全 文 ：反相高效液相色谱法测定木瓜药材及
饮片中齐墩果酸和熊果酸含量
吕美红1 ,谢晓梅1 ,查孝柱1 ,江茶龙1 ,侴桂新2 ,王峥涛2
(1.安徽中医学院药学院　现代中药安徽省重点实验室 ,安徽 合肥　230031;
2.上海中药标准化研究中心 ,上海　201203)
[摘要]目的　建立木瓜药材及饮片中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法。方法　采用反相高效液相色谱方
法:Shim-pack CLC-ODS(M)色谱柱(250 mm×4.6 mm ,5μm),柱温 20℃;流动相为甲醇-水-冰乙酸-三乙胺
(265∶35∶0.1∶0.05),流速 0.6 ml/ min;检测波长210 nm 。结果　齐墩果酸在0.162 ～ 3.310μg 范围内(r=
0.999 8),熊果酸在 0.195 ～ 3.910 μg 范围内(r=0.999 4)与峰面积线性关系良好;齐墩果酸平均回收率为
97.7%,RSD=2.0%(n=9),熊果酸平均回收率为 98.4%,RSD=2.5%(n=9)。木瓜药材及饮片齐墩果酸
含量为 0.248%～ 0.454%,熊果酸含量为 0.103%～ 0.508%。结论　所建立的齐墩果酸与熊果酸含量测定
方法操作简便 、准确 、重现性好 ,可用于不同产地木瓜药材及饮片的质量控制。
[关键词]反相-高效液相色谱法;含量测定;木瓜;药材;饮片;齐墩果酸;熊果酸
[中图分类号] R927.2　[文献标志码]A　[ DOI] 10.3969/ j.issn.1000-2219.2010.03.026
　　木瓜(Fructus chaenomelis)为蔷薇科植物贴梗
海棠 Chaenomeles S peciosa(Sw eet)Nakai干燥近成
熟的果实 ,是中医临床常用中药 ,具有平肝舒筋 、和
胃化湿之功效[ 1] 。其化学组成已报道的有有机酸
类 、三萜类 、黄酮类 、皂苷类 、多糖类成分等[ 2-4] ,但目
前对化学成分和其药效之间的关联未见深入研究的
报道 。根据文献 ,木瓜在含量上具有检测报道的成
分有齐墩果酸(oleano lic acid)、熊果酸(ur solic acid)
等[ 5] ,鉴于齐墩果酸和熊果酸的药理活性[ 6] ,同时在
本研究中 ,通过预试验发现齐墩果酸和熊果酸在木
瓜中有较高的检出特征 ,故选择这两个成分作为含
量测定的指标成分。齐墩果酸和熊果酸为同分异构
体 ,性质相近 ,较难分离 。本研究在文献[ 5 , 7] 的基
础上 ,采用反相高效液相色谱法二极管阵列检测器
测定了木瓜药材与饮片中齐墩果酸与熊果酸含量 ,
旨在为评价木瓜药材与饮片的质量提供科学依据 。
1　仪器与试药
1.1　仪器 　Ag ilent 1100 高效液相色谱仪:包括
G1311A 泵 、G1322 脱气机 、G1313AZ 自动进样器 、
G1313A 柱温箱 、G1315 DAD 、Agilent 1100化学工
作站;BP221D电子天平:Sar to rius公司;KQ-250DB
数控超声波清洗器:江苏省昆山市超声仪器有限公
司;石英亚沸高纯水提取器:江苏金城教学仪器厂 。
基金项目:《中华人民共和国药典》 2010 版一部标准研究项
目(YD-096)
作者简介:吕美红(1978-),男 ,硕士研究生
通讯作者:谢晓梅 , 0551-5169230 , x iex iaomei9401@sina.com
1.2　试药 　齐墩果酸 、熊果酸对照品(110709-
200505 、110742-200516 ,供含量测定用):中国药品
生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯;其他试剂均为
分析纯 。
木瓜药材与饮片收集于安徽 、湖北 、重庆 、云南 、
浙江等地 ,经本院周建理教授 、彭华胜副教授鉴定为
正品。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(M)
柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm);流动相:甲醇-水-冰乙
酸-三乙胺=265∶35∶0.10∶0.05;流速:0.6 ml/min;检
测波长:210 nm;柱温:20℃;进样量:20μl。
2.2　对照品溶液制备　精密称取齐墩果酸对照品
20.20 mg 、熊果酸对照品 19.54 mg ,分别置 10 m l
量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得齐墩
果酸 、熊果酸对照品贮备液 。
2.3　供试品溶液制备　取药材细粉约 0.5 g ,精密
称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 25 ml , 密塞 ,称
定质量 ,浸渍 2 h ,再称定质量 ,用甲醇补足减失的
质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得 。
2.4　线性范围考察　精密量取齐墩果酸对照品贮
备液 0.04 , 0.22 , 0.42 , 0.62 , 0.82 ml ,熊果酸对照
品贮备液 0.05 ,0.28 ,0.52 ,0.80 ,1.00 ml ,分别置 5
个 10 m l量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得齐
墩果酸和熊果酸混合对照品溶液系列 。分别精密吸
取各混合对照品溶液 20 μl ,依序注入液相色谱仪 ,
以色谱峰面积(y)为纵坐标 ,对照品进样量(x)为横
坐标 ,绘制标准曲线 ,建立回归方程为 ,齐墩果酸:
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y =839.11 x+2.17(r=0.999 8);熊 果 酸:y =
784.10 x +11.59(r=0.999 4)。结果表明 ,齐墩
果酸进样量为 0.162 ～ 3.310 μg ,熊果酸进样量为
0.195 ～ 3.910 μg 时与色谱峰面积呈现良好的线性
关系 。
2.5　精密度试验　取同一供试品溶液 ,连续进样 6
次 ,齐墩果酸峰面积 RSD 为 0.18%,熊果酸 RSD
为 0.30%;表明其精密度良好。
2.6　重复性试验 　取同一批木瓜样品 6 份 , 按
“2.3”项下制备供试品溶液 ,进样测定 ,齐墩果酸含
量的 RSD 为 1.07%, 熊果酸含量的 RSD 为
1.31%,表明其重复性良好。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于 0 ,
2 ,4 ,8 ,12 , 24 ,48 h 进样测定 ,齐墩果酸峰面积 RSD
为 0.27%,熊果酸峰面积 RSD 为 0.40%。表明供
试品溶液在 48 h内稳定。
2.8　加样回收试验　取同一批已知含量的木瓜样
品适量 ,精密称定;分别以高 、中 、低 3个浓度水平准
确加入一定量的齐墩果酸和熊果酸对照品 ,按“2.3”
项下制备供试品溶液并进样测定 ,计算加样回收率 ,
结果见表 1和表 2。结果显示本方法准确度良好。
表 1　齐墩果酸加样回收率试验
称样量
/g
样品量
/mg
加入量
/mg
测得量
/ mg
回收率
/ %
平均回收
率/ %
RSD
/ %
0.253 6 0.537 6 0.444 0.960 95.0
0.252 6 0.535 5 0.444 0.969 97.6
0.252 4 0.535 1 0.444 0.966 97.0
0.241 3 0.511 6 0.566 1.064 97.7
0.252 8 0.535 9 0.566 1.109 101.2 97.6 1.9
0.257 9 0.546 7 0.566 1.096 97.2
0.245 9 0.521 3 0.687 1.181 96.0
0.251 1 0.532 3 0.687 1.215 99.4
0.252 4 0.535 1 0.687 1.203 97.2
表 2　熊果酸加样回收率试验
称样量
/g
样品量
/mg
加入量
/mg
测得量
/ mg
回收率
/ %
平均回收
率/ %
RSD
/ %
0.253 6 0.806 4 0.625 1.410 96.6
0.252 6 0.803 0 0.625 1.438 101.5
0.252 4 0.802 6 0.625 1.419 98.7
0.241 3 0.767 3 0.821 1.556 96.1
0.252 8 0.803 9 0.821 1.636 101.4 98.4 2.5
0.257 9 0.820 1 0.821 1.612 96.5
0.245 9 0.782 0 1.016 1.761 96.3
0.251 1 0.798 5 1.016 1.829 101.4
0.252 4 0.802 6 1.016 1.792 97.3
2.9　样品含量测定　取木瓜药材及饮片共 14批 ,
按“2.3”项下制备供试品溶液 ,按“2.1”项下色谱条
件进行测定 ,外标法计算含量 ,结果见表 3。色谱图
见图 1。
3　讨论
3.1　关于色谱条件的建立　采用十八烷基硅烷键
合硅胶色谱柱 , 试验了甲醇-水 、甲醇-乙腈-水 、乙
腈-水系统 ,并在流动相中加入磷酸 、冰乙酸 、三乙胺
等酸性或碱性试剂。通过配比调整 ,发现甲醇-水-
冰乙酸-三乙胺(265∶35∶0.10∶0.05)在所用的色谱
柱上容易获得较好分离效果 ,不同来源的木瓜样品
中 ,齐墩果酸与熊果酸之间以及它们与共存组分之
间分离度均能达到 1.5以上;在二极管阵列检测器
上获得木瓜样品中具有齐墩果酸和熊果酸相同保留
时间的色谱峰的光谱图与其对照品一致;齐墩果酸
和熊果酸分子结构中存在孤立双键 ,最大吸收波长
约在 205 nm ,理论上应考虑选择蒸发光散射检测
器 ,通过预试验 ,发现本系统采用蒸发光散射检测器
的响应信号不如紫外检测器响应信号稳定 ,同时考
虑紫外检测器的普遍性 ,故选择紫外检测方法。通
过二极管阵列检测器在 205 ～ 220 nm 波长范围检
测齐墩果酸和熊果酸的峰面积 ,以 210 nm 处有高
的检测响应和低噪音干扰 ,故确定检测波长为 210
nm 。考察不同柱温下分离组分的色谱行为 ,发现降
低柱温对分离有利 。在所建立的色谱条件下 ,齐墩
果酸与熊果酸之间分离度均较好(R >1.68),与相
邻组分色谱峰分离度也达到规定要求;齐墩果酸和
熊果酸的保留时间分别在 27.9 min和 29.3 min。
3.2　关于供试品溶液的制备　在提取溶剂上 ,考察
了甲醇 、无水乙醇 、乙酸乙酯 、三氯甲烷和乙醚 ,结果
表明甲醇和乙酸乙酯作为提取溶剂时齐墩果酸 、熊
果酸提取效率较高;从经济考虑 ,本实验采用甲醇为
提取溶剂 ,并对溶剂用量进行试验。分别采用提取
溶剂体积(ml)与药材质量(g)比为 10∶1 , 20∶1 ,
30∶1 ,40∶1和50∶1进行试验 ,确定加甲醇体积为 25
m l。在提取方式上 ,采用了加热回流 、索氏提取 、超
声与浸渍 4种不同提取方式 ,结果表明超声与浸渍
的提取效率无明显差别 ,提取率较高 ,考虑浸渍的简
便性 ,本实验采用浸渍提取方式;并对浸渍时间进行
考察 ,结果表明:浸渍时间 2 , 4 , 6 , 8 h 和放置过夜 ,
对木瓜中齐墩果酸和熊果酸的提取率无明显改变 ,
本实验采用室温下浸渍 2 h 。
3.3　木瓜药材与饮片的含量及比较　现行版《中华
人民共和国药典》检测项目包括药材性状 、显微鉴
别 、薄层色谱鉴别 、检查 、浸出物等 ,无含量测定项 ,
因此在木瓜有效成分或指标性成分上缺乏量化标
准 。本实验选择齐墩果酸与熊果酸为其含量测定的
73安徽中医学院学报 第29卷 第3 期 2010年6月 JOURNAL OF ANHUI TCM COLLEGE Vol.29 No.3 Jun.2010
指标成分 ,从检测结果看 ,这两种三萜酸成分是木瓜
药材和饮片的共有成分 ,在 14批样品中均有明显的
检出量 ,其中齐墩果酸和熊果酸的含量总和最高值
为 0.798%,最低值为 0.396%(该样品含水量较高 ,
超出《中华人民共和国药典》15.0%的规定要求)。
在有限数量的测量中 ,木瓜药材含量平均值略高于
饮片 ,本实验中由于饮片由非测量的药材加工而成 ,
故难以讨论其规律性差异;但齐墩果酸与熊果酸在
不同产地收集来的药材中的分布存在明显差异 ,湖
北木瓜齐墩果酸含量高于熊果酸;宣木瓜和川木瓜
的熊果酸含量常高于齐墩果酸。该现象是否与产地
直接相关尚需更多数据支持 。
表 3　木瓜药材和饮片中齐墩果酸和熊果酸含量(n=2)
编号 药材或饮片来源 含量/ %齐墩果酸 熊果酸 总含量/ %
1 药材 , 2007 年收集自湖北长阳 0.454 0.148 0.602
2 药材 , 2008 年收集自湖北长阳 0.559 0.104 0.663
3 药材 ,收集自重庆石壕 0.347 0.437 0.784
4 药材 ,产地:四川 0.192 0.256 0.448
5 药材 ,收集自安徽宣城(统货) 0.284 0.379 0.663
6 药材 ,采自安徽宣城 0.208 0.312 0.520
7 药材 ,购自云南 0.290 0.508 0.798
8 饮片 ,批号 20071201 , 安徽生产 ,产地:安徽 0.248 0.150 0.396
9 饮片 ,购自药房 ,批号产地不详 0.294 0.292 0.596
10 饮片 ,批号 20080821 , 浙江生产 ,产地:安徽 0.282 0.220 0.502
11 饮片 ,批号 20070801 , 安徽生产 ,产地:湖北 0.534 0.103 0.637
12 饮片 ,批号 090501 , 安徽生产 ,产地:湖北 0.309 0.365 0.674
13 饮片 ,批号 20090301 , 安徽生产 ,产地:安徽 0.391 0.198 0.589
14 饮片 ,批号 20081201 , 安徽生产 ,产地:四川 0.170 0.234 0.404
图 1　不同样品齐墩果酸和熊果酸的 RP-HPLC 图谱
A:对照品;B:木瓜药材;C:木瓜饮片;1:齐墩果酸;2:熊果酸
　　木瓜饮片是将药材除去杂质 ,洗净 ,润透 ,切薄
片 ,干燥而得。木瓜药材质地坚硬 ,切薄片时需要软
化 ,水润软化时久泡易损失有效成分;蒸制软化切片
可缩短加工时间 ,又易干燥;鲜木瓜直接切片干燥则
可省去中间过程;不同加工方法对质量的影响有待
进一步研究。
参考文献:
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京:化学工业出版社 , 2005:41.
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阳药科大学学报 , 2006 , 23(12):761.
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卫生出版社 , 2006:57.
(收稿日期:2009-08-07)
Content Determination ofOleanolic Acid and Ursolic Acid in the Medicinal Mate-
rials and Prepared Slices of Fructus Chaenomelis by Reversed Phase-High Per-
formance Liquid Chromatography
74 安徽中医学院学报 第 29卷 第3期 2010年 6月 JOURNAL OF ANHUI TCM COLLEGE Vol.29 No.3 Jun.2010
过氧化甲酰胺的合成及其急性毒性试验
刘德娟 ,谷薇薇 ,张国升
(安徽中医学院药学院 安徽 合肥　230031)
[摘要]目的　合成新化合物过氧化甲酰胺 ,对其合成工艺进行优化 , 并观察小鼠对它的急性毒性反应。
方法　采用正交试验法 ,以合成过氧化甲酰胺的产率为指标进行试验。通过排水集气法收集氧气 。以过氧
化甲酰胺的最大浓度给小鼠灌胃给药 ,进行急性毒性试验。结果　最佳合成工艺为:用过氧化氢和甲酰胺质
量比 5∶2 ,在(10±2)℃水浴温度下反应后 ,冷藏时间 24 h 。过氧化甲酰胺实际产氧量为 148.0 ml/g 。急性
毒性试验未出现小鼠死亡 ,未测出 LD50 ,过氧化甲酰胺的最大给药量为 5.64 g/kg 。结论　该合成工艺合
理 ,产率高 。合成的过氧化甲酰胺产氧量高 ,具有较好的安全性 。
[关键词]过氧化甲酰胺;合成工艺;急性毒性反应
[中图分类号] R914　[文献标志码] A　[ DOI] 10.3969/ j.issn.1000-2219.2010.03.027
　　甲酰胺具有活泼的反应性和特殊的溶解能力 ,可
用作有机合成原料 、纸张处理剂 、纤维工业的柔软剂 、
动物胶的软化剂 ,还可用作测定大米中氨基酸含量的
分析试剂。在有机合成中 ,医药方面的用途居多 ,在
农药 、染料 、颜料 、香料 、助剂方面也有很多用途。
过氧化尿素是过氧化氢以氢键方式结合到尿素
作者简介:刘德娟(1981-),女 ,硕士研究生
通讯作者:张国升 , 13956973876 , cr azy go007@tom.com
上形成的 1∶1加合物 ,过氧化尿素具有漂白 、杀菌 、
消毒作用 ,氧化性能温和 ,无毒无公害 ,在国外已得
到广泛应用[ 1] 。其主要用途为:缓解胃黏膜局部低
氧[ 2] ,可以用作动物饲料添加剂。据报道 ,过碳酰胺
是优良的土质改良剂 ,可对根部进行供氧及施加氮
肥[ 3] ,过氧化尿素还可以有效地提高士壤的透气性
和土壤中氮的利用率[ 4] 。过氧化尿素还可以用作氧
化剂 、消毒剂[ 5] 、种子萌发促进剂等 。过氧化尿素与
过氧化甲酰胺是相似的物质 ,过氧化甲酰胺也是过
L Mei-hong 1 , X IE X iao-mei1 , Z H A X iao-zhu1 , J I ANG Cha-long 1 , CHOU Gui-xin2 ,
WANG Zheng-tao2
(1.Anhui College o f Tradi tional Chinese Medicine &Anhui Key Laboratory for Modern Chinese Medi-
cine , Anhui He fei　230031 , China;2.Shanghai Research &Development Centre f or S tandard ization o f
Chinese Medicine , Shanghai　201203 , China)
[ Abstract]Objective　 To establish a method for the determination of o leanolic acid and ursolic acid in the
medicinal materials and prepared slices o f Fructus Chaenomel is.Methods　 A method of re served phase-
high performance liquid chromatography (RP-HPLC)was employed.Oleanolic acid and ursolic acid w ere
separated on Shim-pack CLC-ODS (M)(250 mm×4.6 mm ,5μm).The mobile phase consisted of me tha-
nol-water-glacial acetic acid-t rie thylamine(265∶35∶0.1∶0.05), the column temperature was kept at 20℃,
the f low rate w as 0.6ml/min , and the detective w avelength w as se t at 210 nm .Results　The linear rela-
tionship ranged from 0.162 to 3.310 μg (r =0.999 8)fo r o leanolic acid , and 0.195 to 3.910 μg (r=
0.999 4)fo r ursolic acid.The average recove ry rates w ere 97.7%(RSD=2.0%,n=9)fo r oleano lic acid ,
and 98.4%(RSD=2.5%, n=9)fo r ursolic acid , respectively.The contents of o leanolic acid and ursolic
acid in F ructus Chaenomel is and its prepared slices ranged from 0.248% to 0.454%, and 0.103% to
0.508%, respect ively .Conclusion 　 The established method of content determinat ion for the oleanolic
acid and urso lic acid is simple , accurate , reproducible , and suitable for the quality cont rol o f the medicinal
mate rials and prepared slices of F ructus Chaenomelis f rom dif ferent places.
[ Key words] Reserved phase-high perfo rmance liquid chromato graphy;Content determinat ion;Fructus
Chaenomelis;Medicinal materials;Prepared slices;Oleano lic acid;Urso lic acid
75安徽中医学院学报 第29卷 第3 期 2010年6月 JOURNAL OF ANHUI TCM COLLEGE Vol.29 No.3 Jun.2010