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不同干燥处理的罗汉果化学成分色谱指纹图谱分析



全 文 :广西农业科学 2009年第 40卷第 6期
罗汉果(Siraitia grosvenorii)为葫芦科罗汉果属
多年生宿根茎性藤本植物, 是我国特有的经济、药
用植物,为广西桂北地区传统特产。在民间,罗汉果
干果作为祛痰剂, 在治疗百日咳、 慢性气管炎、感
冒、便秘、胃肠小疾等方面疗效显著[1]。 目前,罗汉
果种植多为小户分散型,市面上销售的干果系种植
户利用自家简陋的土炕烘烤而成,土炕温度不容易
控制,极可能导致产品质量良莠不齐。此外,判断罗
汉果干果质量主要采用外观识别法 [2]和利用高效
液相色谱法测定罗汉果苷V含量 [3],尚缺乏科学有
效的检测方法。
指纹图谱技术作为一种多组分复杂样品的有
效质量控制方法, 能够反映出待测样品的整体性、
特征性,目前已被广泛用于中草药及其各种制剂的
不同干燥处理的罗汉果化学成分色谱
指纹图谱分析
卢凤来,李典鹏*,刘金磊,黄永林
广西壮族自治区
中 国 科 学 院 广西植物研究所, 桂林 541006( )
摘要:采用不同干燥温度和时间对6个不同产地的罗汉果鲜果进行处理,利用高效液相色谱指纹图谱及含量测定
方法分析不同处理干果化学成分的差异,同时分析罗汉果果皮、果肉及种子的化学成分及其分布。结果表明,不同温
度干燥的干果化学成分指纹图谱具有差异性,主要色谱峰强度以冷冻干燥样品的最强,96℃干燥的样品最弱;罗汉果
苷V含量也以冷冻干燥处理的最高,96℃干燥处理的最低。此外,罗汉果果皮、果肉、种子色谱图中的主要色谱峰不一
致,表明不同化学成分在果实不同部位的分布不同。因此,指纹图谱可用于检测罗汉果药材的质量,研究结果为科学
炮制罗汉果药材及药效提供依据。
关键词:罗汉果;干燥条件;指纹图谱;成分分析
中图分类号:S668.9 文献标识码:A 文章编号:1002-8161(2009)06-0625-04
收稿日期:2009-03-31
基金项目:桂林市科技经费项目(20070304-2)
作者简介:卢凤来(1979-),女,广西来宾人,硕士,主要从事植物资源开发与利用研究。*为通讯作者,E-mail:ldp@gxib.cn。
Chromatographic fingerprinting analysis on chemical compositions
of Siraitia grosvenorii fruit with different drying treatments
LU Feng-lai,LI Dian-peng*,LIU Jin-lei,HUANG Yong-lin
(Guangxi Institute of Botany,Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences,Guilin 541006, China)
Abstract: The chromatographic fingerprints and content determination method were used to compare the difference in
chemical compositions of Siraitia grosvenorii samples which were produced in six different locations and were dried under
different temperatures and times, and the main chemical components in peel, pulp, and seed of Siraitia grosvenorii and
their distribution were analyzed. The results showed that the fingerprints of chemical components were different in six dif-
ferent samples as dried under different temperatures. The intensity of fingerprint peaks of samples as dried with freezing
was the greatest, while it was the weakest in the ones as dried with 96℃. The content of mogroside V showed the same re-
sults. The main peaks of fingerprints for peel, pulp, and seed of Siraitia grosvenorii were different each other, which indi-
cated that different chemical components were distributed in different organs of Siraitia grosvenorii fruit. Therefore, chro-
matographic fingerprinting can be used to detect the quality of Siraitia grosvenorii, and these results would provide basis on
processing medicinal materials of Siraitia grosvenorii and its medicinal effects.
Key words: Siraitia grosvenorii; dried conditions; chromatographic fingerprinting; chemical composition analysis
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广西农业科学 2009年第 40卷第 6期
质量控制[4~7]。 利用指纹图谱可以较全面分析化学
成分的差异从而评价罗汉果不同加工方法的优劣,
为科学加工罗汉果提供理论依据,并可有效控制罗
汉果产品的质量。本试验通过对经不同干燥处理的
罗汉果干果不同部位进行指纹图谱分析,以了解罗
汉果主要化学成分的分布,为罗汉果的深入开发利
用奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
罗汉果(Siraitia grosvenorii)分别采自广西桂林
临桂县五通乡王能村、中庸乡黄者坪村、中庸乡江
泉村以及宛田乡,将每个产地采收的适量果实分别
分成6份,按6种不同方法进行干燥处理(表1)。另取
广西植物研究所药用植物基地产的新鲜罗汉果10
个,分离果肉、种皮、种子并在70℃烘干。 所有样品
干燥后碾碎并过40目筛,干燥保存备用。
表 1 罗汉果干燥方式
Table 1 The drying methods of Siraitia grosvenorii
编号 Code 处理方法 Processing method
A 冷冻干燥,48h
B 96℃烘干,24h
C 100℃烘5h,80℃烘30h,50℃烘24h
D 40℃烘4h,50℃烘12h,70℃烘50h,60℃烘14h
E 50℃烘干,100h
F 70℃烘干,72h
罗汉果苷Ⅴ由本试验小组从罗汉果中分离获
得,具有严格的光谱学鉴定数据 [8],并经HPLC法测
定质量分数(>98%);色谱纯乙腈购自美国TEDIA公
司,重蒸蒸馏水自制,其他试剂均为AR级。
1. 2 仪器与色谱条件
Agilent-1100分析型高效液相色谱仪, 包括二
极管阵列多波长DAD检测器、四元梯度泵、在线真
空脱气机、7725i手动进样器、HP化学工作站 (美国
Agilent公司)。
1. 2. 1 指纹图谱分析条件 色谱柱:ZORBAX SB-
C18柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:20℃;流动相:
0.05%磷酸(A)—乙腈(B)(梯度洗脱:0→8min: 3%
→13.5%B;8→35min: 13.5%→35%B;35→40min:
35%B);检测时间:40min;流速:0.8mL / min;检测波
长:203nm;进样量:10μl。
1. 2. 2 含量测定分析条件 色谱柱:ZORBAX SB-
C18柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:30℃;流动相:
水(A)—乙腈(B)(梯度洗脱:0→3min:20%→30%
B;3→8min:30%→35%B;8→9min:35%B);流速:
0.8mL / min;检测波长:203nm;进样量:10μl。
1. 3 供试品溶液的制备
精确称量罗汉果粉末0.5g, 置100mL具磨口塞
锥形瓶中,精确加入甲醇25mL,摇匀,称定重量;超
声处理1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重
量;摇匀,以0.45μm的微孔滤膜过滤,滤液作为供试
品溶液。
1. 4 对照品溶液的制备
分别精确称取罗汉果苷V对照品5mg,置于5mL
的容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,即得1mg /mL
的对照品储备液。
2 结果与分析
2. 1 不同干燥处理的罗汉果指纹图谱分析
由于冷冻干燥能较完全保持罗汉果中的化学
成分,所以以冷冻干燥的样品作为对照,对各个色
谱峰紫外光谱图进行对比分析, 选出10个色谱峰。
在上述条件下,将对照品溶液进样,与样品中的各
峰保留时间进行比较,确定色谱图中10号峰为罗汉
果苷V。 为了便于分析, 将色谱指纹图谱分成Ⅰ、
Ⅱ、Ⅲ 3个区,第Ⅰ区的保留时间为2.5~11min,包括
特征峰1、2、3;第Ⅱ区保留时间为11~21min,包括特
征峰4、5、6、7、8; 保留时间大于21min的属于第Ⅲ
区,该区的最大峰10号为罗汉果苷V。
通过对不同样品检测发现,以相同方式处理的
不同产地的罗汉果,其色谱图相似;但经不同温度
干燥的同一产地罗汉果样品,其指纹图谱的色谱峰
强度具有明显差异(图1)。 总体来说,干燥温度升
高,各个色谱峰的强度有所减弱。 96℃烘干的样品
中,10号峰(罗汉果苷V)以外的色谱峰都较弱,说明
高温可能造成化合物含量减少。每个产地以冷冻干
燥指纹图谱作为对照指纹图谱,利用2004中药色谱
指纹图谱相似度评价系统(A版)分析各处理方式
的相似度,结果表明冷冻干燥样品与50℃烘干样品
的相似度高于与其他样品的相似度(表2)。
表 2 不同产地不同处理样品的色谱指纹图谱相似度
Table 2 The similarity of chromatographic fingerpriting for dif-
ferent samples collected from different locations
产地
Location
干燥方式 Drying method
A B C D E F
中庸乡黄者坪村 1 0.790 0.580 0.753 0.842 0.476
五通乡王能村 1 0.756 0.612 0.723 0.783 0.514
中庸乡江泉村 1 0.802 0.579 0.789 0.896 0.635
宛田乡 1 0.698 0.645 0.823 0.865 0.569
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卢凤来等:不同干燥处理的罗汉果化学成分色谱指纹图谱分析 627· ·
广西农业科学 2009年第 40卷第 6期
2. 2 罗汉果不同部位化学成分的指纹图谱分析
对罗汉果果皮、果肉、种子3个部位的化学成分
进行指纹图谱分析,发现其色谱图的主要色谱峰不
一致,但均属于整个果实色谱图的特征峰,说明不
同化学成分在罗汉果中分布有所不同。采用分区方
法,在罗汉果整果的色谱图中,选取10个特征峰,并
划分为3个区域,将果皮、果肉、种子的色谱图与其
比较(图2),发现罗汉果果皮指纹图谱中II区的化学
成分含量较高,主要有4、5、6号3个强峰;果肉中主
要成分是10号峰罗汉果苷V。种子中I区的化学成分
含量较果肉和果皮的高,II区中8号色谱峰所对应的
化学成分也是罗汉果种子的主要成分。 因此,罗汉
果主要化学成分的分布很少重叠,罗汉果各个部位
的化学组分无法相互替代。
2. 3 罗汉果苷V的含量
将罗汉果苷V对照品溶液稀释成0.04、0.10、
0.20、0.50、0.80和1.00mg / mL,分别进样分析,记录
流出曲线。 以样品峰面积对样品浓度作图,得到罗
汉果苷V校正曲线:y=3332.9x+13.733, 相关系数r=
0.9995。 样品检测结果表明(图3),不同温度干燥的
罗汉果样品中,以冷冻干燥样品的罗汉果苷V含量
最高; 温度升高, 罗汉果苷V的含量有所降低,以
96℃干燥的含量最低, 与对照相比, 减少了21%~
43%,这与指纹图谱分析结果一致。 因此建议罗汉
果烘烤时温度不宜过高。 处理C中开始使用100℃,
随后温度逐渐降低至50℃,其结果与D、E、F相差不
大,这是否表示在烘烤过程中一开始使用较高的温
度,在后面温度降低,既能缩短烘烤时间,又不降低
成分含量,还有待进一步研究。
3 讨论
通过利用高效液相指纹图谱建立了罗汉果药
材指纹图谱,方法学考察表明该方法稳定性、重现
性、精密度均良好,利用该方法分别对不同产地、不
同品种、不同生长时期(已另外作报道)、不同干燥
处理的罗汉果进行检测,结果表明该技术对不同来
源的药材具有鉴别作用,不同罗汉果药材指纹图谱
具有特征性, 说明指纹图谱能较全面反映药材质
量,可用于罗汉果药材的质量评价与控制。
指纹图谱的建立应从样品的整体性出发,通过
对足够样品的图谱进行比较、辨认,找出可以构成
“指纹”的特征峰,而单纯以峰数的多少、峰的高低
(或大小)来选取指纹峰不一定可靠。本试验在仔细
观察各个样品色谱图的基础上,以能否构成“指纹
特征”为依据,选取了10个色谱峰组成罗汉果的指
纹图谱, 如图1中的4、6、10号峰为罗汉果主要药效
成分的色谱峰,故被选入;其他峰在不同样品中的
大小各有差别,也构成了“指纹特征”,故也被选入。
经不同温度烘烤的罗汉果其HPLC指纹图谱有
差异,即使是共有峰,各被测样品的峰面积也相差
较大。 因此为保证产品质量的稳定,应严格控制药
材加工过程的温度和时间等条件。本研究利用多个
温度对罗汉果进行烘烤,为科学炮制罗汉果药材提
供了一定的依据。
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(责任编辑 韦莉萍)
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