全 文 ：大青叶体外抑菌试验
李国旺
(河南科技学院动物科学学院 ,河南新乡　453003)
　　摘要:为了研究大青叶水浸液的体外抑菌作用 ,试验对大青叶粉碎 ,水浸 ,煎煮 30min过滤 , 然后
对液体蒸馏浓缩至每 4mL含生药 1g。通过药液浸过的滤片对金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、沙门氏
菌 、枯草杆菌 、青霉菌 、黄曲霉菌进行抑菌试验 ,以抑菌圈的大小确定药物对细菌抑制作用的大小。结
果表明 ,对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用 ,特别是金黄色葡萄球菌 ,抑菌圈平均达 16.525mm, 对革
兰氏阴性菌也有一定的抑制作用。确认大青叶有一定的广谱抗菌作用 , 利于大青叶在临床上的进一
步推广和应用。
关键词:大青叶;体外抑菌;抑菌圈;广谱抗菌作用
中国图书分类号:S853.72　文献标识码:A　文章编号:1006— 799X(2008)04— 0018— 03
　　大青叶 (FoliumIsatidis)为十字花科
　　收稿日期:2008— 02— 21
(Cruciferae)植 物 菘 蓝 (Isatisindigotica
Fort.)的干燥叶 [ 1] 。二年生草本 ,高 40 ～
90cm,主根深长 ,圆柱形 ,稍弯曲 ,外皮灰黄
的调控 ,不致对机体产生重大损害[ 5] 。
由表 1可见 ,所测大通县役用马公(骟)
马组的全血铁含量 30.13mmol/L略高于母
马组 28.92mmol/L,但没有显著性差异(P>
0.05)。由此表明 ,大通县役用马全血铁含
量无性别上的差异;因而 ,在兽医临床实践
中 ,无论是公马还是母马均可用本试验中的
总体指标作为参考值 。
王宗元等[ 6]认为 ,处于妊娠阶段的母畜
对铁的需要量是较高的。大通县役用马全血
铁含量变异系数很高 ,达 14.60%,尤其是母
马的高达 15.73%,由此表明母马的离散程
度较大 , 部分母马的全 血铁含量只有
9.36mmol/L,这种情况可能与部分母马的妊
娠有关;建议对处于妊娠阶段的母马适量补
以铁剂是很有必要的 。
表 1　大通县役用马全血铁含量
统计指标 公(骟)马 母马 总体
n 12 23 35
全血铁含量 /mmol· L-1 30.13±4.07 28.92±4.55 29.53±4.31
C.V/% 13.51 15.73 14.60
主要参考文献
[ 1] 余文昌 ,周金梅 ,张国仓 ,等.大通县畜疫防治中存
在的问题及建议 [ J] .青海畜牧兽医杂志 , 2007, 37(2):61.
[ 2] 叶俊华.犬病诊疗技术 [ M].北京:中国农业出版
社 , 475 ～ 477.
[ 3] 伊平昌.大通县役用马骨营养状况的检测 [ J] .甘
肃畜牧兽医 , 2006, 36(5):12～ 13.
[ 4] 崔福生.医学生化检验手册 [ M] .天津:天津科学
技术出版社 , 1982, 383～ 385.
[ 5] 宋彩琴 ,高宪华.科尔沁牛血液无机离子及酶的含
量测定 [ J] .内蒙古畜牧科学 , 1994(2):40～ 41.
[ 6] 王宗元 ,曹光辛 ,胡在朝 ,等.动物矿物质营养代谢
与疾病 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1995, 107 ～ 109.
18 　　 　　　　　　　　　　　　甘肃畜牧兽医　　　　　　　　　　　2008年 4(总 201)期
色 。茎上部多分枝 ,稍带粉霜。叶互生 ,基生
叶较大 ,叶片矩圆形 、椭圆形 ,长 5 ～ 20cm,
宽 2 ～ 9cm,有柄;茎生叶矩圆形至矩圆披针
形 ,长 5 ～ 7cm, 宽 1 ～ 4cm,先端钝尖 ,基部
箭形 ,半抱茎 ,全缘或有不明显锯形。夏状花
序 ,生于枝端;萼片 4枚绿色 ,花瓣 4枚 ,黄
色;雄蕊 6枚 ,四强;子房上位 , 1室。角果
长 ,圆形 ,扁平翘状 ,具中肋 ,先端锲形或微有
凹缺 ,基部渐窄 ,成熟时紫黑色 , 种子 1粒。
花期 4 ～ 5月 ,果期 5 ～ 6月。多为栽培 ,主产
于河北 、江苏 、安徽 、陕西省。一年可摘叶三
次:第一次在 5月中旬采后及时施肥;第二次
在 6月下旬 ,如施肥管理得当 ,可于 8月份第
三次采收。北方一般以小暑前后和霜降前后
分两次采收 。采收后 ,除去杂质 ,略洗 、切碎 、
干燥。味苦 ,性寒。归肺 、心 、胃经。主要有
清热解毒 ,凉血消斑的功效。可用于温邪入
营 ,高热神昏 ,发斑发疹 ,黄疸 ,热痢 ,痄腮 ,喉
痹 ,丹毒 ,脓肿等 [ 2-3] 。
本研究通过大青叶的体外抑菌试验 ,用
大青叶的浸出液对体外培养的金黄色葡萄球
菌 、大肠埃希菌 、沙门氏菌 、枯草杆菌 、青霉
菌 、黄曲霉菌的药敏试验 ,观察其成分的抗菌
性能和抑菌效果 ,从而为临床用药提供一定
的依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　大青叶:大青叶于 2007年 4月河南
省辉市中药材市场购得 ,经显微 、物理化学鉴
定 ,为十字花科植物菘蓝的干燥叶 ,属于药典
正品大青叶 [ 4-5] 。
1.1.2　菌种:金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、
沙门氏菌三种菌种由河南科技学院提供 ,枯
草杆菌 、青霉菌 、黄曲霉菌三种由河南农业大
学提供 。
1.1.3 　培养基:细菌培养基 。牛肉膏 3g,
蛋白 胨 10g, NaCl5g, 琼 脂 520g, 水
1 000mL, pH7.0 ～ 7.2。霉菌培 养基:
Na2CO3 3g, K2HPO4 1g, KCl0.8g, MgSO4
· 7H2O0.5g, FeSO4 0.5g, 蔗糖 30g, 琼脂
15 ～ 20g, 水 1 000mL, pH值自然。
1.2　大青叶浸出液的制备
将大青叶粉碎 ,加 8 ～ 10倍量水浸 1h
后煎煮 30min,过滤得药液 ,药渣再加 6倍量
水按前法处理得液 ,合并所得药液 ,静置 2h
后用 4层蒸馏水湿润的纱布过滤 ,将所得药
液用蒸 馏水调 至每 4mL药 液中 含生
药 1g[ 6] 。
1.3　抑菌试验方法
1.3.1　试验原理:将浸制好的滤片 ,放入倒
好的培养器表面培养 24h后 ,观察结果 ,看
有无抑菌圈 ,并测量大小以确定其抑菌能力
的大小 。
1.3.2　制作药敏片:在干燥的培养皿中倒入
上述的浓缩浸提液 30mL,用镊子将滤纸片
夹入浸泡 4h后 ,取出置于另一干燥器皿中 ,
再置于真空鼓风于干燥箱中 , 60℃左右 ,干燥
药敏片 ,待干燥后 ,连同培养皿取出 ,置无菌
箱中待用。
1.3.3　抑菌试验:将金黄色葡萄球菌 、大肠
埃希菌 、沙门氏菌 、枯草杆菌 、青霉菌 、黄曲霉
菌分别划线接种于平皿培养基上 ,并且每种
细菌接种四个培养基 A、B、C、D。用经酒精
灯灭菌的接种环挑取适量的细菌培养物 ,以
划线方式将细菌涂布于平皿培养基上。具体
方法为用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿
边缘相对四点涂菌 ,以每点开始划线至平皿
的 1/2。然后 ,找到第二点划线至平皿的 1 /
2 ,依次划线 ,直至细菌均匀涂布于平皿。将
镊子于酒精灯火焰灭菌后略停 ,取药敏片平
贴于平皿培养基表面 。为了使药敏片与培养
基紧密相贴 ,可用镊子轻按几下药敏片。霉
菌 29℃左右 、细菌 37℃恒温培养 24h测量清
晰抑菌圈直径(mm)。
2　结果
在涂有细菌的琼脂平板上 ,抗菌药物在
19　Vol.38, № 4　　　　　　　　　　　　　　　　研究报告　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
琼脂内向四周扩散 ,其浓度呈梯度递减 ,因此
在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑
制 。过夜培养后形成一个抑菌圈 ,抑菌圈越
大 ,说明该菌对此药物敏感性越大 ,反之越
小 ,若无抑菌圈 ,则说明该菌对此药具有耐药
性或敏感性差(见图 1)。除此之外其直径大
小还与药物的浓度 、划线细菌的浓度有直接
关系。
图 1　药敏试验结果
表 1　大青叶体外抑菌试验的结果(mm)
菌种 A B C D 平均抑菌圈
金黄色葡萄球菌 16.8 18.2 15.5 16.2 16.675
大肠埃希菌 10.4 9.0 9.5 10.0 9.725
沙门氏菌 8.5 7.3 7.0 7.4 7.550
枯草杆菌 9.2 9.0 8.5 9.8 9.125
青霉菌 13.0 10.0 10.5 12.0 11.375
黄曲霉菌 13.3 11.0 11.6 12.0 12.725
　　大青叶的水浸液对上述各种细菌均有一
定的抑制作用 ,其中对金黄色葡萄球菌作用
最强(平均抑菌圈为 16.675mm),霉菌次之
(青霉菌的平均抑菌圈为 11.375mm,黄曲霉
菌的平均抑菌圈为 12.725mm),大肠埃希菌
和枯草杆菌较差(大肠埃希菌的平均抑菌圈
为 9.725mm, 枯草杆菌的平均抑菌圈为
9.125mm), 沙门氏菌最弱 (沙门氏菌的平
均抑菌圈为 7.550mm)(见表 1)。这一结果
论证了大青叶的广谱抗菌作用和有利于大青
叶在临床上的进一步推广和应用 ,并且也能
为临床疾病的治疗提供依据。
3　讨论与小结
通过上述大青叶的体外抑菌试验 ,进一
步确认了大青叶的广谱抗菌作用 ,对细菌和
霉菌都有较强的作用 ,特别是金黄色葡萄球
菌 ,这与郑剑玲等人 [ 7] 叙述基本吻合;在本
试验中大青叶对革兰氏阴性菌作用较弱 ,这
与赵良忠等人 [ 8]的研究不相一致 ,可能与菌
株或试验条件有关。如果要证实大青叶对革
兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的差异 ,需要做
进一步的研究。
中草药在我国兽医临床中使用已有数千
年历史 ,具有资源广泛 、价格低廉 、毒副作用
极小和不易导致耐药性产生等优点 ,这是其
它抗生素和化学合成药物所无法相比的 。在
当今世界回归大自然与追求绿色食品的呼声
中 ,中草药在国内畜牧养殖业中的应用已日
益受到重视 ,包括日本 、韩国 、美国 、欧盟等发
达国家和地区也逐步意识到这一点 ,并进行
积极的探索 。因此 ,使用中草药防治畜禽疾
病将有很广的发展前景。当然 ,这需要在寻
找有效的中草药 、研究新的中草药制剂与中
草药作用机理等方面投人更大的人力 、物力 、
财力 [ 9] 。
主要参考文献
[ 1] 陈海红 ,孙建宇.大青叶的研究进展 [ J] .中国药
业 , 2004.13(8):79.
[ 2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)
[ M] .北京:化学工业出版社.2000.
[ 3] 瞿自明 ,徐方舟 ,江锡基.兽医中草药大全 [ M] .
北京:中国农业科技出版社 , 1989:103.
[ 4] 朱煌根.板蓝根冲剂的质量控制指标的商讨 [ J] .
中成药 , 1990, 12:10.
[ 5] 李　玲 ,董同义 ,李修禄 ,等.大青叶类药材及其质
量控制的研究 [ J] .药学学报 , 1994, 29(2)∶ 128 ～ 131.
[ 6] 许小琴.消肿解毒饮的体外抑菌及利尿试验 [ J] .
中兽医医药 , 2000, 6∶4.
[ 7] 郑剑玲 ,王美惠 ,杨秀珍 ,等.大青叶和板蓝根提取
物的抑菌作用研究 [ J] .中国微生态学杂志 , 2003, 15(1)
∶ 18.
[ 8] 赵良忠 ,王放银 , 段林东.大青叶抗菌物质提取及
抗菌效果的研究 [ J] .食品科学 , 2004, 25(11)∶138.
[ 9] 张敏辉 ,庞　露.138株葡萄球菌对抗生素耐药情
况分析 [ J] .重庆医学 , 2002, 31(1)∶ 48.
20 　　 　　　　　　　　　　　　甘肃畜牧兽医　　　　　　　　　　　2008年 4(总 201)期