全 文 ：第 28卷第 3期　 　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol. 28 No. 3
2009年 9月　　　　　　　　　　 Journal of Sou th-Cen tral University for Nationali ties( Nat. Sci. Edi tion )　　　　　　　　　　 Sep. 2009
　　收稿日期　 2009-02-27
　　作者简介　刘　钊 ( 1978-) ,女 ,讲师 ,研究方向: 中药抗病毒 , E-mail: fanfang fei@ yahoo. com. cn
　　基金项目　中南民族大学自然科学基金资助项目 ( YZQ05011)
中药大青叶有效单体抗流感病毒作用
刘　钊 1 ,杨占秋 2 ,肖　红 2
( 1中南民族大学 药学院 ,武汉 430074; 2武汉大学 医学院病毒学研究所 ,武汉 430071)
摘　要　采用中药大青叶有效单体进行体外抗流感病毒 ( H1N1)的研究 ,通过观察病毒引起的细胞病变效应
( CPE)、 M TT法检测细胞活性 ,红细胞凝集实验检测病毒血凝滴度 ,考核药物的抗病毒作用 .结果表明: 大青叶有
效单体 1# , 2# , 3# , 4# 对流感病毒无直接灭活作用 ,也不能阻止流感病毒的吸附 ,而能抑制流感病毒在 MDCK细
胞内的的生物合成 .其半数抑制浓度 ( IC50 )分别为 30. 80, 29. 74, 27. 56, 25. 85 mg / L,治疗指数 ( T I)分别为 6. 33,
9. 30, 10. 77, 15. 05. 其抗流感病毒效果优于病毒唑 ( IC50= 101. 05 mg / L, T I = 5. 25) ,和抗病毒口服液 ( IC50=
104. 41 mg / L, T I= 5. 03) , P < 0. 01.在 160 mg /L时能抑制流感病毒在 MDCK细胞内的增殖达 90%左右 .在 40～
160 mg /L内大青叶 1# , 2# , 3# , 4# 单体能明显降低流感病毒血凝滴度 (P < 0. 05) .大青叶有效单体 1# , 2# , 3# ,
4# 能安全高效地抑制流感病毒在 MDCK细胞中的增殖 .
关键词　大青叶 ;单体 ;流感病毒 ;抗病毒作用
中图分类号　 Q949. 748. 3; Q291　文献标识码　 A　文章编号　 1672-4321( 2009) 03-0042-05
Antiviral Activity of the Effective Monomers from
Folium Isatidis against Influenza Virus in Vitro
Liu Zhao
1 ,Yang Zhanqiu
2 , X iao Hong
2
( 1 Co lleg e of Phamacy, South-Centra l Univ ersity fo r Nationalities, Wuhan 430074, China;
2 M edical Vir olog y Institute, Wuhan Univ ersity, Wuhan 430071, China )
Abstract　 The antiv iral activity o f the 4 effectiv e monomer s f rom Chinese medicina l herb Fo lium Isa tidis( FI) 1, 2,
3 and 4 against influenza virus ( H1N1) wa s invesiting ated by cell culture technigue to observ e cy topathic effect
( CPE) , M T T co lo rimetric assay and hemagg lutination titer test to obtain v irus inhibito ry ra te. The results show ed
that the four monome rs may inhibit influenza v irus biological synthesis o th er than directly inactiv ate this v irus o r
blo ck its adso rption onto susceptible cells. Th e inhibito ry concentr ation ( IC50 ) o f the four monomer s w ere 30. 80,
29. 74, 27. 56, 25. 85 mg /L, respectiv ely and the tr ea tment indexes( T I) w ere figured out a s 6. 33, 9. 30, 10. 77 and
15. 05. Their antiv iral activ ities ar e mo re effectiv e than ribav irin ( IC50= 101. 05 mg /L , T I= 5. 25) and antivira l
liquo r( IC50= 104. 41 mg /L, T I = 5. 03) a t the same do sage lev el ( P < 0. 01) . 160 mg /L of the monome rs can
nearly inhibit 90 percents of the pro lifera tion o f influenza virus in MDCK cells. Mo reover , in the range o f 40～ 160
mg / L the four monome rs can significantly dec rease the hemagglutinin titer o f influenza virus (P < 0. 05). we th us
conclude that the monomer s No. 1, 2, 3, 4 fr om Fo lium Isa tidis can inhibit the pro lif eration of the influenza virus
in M DCK cell effectiv ely and safely.
Keywords　 Folium Isatidis; monomers ; influenza v irus; antivir al activ ity
　　流行性感冒病毒 ( influenza vi rus)是人类至今
尚不能控制的世界性传染病毒 .每年季节性流感感
染 5% ～ 20%的人口 ,造成全球 25～ 50万人死亡 [1 ] .
目前尚缺乏可靠的方法对流感的发生与流行的周期
型进行有效预测 ,流感的主要预防措施是疫苗免疫
接种 .由于流感病毒表面糖蛋白 (主要是血凝素 HA
和神经氨酸酶 NA)经常发生抗原性变异 ,如 A /
H1N1型流感病毒就是一种奇特的 杂交型 流感病
毒 ,是流感病毒的一个新型变异毒株 .频繁变异使流
感病毒能逃避宿主的免疫防护 ,疫苗覆盖面小 ,并且
疫苗使用中客观存在一些问题 ,使疫苗的预防效果
只有 70% ～ 90% .
目前抗流感病毒药物主要是 M2离子通道抑制
剂 (金刚烷胺和金刚乙胺 )或病毒神经氨酸酶抑制剂
(奥司他韦和扎那米韦 ) [2, 3 ] ,但都由于其内在的毒性
和长期应用的耐药性而限制了其临床应用 [ 4] .据最
新抗病毒监测研究发现 ,活跃在亚洲、澳大利亚、北
美和欧洲的金刚烷胺抗药性流感病毒 A型 H3N2株
显著增加 [ 5-7 ] ,人致病性 H5N1禽流感病毒和其他亚
型的禽流感病毒也对金刚烷胺耐药 .而对于神经氨
酸酶抑制剂类药物 ,最近也出现了季节性流感病毒
奥司他韦耐药株 ,甚至是在没有用药的病人中 [8, 9 ] .
因此寻找新的抗流感病毒药物迫在眉睫 .
我国传统中药具有药源广泛 ,毒副作用小 ,价格
便宜等优势 ,其中大青叶为十字花科植物菘蓝
( Folium Isatidis)的干燥叶 ,苦寒清热 ,咸以入血 .它
既能清心胃实火 ,又善解瘟疫时毒 ,有解毒利咽 ,凉
血消肿之效 ,历来为清热解毒之要药 .其化学成分主
含吲哚类化合物、喹唑酮类化合物、芥子苷类化合物
等 ,经药理实验表明 ,大青叶具有抗菌、抗癌、抗病
毒、解热、抗炎、利胆、抗内毒素及增强免疫力等作
用 [10 ] .本研究从大青叶中提取有效单体 ,观察其在
体外抗流感病毒活性及其可能机制 .
1　实验
1. 1　原料与试剂
1. 1. 1　药物
中药大青叶 (简称 FI)有效单体 1# , 2# , 3# , 4#
(褐色颗粒 ,溶于水 )由华中科技大学同济医学院同
济医院药剂科方建国教授提供 .将 1# ～ 4#号药分别
配成 0. 1 g /mL水剂 ,经 8磅 15 min消毒灭菌 , 分装
备用 .阳性对照药病毒唑 (注射液 , 1 g /支 ) ,中药对
照药抗病毒口服液 ( 10 mL /支 ) ,南京第三制药厂生
产 ,批号 080302,用时以生理盐水配成 0. 1 g /mL.
1. 1. 2　细胞
传代犬肾细胞 ( MDCK)由武汉大学医学院病
毒学研究所提供 .培养 MDCK细胞的培养基用
DMEM ( Dulbecco′s Modi fied Eagle′s Mediurn)培
养基 (美国 Gibco公司产品 ) . M DCK细胞生长液中
含有 10%胎牛血清、 1× 105 U /L青霉素、 100 mg /L
链霉素 ; M DCK细胞维持液中除含有 2%胎牛血
清 ,并加入 2 g /mL胰蛋白酶外 ,其它同细胞生长液 .
1. 1. 3　病毒
流感病毒为 Yamaga ta /120 /86 /H1N 1株由日
本福岛医科大学微生物系锡谷达夫教授惠赠 .使用
前在 9～ 11日龄鸡胚尿囊腔接种传代 3～ 4次 ,收集
尿囊液 ,以 3 000 r /min离心 15 min,取上清液进行
血凝实验 ,将血凝滴度大于 1∶ 320且细菌培养阴性
的病毒液分装 .置- 80℃保存备用 .
1. 1. 4　试剂
M TT( 3-( 4, 5-二甲基噻唑-2) -2, 5-二苯基四氮
唑溴盐 )为 Hyclone公司产品 . M TT以不含血清的
MEM培养基配制成 5 g /L溶液 ,过滤除菌后置 4℃
冰箱保存备用 .二甲基亚砜 ( DM SO)由上海菲达有
限公司提供 .新生小牛血清购自三利公司 . 1%鸡
血由来亨公鸡翅下静脉取血 ,按 1∶ 4加入 Alserv er
液后 4℃保存 .使用时用生理盐水配成 1%鸡红细胞
悬液 .
1. 2　实验方法
1. 2. 1　病毒感染性测定 ( TCID50的测定 )
将流感病毒进行连续 10倍的递次稀释为 10- 1
～ 10- 7 ,将各稀释度的病毒接种于 MDCK细胞中 ,
于 35℃ 吸附 1. 5 h后换用维持液继续培养 ,实验设
4复孔正常细胞对照 .每日观察细胞病变 ( CPE) ,记
录病变程度和孔数 ,待细胞病变不再继续 (约 3～ 4 d
后 ) ,判定结果 .将细胞病变率达 50%及以上的培养
孔计为病变孔 ,细胞病变率小于 50%者计为非病变
孔 ,根据 Reed-M uench法 [11 ] . 计算病毒的 TCID50
( M edian Tissue Cul ture Infectiv e Dosage) .
1. 2. 2　大青叶单体对 MDCK细胞的毒性作用
用乙酶将生长良好的 MDCK细胞分散成单个
细胞悬液 ,按 1× 105个 /mL浓度分种于 40孔板 ,每
孔 0. 1 mL.置 37℃ , 5% CO2培养箱中培养 . 24 h
后弃培养液上清 ,换含不同浓度的含药维持液 ,每孔
200μL.药物的终浓度分别为 10, 20, 40, 80, 160,
320, 640, 800, 1 600 g /L.每种浓度重复 4孔 ,实验
同时设正常细胞对照、病毒对照、阳性药物病毒唑和
抗病毒口服液对照 .继续培养 48 h后 ,以 M TT法
(如 1. 2. 2)检测细胞存活率 .并根据细胞存活率 ,找
出药物对细胞的最大无毒浓度范围 .
1. 2. 3　 MT T染色法测定 MDCK细胞活性
根据 Mosmann[12 ]建立的四甲基偶氮唑盐
( M T T)法测定细胞活性 .弃培养上清液 ,每孔加 5
g /L M TT的不含血清的 MEM 50μL, 37℃ , 5%
CO2孵育 4～ 6 h, 黄色 M TT被活细胞的线粒体脱
氢酶还原成蓝色的甲簪结晶 ,小心吸出 M TT, PBS
43第 3期　　　　　　　　　　　　　刘　钊 ,等: 中药大青叶有效单体抗流感病毒作用　　　　　　　　　　　　　　　　
洗 3次 ,每孔加 50μL DM SO终止反应 ,振荡混匀 ,
在 15min后甲簪结晶被溶解 ,在波长 570 nm下测定
吸光度 OD值 . OD值与活细胞的数量呈正相关 .
1. 2. 4　大青叶单体抗流感病毒作用方式
( 1)大青叶单体对流感病毒的生物合成的抑制
作用 . 于已长成单层的 MDCK细胞 40孔板上 ,每孔
接种 100μL的 100 TCID50的流感病毒液 ,于 35℃吸
附 90 min,弃病毒上清 .根据细胞毒性实验的结果 ,
在药物无毒浓度范围内 ,加入不同浓度的含药维持
液每孔 0. 2 mL,药物浓度分别为 5, 10, 20, 40, 80,
160 g /L;每日观察 CPE,隔天换新鲜含药维持液 .实
验同时设对照 .约在病毒对照 CPE为 + + + ～ + +
+ + 时弃培养液上清 ,用 MT T法检测病毒抑制率 ,
并计算药物对流感病毒的病毒抑制率 .
( 2)大青叶单体对流感病毒的直接灭活作用 .
将 100 TCID50 /mL滴度的流感病毒与不同浓度的大
青叶单体 1～ 4#作用 4 h.反应体系为 0. 2 mL.含 50
μL的 100 TCID50 /mL滴度的 Flu和 150μL的药物 ,
并保证药物的终浓度与药效学实验相同 .然后将混
合液接种于单层 MDCK细胞中 ,孵育 1. 5 h后 ,换用
2% M EM培养液维持细胞生长 , 37℃ , 5% CO2
培养 ,逐日观察 CPE. 实验同时设对照 .
( 3)大青叶单体对流感病毒的吸附保护作用 .
分别将不同浓度的大青叶单体 1# ～ 4# 加到 MDCK
单层细胞孔中 , 37℃吸附 90 min,弃上清 ,再加 100
TCID50 /mL滴度的流感病毒 100μL /孔 , 37℃吸
附 90 min后 ,弃上清 ,加细胞维持液 , 37℃ , 5%
CO2培养 ,逐日观察细胞病变 . 实验同时设对照 .
1. 2. 5　流感病毒 MDCK细胞内血凝滴度的测定
按抗流感病毒实验 , 72 h后收集各实验孔病毒
上清进行血凝实验 .选用 96孔血凝实验板 ,除第一
孔外 ,每孔加入 25μL生理盐水 .第一孔加 50μL待
测实验孔病毒悬液 ,取 25μL做 2倍 , 3倍 , 10倍系列
稀释 .得到 1∶ 2, 1∶ 3, 1∶ 8, 1∶ 9, 1∶ 32, 1∶ 64, 1∶
128等不同病毒稀释度 .每孔加入 25μL 1%鸡红细
胞悬液 ,轻弹实验板 ,使红细胞与病毒充分混合 ,室
温静置 60 min时 ,观察血凝现象并记录结果 .以静
置 45 min时血凝现象为最终结果 .以出现“+ + ”
(即红细胞在孔底形成一个环状 ,四周有小凝集块 )
流感病毒最高稀释度为血凝终点 ,该稀释度的倒数
即为流感病毒的血凝滴度 .实验同时设生理盐水对
照 (排除血细胞自身的非特异性凝集 )和病毒对照 .
1. 2. 6　计算公式和分析方法
CPE记录方法为: - 为无 CPE; + 为 25%
细胞出现 CPE; + + 为 50% 细胞出现 CPE; + +
+ 为 75% 细胞出现 CPE; + + + + 为 100% 细
胞出现 CPE.
细胞存活率 (% ) =
(药物组平均 OD570 /细胞对照组平均 OD570 )× 100% ,
Reed-M uench公式:
log TCID50= log ( 50%的细胞死亡百分数 )+ (比例距离
PD×稀释倍数 ).
比例距离 ( PD)=
高于 50%的细胞死亡百分数 - 50%
高于 50%的细胞死亡百分数- 低于 50%的细胞死亡百分数 .
M TT法病毒抑制率:
病毒抑制率 =
药物处理组 OD570- 病毒对照组 OD570细胞对照组 OD570- 病毒对照组 OD570× 100% .
血凝实验病毒抑制率:
病毒抑制率=
病毒对照组血凝滴度 -实验孔血凝滴度
病毒对照组血凝滴度 × 100% .
( 1)结合细胞毒性实验和药物抗病毒实验的结
果 ,用统计软件 SPSS11. 5的 Probi t回归法计算药物
半数毒性浓度 TC50和半数有效浓度 TC50 ,得到药物
治疗指数 ( T reatment Index , TI= TC50 /TC50 ) .采
用治疗指数作为评价指标来衡量各药物对病毒抑制
的效力 .
( 2)采用直线相关分析 ,观察中药大青叶单体
1
# ～ 4# 不同剂量与细胞存活率、病毒抑制率等之间
是否存在直线关系 ,并求出直线回归方程和相关
系数 .
( 3)用统计软件 SPSS 11. 5的方差分析 ( S-N-K
法 )比较不同药物对细胞的毒性作用和对流感病毒
的抑制作用 .
2　结果与讨论
2. 1　病毒感染性测定的结果
根据实验结果 ,按 Reed-M uench法计算得流感
病毒的 TCID50值为 10- 3. 5 .
2. 2　药物毒性的效果
通过光镜观察 , 大青叶单体 1# ～ 4# 对 MDCK
细胞毒性作用表现为: 细胞粘连 ,变圆 ,壁厚 ,破碎 ,
脱落 ,胞浆内颗粒增加 ,折光性增强 . 将 1# ～ 4#不同
浓度大青叶单体和病毒唑及抗病毒口服液分别作用
于 MDCK细胞 , 48～ 72 h后观察并记录结果见表 1.
从表 1可知 ,大青叶单体 1# ～ 4# TC50> 200mg /
L,说明其安全系数大 .药物在 160 mg / L范围内均
未见明显的细胞毒性 ,从而确该药物浓度为对
MDCK细胞敏感病毒的抗病毒实验的最高允许浓
度 ;但细胞经较高浓度的药物作用后 ,死亡细胞数增
44　　　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 ) 第 28卷
加 ,细胞存活率降低 (见图 1) .经直线回归分析 ,药物
浓度与细胞存活率之间存在直线关系 , P < 0. 01.其
直线方程和相关系数分别为: y1# = 59. 340-
0. 043x , r1# = - 0. 813; y2# = 64. 853- 0. 045x , r 2#
= - 0. 834; y3# = 63. 603- 0. 044x , r3# = - 0. 828;
y4# = 70. 112- 0. 047x , r 4# = - 0. 847.四者相比较 ,
1
#单体的 TC50小于其他 3种单体 ,其毒性略大于其
他 3号单体 , P < 0. 01.而 2#单体与 3#单体对细胞的
毒性作用相同 , P> 0. 05. 4# 单体毒性最小 , P <
0. 01.将 1# ～ 4# 单体的 TC50与阳性药物病毒唑及抗
病毒口服液相比 , P < 0. 01,有显著性差异 ,说明大
青叶单体的毒性更大 .
表 1　大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4# 对 M DCK细胞的毒性作用
Tab. 1　 Cytotoxi ty of the ef fect ive monomers No. 1, 2, 3, 4 f rom Folium Is atidis to MDCK cell s
药物
药物浓度不同时细胞存活率 /%
10
mg / L
20
mg / L
40
mg / L
80
mg / L
160
mg / L
320
m g / L
640
mg / L
800
mg / L
1 600
mg / L
50%毒性
浓度 TC50
FI 1# 86. 00 73. 50 63. 80 47. 30 40. 00 27. 20 20. 10 11. 30 6. 60 202. 06
FI 2# 87. 60 75. 50 71. 20 55. 30 43. 00 31. 40 20. 50 16. 10 9. 40 276. 56
FI 3# 90. 50 76. 10 71. 80 53. 90 44. 20 32. 20 25. 00 17. 30 8. 50 296. 90
FI 4# 92. 50 83. 10 78. 20 61. 80 46. 30 35. 40 31. 00 21. 50 10. 20 389. 16
病毒唑 95. 80 91. 00 81. 60 74. 00 55. 90 45. 00 37. 20 22. 80 15. 50 530. 57
抗病毒口服液 96. 00 85. 20 74. 30 67. 10 56. 40 49. 50 38. 80 24. 60 16. 90 525. 20
2. 3　药物抗病毒生物合成的效果
根据细胞毒性实验的结果 ,选择在药物的无毒
浓度范围内 ,将大青叶单体 1# ～ 4# 进行抑制流感病
毒实验 , 48～ 72 h肉眼观察培养板上的细胞形态 .
发现流感病毒对照组病毒对 MDCK细胞 CPE表现
为:细胞出现空泡 ,或细胞形态皱缩 ,变长 ,折光性减
弱 ,胞核圆缩和破裂 ,细胞最后坏死脱落 .正常细胞
对照组细胞培养液清亮 ,细胞圆型或卵圆型 ,排列整
齐紧密 ,呈上皮形 ,胞浆清楚 .而药物作用组细胞形
态明显偏正常 ,仅有部分细胞出现病变的特征 ,呈皱
缩状 ,或串状或重叠或脱落 ;多数细胞呈正常的上皮
形态 ,说明药物在一定程度上抑制了病毒在细胞内
的复制增殖 . 72 h后用 MT T法测定病毒抑制率 ,结
果见表 2.
表 2　大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4# 的抗流感病毒作用
Tab. 2　 Antivi ral act ivi ty of th e ef fective monomers No. 1, 2, 3, 4 f rom Folium Isatidi s to inf luenza vi rus in vi t ro
药物 药物浓度不同时病毒抑制率 /%
2. 5 mg /L 5 mg /L 10 mg /L 20 mg /L 40 mg /L 80 mg /L 160 mg /L
50%有效
浓度 IC50
治疗指数
TI
FI 1# 18. 2 27. 5 40. 3 54. 8 71. 3 80. 8 86. 4 30. 80 6. 33
FI 2# 15. 9 33. 7 42. 5 50. 8 74. 3 78. 5 89. 9 29. 74 9. 30
FI 3# 22. 6 28. 7 47. 9 52. 7 67. 4 80. 5 92. 3 27. 56 10. 77
FI 4# 20. 9 35. 7 40. 6 55. 8 73. 5 82. 1 87. 4 25. 85 15. 05
病毒唑 9. 3 15. 1 25. 4 30. 6 41. 5 50. 8 61. 7 101. 05 5. 25
抗病毒口服液 8. 8 16. 9 25. 6 28. 1 42. 7 49. 5 60. 2 104. 41 5. 03
　　由表 2可知随药物浓度增加 ,其抗病毒活性增
强 ,病毒抑制率升高 (如图 2所示 ) .经直线回归分
析 ,药物浓度与病毒抑制率间有直线关系 , P <
0. 01.其直线方程和相关系数分别为: y 1# = 36. 673
+ 0. 386x , r2# = 0. 833; y2# = 37. 165+ 0. 395x , r 2#
= 0. 846; y3# = 37. 963+ 0. 398x , r3# = 0. 886; y4# =
39. 828+ 0. 369x , r4# = 0. 835.药物浓度在 20 mg / L
以上时 ,对流感病毒的细胞病变抑制程度可达 50%
以上 ; 在 160 mg / L时 ,对流感病毒抑制程度达 90
%左右 ,表现较强的抗病毒活性 ;在 2～ 128 mg / L
浓度范围内 , 4种单体的病毒抑制率大于阳性对照
药病毒唑和抗病毒口服液 , P < 0. 01, 有显著性差
异 ,说明大青叶单体的抗流感病毒活性优于阳性药 .
将 4种单体两两进行比较 ,P> 0. 05,无显著性差异 ,
说明 4种单体的体外抗流感病毒效果相同 .
2. 4　药物抗病毒生物合成的血凝滴度效果
将大青叶单体、病毒唑和抗病毒口服液 40, 80,
160 mg /L试验组分别进行抑制流感病毒实验 , 72 h
后收集病毒上清 ,将其与 1%鸡红细胞悬液进行凝
集试验 ,不同药物作用后的病毒血凝变化见表 3.
由表 3知 ,大青叶 1# ～ 4#单体 40, 80, 160 mg /
L抗病毒组上清中流感病毒血凝滴度分别为 1∶ 90,
1∶ 64和 1∶ 32(对数转换分别为 1. 95, 1. 81, 1. 81) ,
均比病毒对照组 ( 1∶ 320, 2. 51)滴定终点均明显提
前 ,P < 0. 05,故其具有明显的抗流感病毒在 MDCK
细胞内增殖活性 ,病毒抑制率分别为 71. 9% 、 80
%、 90% .另外 ,病毒唑和抗病毒口服液在 40, 80,
160 mg /L的血凝滴度分别为 1∶ 180, 1∶ 160和 1∶
128(对数转换分别为 2. 08, 2. 20, 2. 26) .将大青叶
1# ～ 4# 单体与阳性药物进行比较 ,大青叶单体中流
45第 3期　　　　　　　　　　　　　刘　钊 ,等: 中药大青叶有效单体抗流感病毒作用　　　　　　　　　　　　　　　　
感病毒滴度较小 ,P < 0. 05,说明大青叶单体的体外 抗流感病毒效果较病毒唑和抗病毒口服液药更好 .
表 3　大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4# 对流感病毒体外血凝滴度的抑制作用
Tab. 3　 Inhibi tory ef fect of FI to th e hemag glu tination ti ter of th e inf luenza virus in vit ro
组别 浓度 / ( mg /L) 血凝滴度
x-± S Log(x-± S)
病毒抑制率 /%
病毒对照 - 320± 1. 25 2. 51± 0. 10 -
正常对照 - 0 0 0
40 90± 1. 28 1. 51± 0. 11 71. 9
FI 1# , 2# , 3# , 4# 80 64± 1. 37 1. 81± 0. 14 80. 0
160 32± 1. 45 1. 95± 0. 16 90. 0
病毒唑 40 180± 1. 49 2. 08± 0. 17 43. 8
抗病毒 80 160± 1. 55 2. 20± 0. 19 50. 0
口服液 160 128± 1. 80 2. 26± 0. 26 60. 0
2. 4　药物直接灭活病毒的效果
按实验方法将药物与病毒混合后再作用与细
胞 ,逐日观察细胞病变 .发现各单体不同浓度组均出
现典型流感病毒感染所致的 CPE,且与病毒对照孔
无显著区别 ,说明各单体均不能直接杀灭流感病毒 .
2. 5　药物抗病毒吸附的效果
按实验方法将药物与细胞作用后再感染病毒 ,
逐日观察细胞病变 .发现各单体不同浓度组均出现
典型流感病毒感染所致的 CPE,与病毒对照孔无显
著区别 ,说明各单体无阻断吸附作用 .
3　结语
( 1)中药大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4#具有体外
抗流感病毒的作用 ,其相应的提取工艺为有效工艺 .
( 2)中药大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4#体外抗流
感病毒的作用是通过抑制病毒在 MDCK细胞内生
物合成而发挥 ,其对病毒无直接灭活作用 ,也不能阻
止病毒的吸附作用 .
( 3)中药大青叶单体 1# , 2# , 3# , 4#毒性较病
毒唑和抗病毒口服液大 ( P < 0. 01) ,但抗流感病毒
效果优于病毒唑和抗病毒口服液 ( P < 0. 01) ,能明
显降低流感病毒血凝滴度 ( P < 0. 05) .故实验仍需
改进工艺以降低毒性 ,通过化学分析明确其分子结
构 ,及从动物体内和血清药理学上进一步探讨其抗
流感病毒的作用机制 .
致谢: 衷心感谢华中科技大学同济医学院同济医院药剂
科方建国教授在大青叶单体提取分离中所进行的实验工作!
参　考　文　献
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