全 文 ：·论　著·
基金项目:国家科技支撑计划 (编号 2007BAI27B00:课题编号 2007BAI27B06)
作者简介:李锐 , 硕士 , 主管药师;研究方向:中药检验及天然药物分析;T el:(0898) 66832971;E-mai l:sharp121@163.com
HPLC法测定牛大力中高丽槐素的含量
李　锐 , 陈国彪 (海南省药品检验所 , 海口　570216)
摘要:　目的 建立 HPLC法测定牛大力中高丽槐素含量的方法 。方法 采用依利特 YWG C18色谱柱 , 流
动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液 (40∶60), 检测波长为 310nm , 流速为 1.0mL · min-1 , 柱温为 27℃。结
果 高丽槐素进样量在 0.06047 ～ 0.9675μg 范围内线性关系良好 (r=0.9999);平均回收率为 99.5%,
RSD为 1.80%(n=9)。结论 该方法可用于牛大力中高丽槐素的含量测定。
关键词:　牛大力;高丽槐素;HPLC
中图分类号:R927.2;R284　　文献标识码:A 　　文章编号:1002-7777 (2011)02-0124-03
Determination of Maackiain in Root of Mil lettia Speciosa by HPLC
Li Rui and Chen Guobiao (Hainan Provincial Institute fo r Drug Control , Haikou 570216)
ABSTRACT:　Objective To establish a HPLC me thod for determination of M aackiain in root of M illet tia
speciosa.Methods YWG C18 column w as used as chromatog raphic column.T he mobile phase w as
acetonit rile-0.1% acetic acid solution (40∶60).The f low rate w as 1.0mL · min-1 and the detection
w avelength w as set at 310nm .The column temperature w as maintained at 27℃.Results The calibration
curve o f Maackiain w as in good linearity o ver the range of 0.06047 ～ 0.9675μg(r=0.9999).The average
recovery w as 99.5%, with RSD of 1.80%(n=9).Conclusion The method is suitable fo r determination of
Maackiain in root o f Millet tia speciosa.
KEYWORDS:　Maackiain;roo t of Mil le tt ia speciosa;HPLC
　　牛大力是豆科蝶形花亚科崖豆藤属植物美丽崖
豆藤 Mil let tia speciosa 的干燥根。又称大力牛 、
山莲藕 、 倒吊金钟等。始载 《生草药性备要》 , 其
性平 , 味甘 , 归肺 、 肾经 。具有补虚润肺 、 强筋活
络的功能 , 主治肺热 、肺虚咳嗽 、 肺结核 、 风湿性
关节炎 、 腰肌劳损等 。牛大力是广东 、 海南等地著
名的滋补中药 , 用于制作药膳 、 药酒等[ 1-6] 。牛大
力中具有较高含量的高丽槐素[ 7-10] , 本文通过试验
建立了 HPLC 法测定牛大力中高丽槐素的含量 ,
方法简便 , 分离效果好 , 专属性强 , 可以作为牛大
力质量控制的定量方法。
1　仪器与试药
LC-2010 AH T 型高效液相色谱仪 (日本岛津
公司)。
高丽槐素对照品 (上海永恒生物科技有限公
司 , 批号:FB-09002;分子式:C16 H 12O 5 ;分子
量:284.268;纯度 99.9%;CAS 编号:19908-
48-6;标定方法:HPLC)。牛大力样品 (购自海
南海口 、海南琼中 、海南儋州 、 海南三亚 、海南琼
海和广西玉林 , 经海南省药品检验所中药室陈国彪
主任鉴定均为正品牛大力)。乙腈为色谱纯 , 水为
纯净水 , 其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:依利特 YWG C18 柱 (4.6mm ×
250mm , 10μm);流动相:乙腈-0.1%醋酸水溶液
(40 ∶60);流速:1.0mL · min-1 ;检测波长:
310nm;柱温:27℃;进样量:20μL 。理论板数
按高丽槐素峰计算应不低于 5000 , 高丽槐素峰与
其它杂质峰分离度为 1.65 , 见图 1。
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a.对照品;b.供试品;1.高丽槐素。
图 1　牛大力 H PLC 色谱图
2.2　对照品溶液及供试品溶液的制备
对照品溶液:取高丽槐素对照品加甲醇制成
24.19μg · mL-1溶液 , 即得。
供试品溶液:取牛大力药材粉末 (过 3号筛)
约 5.0g , 加入甲醇 25mL , 精密称定重量 , 超声
(功率:300W , 频率:40kHz)30min , 放置室温 ,
用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 ,
即得 。
2.3　线性关系考察
精密称取高丽槐素对照品加甲醇制成 60.47
μg ·mL-1溶液 , 作为储备液。精密吸取 0.5 、 1 、
2 、 4 、 8mL , 分别置于 10mL 量瓶中 , 加甲醇稀释
至刻度 , 摇匀。按照以上色谱条件 , 分别进样
20μL , 以高丽槐素进样量 (μg)为横坐标 , 峰面
积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 计算回归方程:
Y =1.581×106 X +3.050×103 　r=0.9999
结果表明 , 高丽槐素在 0.06047 ～ 0.9675μg 范围
内线性关系良好 。
2.4　精密度试验
取对照品溶液 , 重复进样 6次 , 记录色谱峰面
积 , 其峰面积平均值为 756948 , RSD=0.18%。
2.5　重复性试验
取同一样品 6份 , 分别按供试品溶液的制备方
法平行制备供试品溶液 , 按色谱条件进样 , 测定 。
结果表明 , 样品中高丽槐素的平均含量为 75.1
μg · g-1 , RSD=1.17%。
2.6　稳定性试验
取同一供试品溶液 , 按上述色谱条件 , 分别于
0 、 2 、 4 、 6 、 8 、 10h 测定 , 其峰面积的平均值为
482164 , RSD=0.58%。表明供试品溶液在 10h 内
基本稳定 。
2.7　回收率试验
精密称取已知含量的同一样品 9份 , 每份称取
约 2.5g , 精密加入高丽槐素对照品甲醇溶液
(39.00μg · mL-1)4 、 5 、 6mL 各 3份 , 加甲醇至
25mL , 按供试品溶液制备方法制备测试溶液 , 测
定含量 , 计算回收率 , 结果见表 1 。
表 1　回收率试验结果
样品含量
(μg)
加入量
(μg)
实测总量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
186.6 156.0 337.0 96.4
190.9 156.0 347.9 100.6
188.5 156.0 343.1 99.1
188.4 195.0 379.0 97.7
191.5 195.0 389.8 101.7 99.5 1.80
191.0 195.0 389.0 101.6
190.0 234.0 419.8 98.2
190.2 234.0 423.9 99.9
190.1 234.0 424.6 100.2
2.8　样品测定
取 7批样品 , 按供试品溶液制备方法制备供试
品溶液 , 分别测定含量 , 结果见表 2。
表 2　7 批样品的测定结果 μg · g-1
产地 海南海口
海南
琼中
海南
儋州
海南
三亚
海南
琼海
广西
玉林
广西
玉林
含量 75.1 80.6 64.5 100.2 53.8 96.1 95.8
3　讨论
3.1　供试品溶液制备方法的确定
据参考文献报道[ 11-12] , 高丽槐素含量测定时供
试品溶液的制备方法均为回流提取法 , 其提取步骤
相对较多 , 提取时间较长 , 因此尝试采用甲醇超声
的方法进行提取 , 获得了良好的提取效果 , 大大提
高了效率。在考察了不同的甲醇用量和超声时间
后 , 最终确定以上供试品溶液制备条件。
3.2　色谱条件的确定
紫外扫描高丽槐素 , 在波长 287 、 310nm 下有
较大吸收 , 参考文献[ 4-5] 并通过试验比对 , 最终确
定在检测波长为 310nm 、流动相为乙腈-0.1%醋酸
水溶液 (40∶60)时 , 所得色谱图峰形和分离度最
佳 , 且杂质峰较少 。
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(下转第 140页)
125中国药事 2011年第 25卷第 2期
否可行;格式 、 用语等是否符合现行的 《中国药
典》 。中药制剂一般要求对处方 1/3药味进行鉴别 ,
含毒性药的应进行限量检查或含量测定;化药制剂
应对主药进行鉴别及含量测定 , 对稳定性差的制剂
另设有关物质检查。质量标准一般依据注册检验药
检所复核的标准进行修改审核 。制剂同品种 (主要
为化药制剂)的质量标准采用就高不就低的原则进
行统一。特殊情况如制备工艺不同和适应症或功能
主治不同 , 可允许适当有所差别。
3.5　说明书
制剂说明书应当包含安全性 、 有效性的重要科
学数据 、 结论和信息 , 说明书的项目及内容应完整
齐全 。按国家对药品说明书的要求 , 制剂说明书的
项目至少应有 [制剂名称] 、 [成份] 、 [性状] 、 [功
能主治] 或 [适应症] 、 [规格] 、 [用法用量] 、 [不
良反应] 、 [禁忌] 、 [注意事项] 、 [贮藏] 、 [包装] 、
[有效期] 、 [执行标准] 、 [批准文号] 、 [配制单位]
等项目 , 其余 [孕妇及哺乳期妇女用药] 、 [儿童用
药] 、 [老年用药] 、 [药物相互作用] 、 [临床试验] 、
[药理毒理] 、 [药代动力学] 依据各品种情况填写 。
如为委托配制 , 应填写被委托配制的机构;不良反
应 、 禁忌 、注意事项不能不写或少写 , 不准避重就
轻 , 或写不良反应后未写处理方法;审评时制剂处
方中的药物有不良反应报道的 , 应增加该内容;缺
乏不良反应文献资料及报道的 , 一律注明 “尚不明
确” ;禁忌 、注意事项未写明或缺乏资料的 , 一律
写明 “尚不明确” 。说明书必须与制剂标准相匹配 ,
一般依据标准的相关内容及申报的说明书进行修改
审核 。
3.6　有效期
根据制剂药物的理化性质及包装材料 , 结合稳
定性试验资料确定制剂的有效期。
4　审评成效
以临床安全合理用药为目标 , 制剂审评中采取
多种措施 , 创新审评方法 , 强化同医院及注册检验
药检所的沟通交流 , 加大了化药制剂标准及说明书
的统一力度 。经过清理整顿 , 剔除了已有上市药品
的医院制剂 , 淘汰了含甲醛 、二氯化汞 、 氯化氨基
汞的制剂 , 以及处方不合理和存在用药安全隐患的
制剂等 646个品种规格 。对审评通过的 1667个品
种 , 认真修订审核标准及说明书 , 弄清了全省医院
制剂品种情况 , 建立了全省医院制剂品种数据库 、
质量标准及说明书数据库 , 为医院制剂监督管理打
下了坚实的基础 , 为规范制剂配制使用 、 保证制剂
质量做出了积极贡献。
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