全 文 ：河南医学院学报1 91 9年第拍卷第1 期
六方藤的抗肿瘤 、 毒性及其对免疫功能影响的实验研究
河南省医学科学研究所药理组 张草沐 陈正玉 林 晨 朱咪哪
六方藤 (T ri p te ry g iu mh y p og l au -
eu m (Hel v) H
u teh ) 又名昆明山海棠 、
紫金藤 、 火把花等 ,系卫矛科雷公藤属植物 ,
分布于云南等省 , 资源丰富 ,六方藤民间用于
肿瘤及关节炎等。 临床上业已证明它对类风
湿性关节炎 、 全身性红斑性狼疮以及麻风反
应等有一定 疗 效 ( 1、 2 ) , 国外 K u p e h a n从我
国台湾的同科属植物雷公藤 ( T r i p et r y g i -
u m W i l f
o r d i i H o o k ) 中分离出三种微量
成份 ,即雷藤素 甲 ( t r i p t o l i d e ) , 雷藤素 乙
( t r i p d i o l i d e )及雷藤酮 ( t r i p t o n i d e ) 。 实
验证明雷藤素甲、 乙有很高的抗肿瘤活性 (3) ,
六方藤与雷公藤为同科属植物 , 它 有 没 有
抗肿瘤活性 , 其中是否含有与雷公藤相似的
抗肿瘤成份 , 这是值得研究的 。 首先我们对中
国科学院昆明植物所提供的六方藤几种粗提
取 物 ( T 一 I 、 I 、 l 、 万 )进行了抗肿瘤筛选 ,
在发现 T 一 I 有明显抗 L 。 : 。白血病的基础上 ,
通过氧化铝柱及硅胶层析 , 从中分离出一微
量成份 , 得率为 0 . 0 0 0 5拓 , 其紫外 , 红外光谱 ,
核磁共振和质谱等数据 , 与报导的雷藤素甲
相一致 `4 , (见甲 1 ) 。
本文就六方藤及雷藤素甲的抗肿瘤作用
及雷藤素甲的毒性以及对动物免疫功能的影
响报道如下 :
材 料 与 方 法
本实验所用六方藤提取物及雷藤素甲均
由中国科学院昆明植物所供给 。 T 一 I , I , l
及丁分别为六方藤去内脂部份 , 内脂集中部
份 , 六方藤的乙酸乙醋及乙醇提取物 ,实验时
加少许 T w e e n 一 8 0研溶成混悬剂 。 雷藤素甲以
少许乙醇溶解后用蒸馏水稀释成所需浓度 。
抗肿瘤试验 : 所用移植性肿 瘤 有 L 。 : `
白血病 , 5 3 , , 艾氏腹水癌实体型 ( E C S ) 、
网织细胞肉瘤 ( A S R ) , 肝癌实 体 型 ( H
C S ) 及大鼠W 一 25 6等。 按常规接种 , 均 于接
种后第二天腹腔注射给药。 L 。 , 。及W 一 25 6均
连用六天 , 其余均连 用 1 0天 , L 。 , 。计 算死亡
时间 , 与对照组比较 , 计算存活期延长率 , 其
余瘤株计算肿瘤生长抑制率 , 并进行 t测验 。
毒性试验 : 按 常 规 方 法 进 行急 性 毒
性试验 , 按 W ie l 氏 法计 算 半 数 致 死 量
( L D
。 。
)( 5)
; 用大白鼠作亚急性毒性试验 , 观
察并记录体重 、 肝 、 肾功能及血象 检 查 结
果 , 停药后 10 天处死动物 , 观察脏器变化 ,
并作病理检查 。
免疫试验 : 以溶血素测定及移植物抗宿
主反应 ( G V H反应 ) 分别作为测定体液 及
细胞免疫功能的指标 , 方法详 见 前文 (6 ) 。
此外并采用肿瘤相伴免 疫 ( T u m 。 卜 c o n c 。 -
m i t a n t Im m u n i t y ) 进一步观察雷藤素甲
对细胞免疫的影响 (7 ) 。
结 果
一 、 抗肿瘤作用
1
. 六方藤粗提取物的抗肿瘤作用 :
DOI : 10. 13705 /j . i ssn. 1671 -6825. 1981. 01. 004
一 2启含-
- - - - - - - - - - - ~一- - ~
观 察 T 一 I, I , I , 丁对 小 鼠S 。 7 , T 一 正有一定作用外 , 其余均无 疗 效 ( 见表
E C S及 L 。 ; 。的抗肿瘤疗 效 。 结 果 发 现 , 1 ) 。 T 一 I 及 T 一 l 对 L 。 : 6有 明 显 疗 效 ,
T 一 I
,
I
, 及 W对 E C S均有明显抗肿 瘤 作 在三次实验中 , 有二 次 生 存 期 延 长 率 均
用 , 它们的瘤重抑制率分别为45 . 7厂 , 4 万 在 25 劣以 上 , T 一 I 及 T 一正 则 无 作 用 ( 见
及 5 5 . 1万 ( P < 0 . 0 2 ) , 对 S 。 7 除 T 一 I 及 表 2 ) 。
表 1 六方藤提取物对移植性肿瘤的影响
剂 量、 用 法
药 物 瘤 株 竺
~遇`塑一迩犁竺~ }竺{始 】 末 }对 照 }治 疗 }抑制 % } P 值( 毫克 /公斤 /天 )
厅通n0
. .二
45邓OU,工J咭7自匕斤才OU工.…On甘nó“71了.一厅`口分曰翻,.…11止,上`lùb, .ō月,nù.…J住八01合几O自叮,目山曰勺O枯甘1占nō.…血U八曰ù,人二叮山n乙2,曰T一 I了一 I ’T一 I
T一万
2 5 0 x 1 0 i p
2 5 0 x 10 i P
1 0 0 x 1 0 i p
1 00 x 1 0 i p
E C S < 0
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< 0
。
01
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一
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T一 I
T一 I
T一 l
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S”
始 末
8 8
8 7
8 8
8 8
4 6
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.…n石,口.工1人山八廿O甘O刁留,土产O尸0尸`0J. .…n`,自曰乃2.0冉0n甘内」.…,上,曰n14占2,曰20自八nU”né1几.…nùn甘六U` h, .己2勺`2今ó
方藤提取物对 L 。 ; 。白血病的影响
物 数 } 体
ì、.,一/ù知“表 2
剂 量 、 用 法
药 物 P 值
( 毫克 /公斤 /天 ) { 始 末 始
重 ( 克 )
} 末
平均存活 期 ( 天 )
对 ,
}
。 疗
存 活 期
延 长 %
T一 I
T一 l
T一 l
T一 W
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T一 I
T一万
T一 I
T一 I
25 0 x 6 i P
25 0 x 6 i P
10 0 x 6 i P
10 0 又 6 i P
2 5 0 x 6 i P
1 0O x 6 i P
10 0 x 6 i P
2 5 0 x 6 i P
1 00 x 6 i P
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一
0
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。
0
2 1
.
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2 1
.
0
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一 2
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一
2
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。
2
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一
2
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。
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。
6
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1 8
。
8
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。
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一 2
7
。
2
7
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一
3
6
一
3
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6
.
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8 。 3
7
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0
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9 . 0
8
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连3。 0
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一
2
1 2
。
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.
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一
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0 1
< 0
。
0 1
0
ó“ù
目óù肠
2
. 雷藤素甲的抗肿瘤作用 :
雷藤素甲对 L 。 ; 。有明显 疗 效 , 0 . 25 毫
克 /公斤腹腔注射时 , 小鼠存活期延长 率 在
14 0多以上 , 且有部份动物长期存 活 , 对 .这
些长期存活的动物再接种 L 。 : 。脾 细 胞 , 每
月一次 , 连续攻击三次 , 动物均能耐受而不
发病 , 而对照组则 均于 7天内全部死亡 。 雷
藤素甲。 . 2毫克 /公斤时 、对 L 。 : . 仍有疗效 ,
且仍有部份动物长期存活 ; 。 . 1 25 毫克 /公斤
时则对 L 。 1 6无疗效 ( 见表 3 ) 。
雷藤素甲 0 . 2及 0 . 2 5毫克 /公斤 对 S : 7 ,
肝癌实体型 ( H C S ) 及W 一 2 56 亦 有一定 疗
效 , 其抑制率分别为 38 厂 , 46 . 7多及 50 厂 ,
但疗效不够稳定 。 雷藤 素甲 对 E C S及 A S R
则无疗效 。
河南医学院学报 1 98 1年第 1 6卷第 1期 沙念启 3户
表 3雷藤素甲对 L。 15白血病的疗效
荆 量 、 用 法 动 物 数 体 重 (克 )平 均 存 活 期 (天 )存 活 期 P值
(毫克 /公斤 /天 )始 末 始 末 对 照 组 治 疗 组 延 长 %
0。 25x 6J P
0
。
5 2x 6j p
0
.
2x 6j p
0
.
2x 6j P
0
.
15 2x 6j P
3 2
一
6
1 2
。
0
3 2
。
0
23
。
0
8
。
7 > 2 2
。
6
> 1 6
。
7
>5 1 9
。
8< 0
。
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6
.
8 >4 5 1
。
6< 0
。
0 01
助自内舀
1 2
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。
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.
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。
4
1 9
一
8
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。
4
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3
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。
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。
4
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。
8
> 6 9
。
8
< 0
。
01
< 0
一
5 0
0 2
。
0 6
一
9
二 、 雷藤素甲毒性试验 血红蛋白 、作白细胞及血小板计数 ;测定血清
1
.急性毒性 :给小白鼠一次腹腔注射不 谷丙转氨酶 (S G PT, )碱性磷酸酶 〔A K P ),
同荆量雷藤素甲 , 按W e n 氏法计算其 L D S 。 非蛋白氮 ( N P N ) 或血尿素氮 ( B U N ) 。
及 95 多可信限为1 . 40 了毫克 /公斤 ( 1 . 1 9 1一 结 果 发 现 , 0 . 2及 0 . 4 毫 克 /公 斤 对 动 物
1
.
6 毫克 /公斤 ) 。 大剂量时 , 大 部 分动物 体重 、 血红蛋 白 、 血小板 、 S G P T 、 N P N
于给药后 1 一 3天内死亡 , 死前食量减少 、 及 B U N 等 均无 明显影 响 , 0 . 4毫 克 /公 斤
便稀 、体重减轻 , 尸检可见肠充 气及充血 。 时 , 于用药 5天后 , 白细胞轻度下降 , 停药
2
. 亚急性毒性 : 后即可回升 ( 见表 4 ) 。
取大白鼠一批 , 每组 10 只 , 分别由腹腔 用药组动物作组织学检查 , 除肝脏有轻
注射雷藤素甲 0 . 2及 0 . 4毫克 /公斤 /天 , 连用 度脂肪性变 , 肾间质轻度充血外 , 无其他异
1 0次 , 另一组作对照 , 于给药前 , 给药期间 常发现 。
及给药后观察动物的一般情况 , 称体重 , 测
表 4 雷藤素甲对大白鼠亚急性毒性试验
荆量及用法
组 别
( 毫 克 /公斤 )
…体 重测定时间 …
} 气 g J
血 红
旦 白
( % )
白细胞计数 }血小板计 数 } 血清谷丙
} 一 转 氨 酶
( 个 / m m . ) } ( 个 / nI m 3 )
(单位 / l o o e e血清 )
非 旦 白 氮
( m g / 1 0 0
e e
全血 )
17 4
,
0 0 0 7 1 4 7
。
5
叮曰跪“ón口OU份`二U厅院口`月OO即曰心U的乙勺`几…一||卜四|对 照 组 用 药 前用 药 时用 药 后 1 1 一 3 0 01 3 , 2 0 015 , 0 00 1 3 1 , 7 0 0 38 一 91 1 9 , 7 00 < 6 0< 6 0 4 3 . 3
1 5
,
8 0 0 15 9
,
6 0 0 4 5
一
0
口OJ0nQO口阵`UQ八úOQ.润U八é曰O月0,`n
雷藤素甲 。 2 x 1 0i p
用 药 前
用 药 时
用 药 后
1 3
,
9如 1 1 8 , 3 0 0
生5 1 , 0 0 0
< 6 0
< 6 0 3 9一 8
1 2
,
0 00 < 6 0 3 8 一 8
nù月毯n乙住匆ó吕QU1玉几凡ǎ匕O曰O目土`,土喃.ù
雷藤素甲 0。 4 x 1 0 i P
用 药 前
用 药 ’时
用 药 后
1 0
,
3 0 0
5
一
2 0 0
, 8 , 9 0 0
土1 0 , 3 0 0 < 6 。`
1 0 0
一
0 0 0
1 2峨, 7 0 0
< 6 0
< 6 01
B U N 1 3
。
9
1 3
.
2
1 6
。
1
B U N : 血尿素氮 ( 毫克 / 1 0。毫升玉 )
2 名 4、
三 、 雷藤素甲对免疫功能的影响
1
. 对溶血素形成的影响 :实验在雄性
CFW 小鼠进行 。 以绵羊红细 胞 (R S BC)
作抗原 , 给小鼠致敏后第二天开始给药 , 每
天一次 , 每次 0 . 2 5 , 0 . 2及 0 . 1 25 毫克 /公斤 ,
腹腔注射 , 连用 4 天 。 、停药后次日抽取心脏
血 , 分 离血清 , 按我们所报导的方法测定溶
血素 ( “ ) 。 结果发现 , 对照组的最大溶血稀释
度为 1 , 2 5 6 , 雷藤素 甲 0 . 2及 0 . 25 毫 克 /公
斤时 , 最大溶血 稀 释 度 下邃降 到 1 : 64 及
1 : 3 2 ; 0
.
x 2 5毫克 /公斤 时 为 1 : 12 8 ; 环
磷酞胺 5 及 10 毫克 /公斤亦可使最大溶血 稀
释度明显下降 ; 干扰素诱导剂泰洛沦 ( T i -
l o r o n e ) 则使之略升高 ( 见表 5 ) 。
表 5 雷藤 素甲对溶血素反应的影响
C F W小鼠 , 每天一次 , 共 4 次 , 以不给 药的
雄性C F W及给药 鼠作为亲代供脾 者 , 分别
给 鼠令为 1 0天的 F 、 乳鼠腹腔接种 1 0 吕个细胞
/毫升的脾细胞悬液 , 每鼠 0 . 1毫升 。 于接种
后第 8天活杀乳鼠 , 称体重及脾重 , 计算脾指
数 , 在两次实验中 , 雷藤素甲组的脾指数均较
注脾对照组为低 , 但差别均不显著 (见表 6 ) 。
表 6 雷藤素甲对G V H 反应的影响
药 物 剂 量
、 用 法
( 毫克 /公斤 /天 )
最大溶血
稀 释 度
组 别 剂 ’ 量 动 平均 平 均 脾重 m g 脾 P 值
(毫克 /公斤 ) 物 体重 脾 重
/ /
z 指
用 法 数 g m g 体重 1 0 0 9 数
正 常 0。 25 x 4 i p 8 8 。 04 2 8 . 7 3 5 6 。 7 4 1 。 4 2 6 ) 0一 05
注脾对照 7 8 . 96 4 5 . 6 5 0 8 。 8 9 1 . 0 5 2
6 7
。
8 5 2 9
一
5 3 75
。
5 4雷滕索 甲
正 常 0。 2 5 义 4 i p 6
:
’
::
3 0 。 1 3 9 7
. 2 6 1
。
70 7 ) 0
。
05
注脾对照 6 5 1。 0 5 14 。 2 6 1 . 只通只雷膝素甲 6
;:;;
一5 1 ’ o 5 1 9。 6 9
- - - 一
}
生理盐水
雷藤素 甲
雷藤素 甲
雷藤素 甲
生理盐水
环磷酞胺
环磷酞胺
泰 洛 伦
0
。
2 5 x 4 i P
0
。
2 x 4 i p
0 。 1 2 5 x 4 i p
1 0 x 4 i p
5 x 4 i P
2 0 x 4 i P
1
,
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1
.
3 2
1
:
6 4
1 : 12 8
1
: 2 5 6
1
1 16
1
: 6 4
1
: 5 12
2
. 对移植物抗 宿 主 反 应 ( G V H反
应 ) 的影响 : 实 验 在 C F W ( 古 ) 及 615 小
鼠 ( 早 ) 杂交第一代 ( F , ) 乳鼠上 进 行 。 ’
将雷藤 素甲。 . 25 毫克 /公斤腹腔注射于 雄 性
3
. 对小 鼠肿瘤相伴免疫的影响 : 实验
在 C F W小鼠进行 , 所用瘤株为腹水型 肝 癌
( H C A ) 及 网织细胞肉瘤 ( A S R ) 。 先给
小鼠尾部皮下注射上述瘤株 1 0 “个瘤细胞 /毫
升的悬液 0 . 05 毫升 , 以致敏小鼠 ; 于致敏后
第二天分别给予雷藤素甲 0 . 25 毫 克 /公 斤 ,
环磷酞胺及氟脉嗜咙 20 毫克 /公斤腹腔注射 ,
每天一次 , 连用 了次 。 在致敏后第 10 天以同
种瘤细胞攻击 ( 即每 鼠皮下 接 种 5 火 1 0 “ 瘤
细胞 )。 于攻击后 第 10 天处死动物 , 解剖取瘤
称重 , 求平均瘤重并与攻击对 照 组 ( C 。 )
比较 , 计算瘤重抑制率 , 结果 ( 见表 7 ) 。
表 7 雷藤素甲对肿瘤相伴免疫的影响
剂 量 、 用 法
( 毫克 /公斤 /天 )
攻 击 动 物 数株 l— 平 均 瘤 重( m g ) 瘤重抑制率%实验数 } 长瘤数 P 值( 与 C s 比较 )nUǐOU1八,人ō1d.占攻击对照 C O免疫攻击 C s免疫攻击十 雷藤素 甲免疫 攻击 十环磷阶胺
免疫攻 击 十 氛尿 喻呢
肝 癌
O
。
25 x 7 i P 二
::
x 7 i P
x 7 i P
1 0
7
7
1 0
8
2
,
1 5 4
5 93
4 7 1
1
,
6 1 7
9 2 9
7 2
.
5
7 8
.
1
2 4
一
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。
5
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2
攻击对 照 C O
免疫攻击C s
免疫攻击 + 雷藤素 甲
免痊攻击 + 环礴酥胺
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,
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一
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5
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一
0 1
河南医学院学报 1 98 1年第6 1卷第 1期
从实验结果可以看出 , 雷藤素甲组无论
在长瘤动物数及瘤重抑制率方面均与免疫攻
击组 ( C s ) 无 差别 , 环磷酞胺及氟脉 嚓 吮
组则长瘤动物数增加 , 瘤重抑制率降低 , 尤
以环磷酞胺组明显 。 说明雷藤素甲于 0 . 25 毫
克 /公斤时 , 对肿瘤相伴免疫 没有 明 显 影
响 , 环磷酞胺则抑制之 。
讨 论
六方藤民间用于治疗风湿样关节炎及肿
瘤, 其粗提物 T 一 I , I , l , 丁对 实 验 性
肿瘤均有不同程度的抑 制 作 用 。 T 一 I ( 内
醋集中部份 )对 L 。 , 。的白血病有明 显 疗效 ,
从中并分离到雷藤素 甲 。 据 K u p c h a n 氏 等
报告 (3) , 雷藤素甲在体外对 K B细胞有明 显
细胞毒作用 , 对 L : : : 。 , P 一 38 8白 血病及 L e -
w is 肺癌亦有明显抗肿瘤作用 。 我们实验 发
现 , 雷藤素甲对 L 。 , 。白血病有明显疗效 , 不
仅可使部份动物长期存活 , 而且可使长期存
活动物经数次攻击而不发病 , 说明雷藤素甲
不仅可治愈部分 L 。 , 。白血病动 物 , 而且可使
动物获得主动免疫 。 据 K u p 。 h a n 氏 等 认
为 ( ” ) , 雷藤素甲分子结构中的环氧基及 a , p一
不饱和酮基有嗜核性并与抗肿 瘤作用有关 ,
14 位价 O H基可协助 9 , n 一环氧基与生物大
分子起选择性烷化作用 。 从六方藤中除分离
得到雷藤素甲外 , 并分离得到雷藤素丙及 山
海棠素 , 从雷公藤中分离到雷藤素乙及雷藤
铜 (9 ) , 对这些二菇内醋成份的抗肿瘤作用及
其构效关系 , 我们亦在研究中。
雷藤素甲对以溶血素反应为指标的体液
免疫有明显抑制作用 ; 0 . 2毫克 /公斤剂量时
对溶血素形成的 抑 制 作用与环磷酞胺 5 毫
克 /公斤的作用相似 ;而且 对 L 6 : 5的无 效 剂
量 ( 0 . 12 5毫克 /公斤 ) 仍有 免疫抑制作用 。
说明雷藤素甲不仅是六方藤中的抗肿瘤有效
成份 , 而且亦是其免疫抑制成份 。 雷藤素甲
对移植物抗宿主反应及肿瘤相伴免疫均无明
显影响 。 肿瘤相伴免疫和移植物抗宿主反应
一样 , 主要是 T 一淋 巴 细二胞免疫功能的反
应 (1 0) 。 由于可见 , 雷藤素甲对 体液 免疫有
明显抑制作用 , 对细胞免疫则无明显影响 ,
这与环磷酞胺有所不同 , 后者对两种免疫功
能均有明显抑制作用 。
参 考 文 献
l
。 昆明医学院第一附属 医院类风湿研究小组 . 昆明
山海棠 治疗类风湿性关节炎 1 10 例临床观察小结 , 中华医学
杂志 8 : 3 8 4 , 1 9 7 6
2
。 昆明 医学院附属第一 医院皮肤科 : 昆明 山海棠治
疗红斑 性狼疮 5 7例临床 效果观 察内部资料 1 0 78 年
8
。
K u P e h a n
,
5
.
M
. e t a l
:
T r y P t o l i d
e a n
d
T r i P d i o l i d e
, n o v e l a n t i l e u k e m i e d i t e r P e n o i d
t r i e P o x i d e s f
r o m T
r i p t e r y g i u m w i l f o r d i i
。
J
-
人. m e r 。 C h e m 。 S o e 。 , 9 4 ( 2 0 ) : 7 1 9 6 。 1 9 7 2
4
. 云南植物研究所植化室 , 河南 省医学科学研究所
药 理组 : 昆明 山海桌和雷公藤 的抗癌成份一二菇三环氧化
合物 。 科学通 报 2 2 ( 1 0 ) , 4 5 8 。 1 9 7 7 -
5 。
W
e i l
,
C
。
S
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