2007, Vol. 28, No. 07
收稿日期：2005-11-22
基金项目：海南省自然科学基金项目(80418)
作者简介：毕和平( 1 9 5 5 - )，男，教授，主要从事天然药物化学研究。
三叉苦提取物抗氧化作用的研究
毕和平 1，张立伟 2，韩长日 1，陈光英 1
(1.海南师范大学化学系，海南 海口 571158；2.山西大学分子科学研究所，山西 太原 030006)
摘 要：目的：研究三叉苦不同部位水提取物的抗氧化作用及其规律，为食品或药物抗氧化剂的筛选和应用提供
理论依据。方法：应用化学发光法检测三叉苦的各部位水提取物对邻苯三酚 -CTMAB体系产生的超氧阴离子自由
基(O 2·)、邻菲罗啉 -抗坏血酸体系产生的羟自由基(·OH)及过氧化氢(H 2O 2)的清除作用。结果：三叉苦水提取
物具有明显的清除超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的作用，清除率与浓度之间存在着明显的量效关系。结
论：证明了三叉苦各部位的水提取物均是一种有效的抗氧化剂。
关键词：三叉苦；水提取物；化学发光；抗氧化作用
Study on Antioxidative Effect of Evodia lepta
BI He-ping1，ZHANG Li-wei2，HAN Chang-ri1，CHEN Guang-ying1
(1.Department of Chemistry, Hainan Normal University, Haikou 571158, China；
2.Institute of Molecular Science, Shanxi University, Taiyuan 030006, China)
Abstract ：Objective: To study the antioxidative effects and its regularity of Evodia lepta (collected in China, Hainan). Method:
Scavenging effects of Evodia lepta on hydroxyl radical (·OH) produced from O-phenathroline-ascorbic acid system, super
oxide anion radical(O2·) produced from pyrogallol-CTMAB system and hydrogen peroxide(H2O2) was studied by chemilu-
minescence assay. Result: The water extract of Evodia lepta has a significant effect on hydroxyl radical, super oxide anion radical
and hydrogen peroxide. Conclusion: The water extract of Evodia lepta is an efficiency antioxidant.
Key words：Evodia lepta (Spr.)Merr；extracts；chemiluminescence；antioxidation
中图分类号：R151.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)07-0057-04
三叉苦(Evodia lepta Spr. Merr)为芸香科吴茱萸属植
物，始载于《岭南采药录》，又名三桠苦、三丫苦、
三叉虎等，其根、茎或叶均可药用，主要分布于南方
各地[ 1 ]，蕴藏量十分丰富。三叉苦味苦，性寒，具有
清热解毒、祛风除湿等功效。主治咽喉肿痛、疟疾、
黄疸型肝炎、风湿骨痛、湿疹皮炎、乙型脑炎、流
行性脑脊髓炎、感冒发热、扁桃体炎、咽喉炎、跌
打肿痛、风湿痹痛等[2-3]。三叉苦泡茶具有良好的清热、
抗炎和镇疼作用[4]，民间也常饮用三叉苦茶或用三叉苦
药液进行洗浴，用于消暑、解毒、清热和美容。
生物体在进行氧代谢过程中常伴有超氧阴离子自由
基( O 2·)、羟自由基(·O H )、单线态氧分子( 1 O 2)、过
氧化氢(H2O2)和过氧化脂质(ROOH)等活性氧的产生。正
常生理条件下活性氧的生成与清除处于一种动态平衡，
一定量的活性氧水平有利于维持生物体的正常功能。如
果细胞内的活性氧清除能力不足则会因蛋白质、脂质和
D N A 分子的过氧化反应而导致其结构和功能的破坏，
从而造成细胞和生物组织的病理改变[ 5 -7 ]。因此，研究
活性氧清除剂对于延缓生物体衰老、防治疾病或作为食
品抗氧化添加剂都具有重要的意义。本实验研究了海南
产三叉苦的根、茎、叶在水中的提取率，利用化学发
光法研究了三叉苦各部位水提取物对邻苯三酚 -CTMAB
体系产生的超氧阴离子自由基(O 2·)、邻菲罗啉 - 抗坏
血酸体系产生的羟自由基(·OH)和过氧化氢(H2O 2)的清
除作用，为三叉苦的综合开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
样品三叉苦采自海南省澄迈县(经海南师范大学生物
系钟义教授鉴定 ) ，自然晾干，粉碎备用。鲁米诺
Fluka公司；溴代十六烷基三甲胺(CTMAB)、过氧化氢
(H2O 2，30%)、抗坏血酸(VC)、氢氧化钠、碳酸氢钠、
邻苯三酚、邻菲罗啉(O-phenathrol i ne)、硫酸铜、硼
砂、硼酸等所用试剂均为国产分析纯试剂。测定用水
2007, Vol. 28, No. 07 食品科学 ※基础研究58
为二次蒸馏水。
1.2 仪器
Tri-Carb 2200CA液体闪烁谱仪 美国；旋转蒸发器
RE-52A 上海亚荣生化仪器厂；DZG-401型真空干燥器
天津天宇机电有限公司；数字 pH 计(Φ 50pH M eter )
BECKMAN；Gilson微量移液器，KQ3200超声波清洗
器 昆山市超声仪器有限公司。
1.3 方法
1.3.1 制备三叉苦水提取物
分别称取已粉碎的三叉苦根、茎、叶各 1 0 g，放
入烧瓶中，加水 2 0 0 ml，回流法提取两次，每次 2 h，
过滤，滤液于 80℃减压浓缩至稠膏状，75℃下真空干
燥，计算提取率。将三叉苦各部位提取物的干燥品用
二次蒸馏水溶解，过滤并定容至 100ml。
1.3.2 清除H2O2的测定
参照文献[8 ]的方法并略作改进。用二次蒸馏水配
制4.9×10－3mol/L鲁米诺溶液、1.0×10－5mol/L的CTMAB
溶液和 5.0× 10 － 3mol/L的过氧化氢(H2O2)溶液，临用时
新配 pH9.7的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液。在液闪瓶中加
入不同浓度的三叉苦提取液 100μl，空白组加入等量的
二次蒸馏水，再分别依次加入H2O2溶液 100μl和 pH9.7
的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液 500μl，混合均匀后再加入
鲁米诺和CTMAB的等量混合液 300μl，启动反应，反
应总体积为 1 m l，立即置液闪瓶于测定架中，室温测
定。每隔 6 s 测一次发光强度，测定时间 18 s，测定数
据由仪器所带计算机自动记录，每个样品平行测三次。
发光强度以CPM表示，取 6～18s内的发光强度的平均
值，按下述方程计算清除率。以清除率为纵坐标，样
品浓度为横坐标作图，根据拟合曲线求出 IC 50值(清除
50% 活性氧所需清除剂浓度，称为半清除率)。
CPM空白－CPM样品
H2O2清除率(%)= ——————————× 100
CPM空白
1.3.3 清除 O 2·的测定
参照文献[9～10]的方法并略作改进。邻苯三酚以 1.0
× 10 － 3mol/L HCl配成 0.01mol/L储液，于冰箱存放，使
用前用二次蒸馏水稀释浓度至 2.5× 10 － 4mol/L。用前新
鲜配制pH为 9.95的0.01mol/L Na2CO3-NaHCO3的缓冲液，
用二次蒸馏水配制 0.01mol/L CTMAB溶液。在液闪瓶中
分别加入 100μl不同浓度的三叉苦提取液，空白组加入
等量的二次蒸馏水，再分别依次加入 pH9.95的碳酸盐缓
冲液 500μl，体积比为 1:7的邻苯三酚和CTMAB的混合
液 400μl，启动反应，反应总体积为 1ml，立即置液闪
瓶于测定架中，室温测定。每隔 6 s 测一次发光强度，
测定时间 1 8s，测定数据由仪器所带计算机自动记录，
每个样品平行测三次。发光强度以 CPM 表示，取 6～
1 8s 内的发光强度的平均值，按下述方程计算清除率。
以清除率为纵坐标，样品浓度为横坐标作图，根据拟
合曲线求出 IC 5 0 值。
(CPM空白－CPM本底)－CPM样品
O2·清除率(%)=————————————————× 100
CPM空白－CPM本底
1.3.4 清除·O H 的测定
参照文献[11]的方法并略作改进。用二次蒸馏水配制
pH为 9.18的硼砂 -硼酸缓冲溶液、1.0× 10 － 3mol/L的邻
菲罗啉溶液(用温水浴，50～60℃溶解)、1.0× 10 － 3mol/L
硫酸铜溶液、9.8× 10 － 5mol/L的抗坏血酸溶液和 5.0×
10 － 3mol /L的过氧化氢溶液。在液闪瓶中加入三叉苦不
同浓度的提取液 100μl，空白组加入等量的二次蒸馏水，
再分别依次加入 50μl 硫酸铜溶液、20μl 抗坏血酸溶液
及 100μl邻菲罗啉溶液，再加入 630μl硼砂 -硼酸缓冲
溶液，混匀，再加入 100μl 过氧化氢溶液，启动反应，
反应总体积为 1ml。立即置液闪瓶于测定架中，室温测
量，每隔 6 s 测一次发光强度，测定时间 18 s，测定数
据由仪器所带计算机自动记录，每个样品平行测三次。
发光强度以CPM表示，取 6～18s内的发光强度的平均
值，按下述方程计算清除率。以清除率为纵坐标，样
品浓度为横坐标作图，根据拟合曲线求出 I C 5 0 值。

(CPM空白－CPM本底)－CPM样品
·OH的清除率(%)=——————————————————× 100

CPM空白－CPM本底
2 结果与分析
2.1 三叉苦不同部位的提取率
根据公式：提取率(%)= 提取物质量 / 生药质量×
1 0 0，得三叉苦各部位的提取率，结果见表 1。
表1 三叉苦不同部位的提取率(%)
Table 1 Extract rate of parts of Evodia lepta
样口 根 茎 叶
提取率(%) 4.01 9.01 21.85
由表 1可以看出，三叉苦不同部位水提取率由大到
小的顺序依次为：三叉苦叶＞三叉苦茎＞三叉苦根。
2.2 三叉苦水提取物对H2O2的清除作用
以清除率为纵坐标，以三叉苦各部位水提取物的浓
度为横坐标，绘制水提取物对过氧化氢的清除曲线，见
图 1。由拟合曲线得到三叉苦各部位水提取物对过氧化
表2 三叉苦水提取物对(H2O2)的清除率(IC50)
Table 2 Scavenging rate of Evodia lepta to H2O2 (IC50)
样口 根 茎 叶
IC50(mg/ml) 2.63 1.60 10.40
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氢(H2O2)的清除率(IC50)见表 2。
图 1 表明：在鲁米诺 -过氧化氢发光体系中加入三
叉苦各部位的水提取物后，对 H 2O 2均有明显的清除作
用。随着体系中三叉苦提取物浓度的增加，其清除率
也增大，表明三叉苦提取液浓度与对过氧化氢的清除率
之间存在着明显的量效关系。当三叉苦各部位的提取物
的浓度增大到一定值时，其相应曲线渐趋近于平缓，清
除率随浓度升高变化不大，清除作用已接近最大。从
表 2的 IC50可知，三叉苦水提取物清除过H2O2的能力由
强到弱的顺序为：茎＞根＞叶。
2.3 三叉苦水提取物对 O 2·的清除作用
以清除率为纵坐标，以三叉苦各部位水提取物的浓
度为横坐标，绘制三叉苦水提取物对邻苯三酚 -CTMAB
体系产生的超氧阴离子自由基 O 2·的清除曲线，见图
2。由拟合曲线得到三叉苦各部位水提取物对O 2·的清
除率(IC50)见表 3。
用。随着体系中三叉苦提取物浓度的增加，其清除率
也增大，表明三叉苦提取液浓度与 O 2·的清除率之间
存在着明显的量效关系。当三叉苦各部位的提取物的浓
度增大到一定值时，其相应曲线渐趋近于平缓，清除
作用已接近最大。
从表 3 可知，三叉苦各部位的水提取物对 O 2·的
清除能力由强到弱的顺序为：茎＞根＞叶。
2.4 三叉苦水提取物对·OH的清除作用
以清除率为纵坐标，以三叉苦各部位水提取物的浓
度为横坐标，绘制三叉苦各部位水提取物对邻菲罗啉 -
抗坏血酸体系产生的羟自由基的清除曲线，见图 3。
100
80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
茎
根
叶
清
除
率
(%
)
浓度(mg/ml)
图1 三叉苦水提取物对H2O2的清除效应
Fig.1 Scavenging effects of extract of Evodia lepta to H2O2
100
80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
茎
根
叶
清
除
率
(%
)
浓度(mg/ml)
图2 三叉苦水提取物对O2·的清除效应
Fig.2 Scavenging effects of extract of Evodia lepta to O2·
图 2表明：在邻苯三酚 -CTMAB发光体系中加入三
叉苦各部位的水提取物后，对 O 2·均有明显的清除作
由拟合曲线得到三叉苦各部位水提取物对·OH的
清除率(IC50)见表 4。
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5
茎
根
叶清
除
率
(%
)
浓度(mg/ml)
图3 三叉苦水提取物对·OH的清除效应
Fig.3 Scavenging effects of extract of Evodia lepta to ·OH
表3 三叉苦水提物对O2·的清除率(IC50)
Table 3 Scavenging rate of Evodia lepta to O2·(IC50)
样口 根 茎 叶
IC50(mg/ml) 3.42 1.27 7.23
实验结果表明：在邻菲罗啉 -抗坏血酸化学发光体
系中加入三叉苦各部位水提取物后，对·OH均有显著
的清除作用。随着体系中三叉苦水提取物浓度的增加，
其清除率也显著增大，清除率与浓度之间存在着明显的
量效关系。当三叉苦各部位的提取物的浓度增大到一定
值时，其相应曲线渐趋近于平缓，清除率随浓度升高
变化不大。
从表 4三叉苦水提取物的 IC50可知，三叉苦茎和根
对清除羟自由基·OH的能力相等、三叉苦叶的清除能
力较弱。
3 结 论
3.1 实验结果证明，三叉苦是一种非常有效的天然抗氧
化药物，其各部位水提取物均含有天然抗氧化成分，对
体外产生的 H 2 O 2、O 2·和·OH均有明显的清除作用。
表4 三叉苦水提取物对·OH的清除率(IC50)
Table 4 Scavenging rate of Evodia lepta to O2·(IC50)
样口 根 茎 叶
IC50(mg/ml) 0.0074 0.0074 0.0135
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3.2 三叉苦抗氧化能力因其部位的不同而清除活性氧的
能力也不同。
3.3 三叉苦各部位的水提取物清除体外产生的活性氧的
能力随其浓度的增加而增大，但当浓度达一定值后，清
除率随浓度的变化渐趋平缓。
3.4 中草药提取物清除活性氧是一个复杂的反应，其
抗氧化能力的大小取决于它们夺氢反应、还原作用及生
成自由基的稳定性等诸多因素，也与植物中所含的化学
成分及有效成分的溶解性有关。对三叉苦的抗氧化有效
成分的分离和提纯、清除机理及构效关系等有待进一步
研究。
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收稿日期：2007-05-30 *通讯作者
作者简介：李瑜( 1 9 7 6 - )，女，副教授，博士，主要从事果蔬贮藏保鲜与深加工研究。
蒜氨酸酶的光谱特征研究
李 瑜 1 ,2，许时婴 2 ,*，庞凌云 1，乔明武 1
(1.河南农业大学食品科学技术学院，河南 郑州 450002；
2.江南大学食品学院，教育部食品科学与安全重点实验室，江苏 无锡 214036)
摘 要：本实验采用 Sephacryl S-200凝胶柱对新鲜大蒜中的蒜氨酸酶进行了分离纯化，并对纯化后的蒜氨酸酶的
紫外 -可见光谱、荧光发射光谱和圆二色性等光谱学特性进行了研究。结果表明，蒜氨酸酶的α-螺旋结构大约占
27%～30%，几乎不存在β-折叠结构，β-转角结构大约占 30%左右，无规卷曲所占比例大约占 40%左右。
关键词：大蒜；蒜氨酸酶；光谱学特性
Study on Spectral Characteristics of Alliinase
LI Yu1,2，XU Shi-ying2,*，PANG Ling-yun1，QIAO Ming-wu1
(1.College of Food Science and Technology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China；
2.School of Food Science and Technology, Southern Yangtze University, Key Laboratory of Food Science and Safety, Ministry of
Education, Wuxi 214036, China)
Abstract ：In this paper, alliinase from fresh garlic was purified with Sephacryl S-200 gel column and the spectral characteristic
of ultraviolet/visible spectra, fluorescence and CD spectroscopy were studied. The results showed that in alliinaseα-helix
structure accounts for about 27%～30%, β-pleated sheet structure almost doesnt exist, β-turn structure accounts for about 30%,
and random coil structure accounts for about 40%.
Key words：garlic；alliinase；spectral characteristics
中图分类号：TS201.25 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)07-0060-03