全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2010 年
收稿日期：2010－01－20
基金项目：国家科技部平台项目（2005DKA21000）；四川省中医药管理局项目（200673）
作者简介：汤 昊（1986－），女，郑州人，在读硕士生，（电话）13980409795（电子信箱）th8723＠163．com；通讯作者，宋良科（1954－），男，
副教授，主要从事中药资源与品质评价研究，（电子信箱）songlk591＠126．com。
第 49 卷第 7 期
2010年 7 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 49 No.7
Jul．，2010
青果为橄榄科植物橄榄 （Canarium album
Raeusch．）的干燥成熟果实或鲜果，又名青子、青榄、
黄榄等，为常用的清热、利咽、生津药物，用于治疗
咽喉肿痛、咳嗽、烦渴、鱼蟹中毒等，是卫生部公布
的第一批药食两用资源植物。近年来何志勇等［1－4］对
青果化学成分及药理研究进行了比较全面的介绍，
谌立巍等 ［5］对四川栽培青果的两个品种的果实、果
肉中没食子酸和总鞣质的含量进行了测定， 唐斌
等 ［6］对青果 5个品种进行了紫外吸收光谱的比较鉴
别，但至今均未见与食用、药用直接相关的青果多
糖含量测定的报道。 根据 2006～2008年青果种质资
源调查结果，暂以干果的长度和果径（干果中部周
长）平均值为青果种质的划分标准［7］，青果植株可分
为两种，一种是大果，开花时大部分为雌花序和少
量混合花序构成；另一种为小果，开花时全为混合
花序，而青果的雌花序形成的果实单果果径在 6 cm
不同种质青果的多糖含量比较研究
汤 昊，宋良科，董关涛，李小锋，代春初
（西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031）
摘要：通过正交试验对青果多糖的提取条件进行了优化。结果表明，青果多糖最佳提取条件为脱脂，料液
比 1∶20（g∶mL），提取功率 32W，提取时间 10 min，提取次数 3 次；测定不同种质、不同产地、不同采收时间
的总多糖含量。结果表明，总多糖含量为 0．45％～1．40％；广东产青果平均含糖量高于四川；大果含糖量比
小果高，果肉中含糖量大果几乎是小果的两倍。青果不同种质、不同产地含糖量差异较大，广东产含糖量
高，大果优于小果；大果在冬至采收，小果在 10 月下旬采收为佳。
关键词：青果；多糖；UV－Vis；硫酸－苯酚法；含量测定
中图分类号：S667．5；R284．2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2010）07－1694-03
Comparative Study of the Polysaccharide Content of Canarium album from
Different Germplasm
TANG Hao，SONG Liang－ke，DONG Guan－tao，LI Xiao－feng，DAI Chun－chu
（Life Science and Engineering College， Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031， China）
Abstract： Based on the analysis of the amout of polysaccharide， The author laid a foundation for establishing a standard for
quality control of C． album. Through single factor experiments and orthogonal experiments to find the optimum extraction
method of polysaccharide from Canarium album．； quantify the total polysaccharide of the 28 C． album samples of different
cultivated places and harvest time by sulfuric acid－phenol method using UV－Vis． The optimum extraction method of polysac-
charide from C． album was decreasing， the ratio of water to material was 20∶1， the power was 32W， the time of extraction
was 10 minutes， and extracting 3 times； All the results of the amount of total fruit polysaccharide in samples range between
0．4％ and 1．5％； the polysaccharide content of Guangdong was far higher than that from Sichuan； The polysaccharide content
of pulp was almost twice than that of the whole fruit； And the polysaccharide content of big fruit increased with time；While
that of small fruit firstly decreased then increased． There were big differences of the polysaccharide content on different culti-
vated varieties and harvest places， the polysaccharide content of Guangdong was very high and the polysaccharide content of
big fruit was higher than that of small fruit； the big fruit of C． album was most suitable to be picked at about winter sol-
stice，while the small fruit was most suitable to be picked at about late October．
Key words： Canarium album Raeusch； polysaccharide； UV－Vis； sulfuric acid－phenol method
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2010.07.050
第 7 期
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
吸
光
度
A
10 15 20 25 30 35 40 45
葡萄糖的质量浓度//μg/mL
以上， 混合花序形成的果实单果果径在 6 cm以下。
选择广东、四川的不同种质及不同采收期、不同栽
培地的青果，用单因素与正交试验确定青果多糖最
佳提取工艺，为青果药用、食用质量控制标准的制
定奠定一定基础。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 青果 青果购于或采于广东省高州市根子
镇、曹江镇、揭阳市，四川省夹江县甘江镇、合江县
虎头乡、江安县城关镇等地区；选择 2006～2008 年
26 个样本，鲜果洗净，30℃烘干，小型粉碎机粉碎成
粗粉，备用。
1．1．2 仪器 TU－1901 双光束紫外可见分光光度
计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电光分析天
平（上海天平仪器厂）；RE 52－86A 旋转蒸发器（上
海亚荣升华仪器厂）；SHZ－95A 循环水真空泵（河南
巩义子华仪器厂）；KQ2200DB 数控超声波清洗器
（昆山市超声仪器有限公司）等。
1．1．3 试剂 无水葡萄糖；苯酚；重蒸馏水；浓硫
酸；无水乙醇；95％乙醇；丙酮；乙醚等。 以上试剂均
为分析纯。
1．2 方法
1．2．1 标准葡萄糖溶液的配制 取干燥至恒重的
葡萄糖 1．992 0 g，置 50 mL 容量瓶中，加水至刻度，
溶解， 配成质量浓度为 39．84 μg ／ mL的葡萄糖标准
溶液。
1．2．2 苯酚溶液的配制 取苯酚 100 g，加铝片 0．1
g和碳酸氢钠 0．05 g，常压蒸馏，收集 182℃馏分。 精
密称取该馏分苯酚 2．5 g 至棕色瓶中， 加 50 mL 蒸
馏水溶解（50 mg ／ mL），摇匀置冰箱中备用。
1．2．3 标准曲线的绘制 精密吸取葡萄糖标准溶
液 0．3、0．4、0．5、0．6、0．7、0．8、0．9、1．0 mL，分别置于干
燥的 15 mL 试管中， 加蒸馏水补充至 1 mL， 加入
5％苯酚溶液 1．0 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸 5．0 mL，
摇匀，放置 5 min，置 80℃水浴中加热 15 min，取出，
冷却至室温。以 1．0 mL蒸馏水同上平行操作作为空
白对照，进行 UV－Vis 扫描，在 488 nm 波长处有最
大吸收峰。 以吸光度 A 为纵坐标，溶液质量浓度 C
（μg ／ mL）为横坐标作图，得到葡萄糖比色标准曲线
（图 1）， 曲线回归方程为 ：A＝0．019C－0．045，r＝
0．999 5。 可见葡萄糖质量浓度在 11．95 ～39．84
μg ／ mL 范围内 ， 溶液的吸光度 A 与质量浓度 C
（μg ／ mL）呈良好的线性关系。
1．2．4 供试样品溶液制备 取青果粉末 5g， 置入
100 mL锥形瓶，加入热水，超声提取，抽滤。 调节滤
液 pH值至 7左右，减压浓缩，加入 95％乙醇，沉淀。
将沉淀物溶于 50 mL 水中，过滤。 滤液再加入 95％
乙醇， 沉淀。 沉淀物用无水乙醇、 丙酮交替洗涤 3
次，得粗多糖。 取上述粗多糖，置于 25 mL 容量瓶
中，加蒸馏水至刻度，溶解，摇匀。精密吸取 1 mL，置
100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得粗多糖
溶液。 吸取上述溶液 1．0 mL，置于干燥的 15 mL 试
管中，加入 5％苯酚溶液 1．0 mL，摇匀，迅速加入浓
硫酸 5．0 mL，摇匀，放置 5 min，置 80℃水浴中加热
15 min，取出，冷却至室温，即得供试样品溶液。
1．2．5 脱脂试验 取 4 份 5 g 的青果粉末， 脱脂组
和不脱脂组各 2 份，分别置入 100 mL 锥形瓶中，其
中脱脂组先用石油醚脱脂 12 h， 自然挥干石油醚，
而不脱脂组不采用石油醚脱脂， 其余操作同 1．2．4。
488nm 处紫外分光光度法测定吸光度值，并代入回
归方程计算，求得两组粗多糖的平均质量浓度。
1．2．6 正交试验 选取料液比、提取功率、提取时
间和提取次数 4 个因素作为考察因素， 做正交试
验，确定提取的最佳工艺条件。 因素与水平设计见
表 1。
1．2．7 总多糖含量测定 测定待测样品溶液吸光
度值，代入回归方程计算，按如下公式计算多糖含
量：多糖含量＝W1×D×F ／W2×100％。 式中，W1为测得
的吸光度代入回归方程得出的待测样品中多糖质
量（μg）；D为供试样品溶液的稀释因子；F 为换算因
素（采用通用换算因素 0．9 ［8］）；W2 为供试样品重量
（μg）。
图 1 葡萄糖比色标准曲线
表 1 因素与水平
水平
1
2
3
料液比（W/V，A）
g∶mL
1∶10
1∶20
1∶30
提取功率（B）
W
32
40
48
提取时间（C）
min
5
8
10
提取次数（D）
次
1
2
3
因素
y＝0．019x－0．045
r＝0．999 5
0.591 0
0.750 5
0.659 5
0.509 0
0.434 5
0.339 5
0.271 5
0.196 0
汤 昊等：不同种质青果的多糖含量比较研究 1695
湖 北 农 业 科 学 2010 年
2 结果与分析
2．1 脱脂试验
由表 2 可以看出，脱脂组的多糖平均提取率高
于不脱脂组，所以，应该采取脱脂操作。
2．2 正交试验
正交试验结果如表 3 所示，4 个因素对结果的
影响由大到小分别为：提取时间＞提取次数＞提取功
率＞料液比，最佳提取条件为 A2B1C3D3，即提取时间
为 10 min，提取次数为 3 次，提取功率为 32W，料液
比为 1∶20（g∶mL，下同）。
2．3 不同产地、不同采收时间青果总多糖含量比较
对比广东和四川两个采收地的青果中总多糖
含量（表 4）可知，广东、四川两地的青果总多糖含量
为 0．45％～1．40％，广东地区的青果平均含糖量高于
四川地区的青果。
对比同一采收地点 （四川省夹江县甘江镇）
2008年不同采收时间的青果大、小果的果实和果肉
总多糖含量（表 5）可知，大果总多糖含量普遍高于
小果； 而大果的果肉含糖量几乎是小果的两倍；大
果果实中总多糖含量 2008 年 9 月至 12 月一直平
稳增长，而果肉总多糖含量在 2008 年 9 月至 10 月
下旬增长迅速，11 月至 12 月增长平缓；小果的果肉
和果实中多糖含量均随着时间变化，呈先下降后上
升趋势。
3 结论
本研究对青果总多糖的超声提取条件进行了
优化，研究了同一提取条件下青果不同产地与不同
采收时间总多糖的含量变化。 脱脂试验与正交试验
结果表明， 超声法提取青果多糖的最优条件为脱
脂，料液比 1∶20，提取功率 32W，提取时间 10 min，
提取次数 3次。 广东、四川两地的青果大、小果的总
多糖含量在 0．45％～1．40％之间，广东地区的青果平
均含糖量高于四川地区的青果；四川省夹江县甘江
镇 2008 年不同采收时间青果的总多糖含量比较结
果表明大果高于小果，而不同采收时间的青果的大
果果肉总多糖含量在 9 月至 10 月下旬增长迅速，
11 月至 12 月增长平缓， 青果大果以 11 月采收为
佳。 小果的果肉和果实中多糖含量随着采收时间推
移呈先下降后上升的趋势，以 12月采收较好。
本研究结果表明民间将大果主要用于食用与
大果总多糖含量高有关 ［7］，间接证明了民间的传统
做法有一定的科学性，确定食用与药用青果最佳采
收时间为制定稳定可靠的青果食用与药用的质量
标准提供了参考依据。
表 4 不同采收地青果的总多糖含量结果
广东省
四川省
采收地点
高州市根子镇（小果）
高州市曹江镇（小果）
潮州市揭阳市（小果）
高州市东岸镇（大果）
高州市长坡镇（大果）
高州市新垌镇（大果）
潮州市揭阳市（大果）
夹江县甘江镇（小果）
江安县城关镇 （小果）
夹江县甘江镇（大果）
合江县虎头乡 （大果）
含糖量//%
1.40
1.32
0.59
1.13
1.37
0.98
0.71
0.71
0.45
0.72
0.51
平均含糖量//%
1.10
1.05
0.58
0.62
表 2 脱脂组与不脱脂组多糖平均质量浓度比较
组别
脱脂组
不脱脂组
多糖质量浓度//μg/mL
13.473 7
9.710 6
表 3 正交试验结果
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
T1
T2
T3
x1
x2
x3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
60.737 0
67.394 8
56.421 1
20.245 7
22.464 9
18.807 0
3.657 9
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
66.263 3
54.210 6
64.079 0
22.087 8
18.070 2
21.359 7
4.017 6
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
64.236 8
51.158 1
69.158 0
21.412 3
17.052 7
23.052 7
6.000 0
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
55.210 6
58.079 0
71.263 3
18.403 5
19.359 7
23.754 4
5.350 9
多糖质量浓度//μg/mL
20.631 6
13.210 6
26.894 8
23.842 2
20.473 7
23.078 9
21.789 5
20.526 3
14.105 3
表 5 四川省夹江县甘江镇 2008 年不同采收时间
青果的总多糖含量比较
采收时间 ／ ／月－日
09－04（小果）
10－24（小果）
12－18（小果）
09－04（大果）
10－24（大果）
12－18（大果）
果实含糖量//%
0.63
0.42
0.54
0.66
0.81
0.83
果肉含糖量//%
0.73
0.53
0.61
0.71
1.32
1.37
1696
第 7 期
参考文献：
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［8］ 李松林，任延军，崔 熙． 猪苓多糖测定计算方法的探讨［J］．中
成药，1994，16（2）：57．
收稿日期：2010－03－31
基金项目：国家“863”专题课题（2008AA10Z118）；国家自然科学基金项目（30771163）
作者简介：胡 文（1983－），男，湖北宣恩人，硕士，研究方向为生物化学与分子生物学；通讯作者，谭艳平（1976－），男，湖北利川人，博士，
研究方向为植物遗传学，（电话）027－67843239（电子信箱）yanptan＠yahoo．com．cn。
第 49 卷第 7期
2010 年 7月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 49 No.7
Jul．，2010
籼稻成熟胚愈伤组织继代培养过程中
内源多胺含量的测定
胡 文，王维旭，周 杰，王春台，刘学群，谭艳平
（中南民族大学生命科学学院 ／生物技术国家民委重点实验室，武汉 430074）
摘要：采用高效液相色谱法对诱导产生的籼稻粤泰 B（YTB）成熟胚愈伤组织继代培养过程中内源多胺
组分和含量进行了测定。 结果表明采用 XDB－C18 柱流动相梯度（从 40％甲醇到 80％甲醇）洗脱可以使
Put、Spd 和 Spm 3 种多胺组分得到很好的分离。 水稻粤泰 B 成熟胚愈伤组织继代培养 5d 后体内 Put和
Spd 的含量明显增加，而 Spm 的含量基本不变。 推测 Put和 Spd 对水稻愈伤组织的生长发育可能有重要
的作用，可为优化水稻愈伤组织培养基的组分提供参考。
关键词：水稻；成熟胚；愈伤组织；高效液相色谱；多胺
中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2010）07－1697-04
Determination of Endogenous Polyamines Contents in Callus from Matured Embryo of
Indica Rice during Subculturing
HU Wen，WANG Wei－xu，ZHOU Jie，WANG Chun－tai，LIU Xue－qun，TAN Yan－ping
（Key Laboratory of State Ethnic Affairs Commission for Biological Technology， College of Life Science， South－Central University for
Nationalities， Wuhan 430074， China）
Abstract： The kinds and contents of endogenous polyamines in callus from matured embryo of indica rice YTB during
subculturing were determined by HPLC in this paper． The results showed that 3 polyamines， including putrescine （Put），
spermidine （Spd） and spermine （Spm） were well separated on XDB－C18 column with a mobile phase of grads （from 40%
methanol to 80% methanol）. The contents of Put and Spd in the callus from matured embryo at 5 d after subculturing were
obviously increased than those at 1 d， but no obvious change in the content of Spm was observed． This suggested that Put
and Spd might had some effects on the growth and development of rice callus， which provided a reference for optimizing the
composition of the substrate for culturing rice callus．
Key words： rice； mature embryo； callus； HPLC； polyamines
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!