全 文 ：收稿日期:2010-09-28; 修订日期:2011-03-30
基金项目:甘肃省重大科技专项资助项目 (No． 092GKDA0033) ;
中国科学院“百人计划”资助项目(No． O861010ZYO)
作者简介:李雪虎(1980-) ，男(汉族) ，山东金乡人，现任中国科学院近代
物理研究所助理研究员，博士学位，主要从事中药新药研发工作．
* 通讯作者简介:梁剑平 (1963-) ，男 (汉族) ，山西平遥人，现任中国科学
院近代物理研究所研究员，从事中药新药研发工作．
大青叶的化学成分的研究
李雪虎，梁剑平* ，陆锡宏
(中国科学院近代物理研究所重离子辐照药物研发中心，甘肃 兰州 730000)
摘要:目的 为大青叶 Isatis indigotica Fort的药效物质基础提供依据。方法 利用制备薄层、反复硅胶、Sephadex LH － 20
等方法进行分离纯化，根据理化性质及波谱数据对分离的化合物进行结构鉴定。结果 分离得到 8 个化合物，分别鉴定
为亚油酸 (Ⅰ) ，亚油酸 － 1 －单甘油酯 (Ⅱ) ，香草醛 (Ⅲ) ，靛玉红 (Ⅳ) ，4(3H)－喹唑酮 (Ⅴ) ，水杨酸 (Ⅵ) ，丁香酸
(Ⅶ) ，丁香苷 (Ⅷ)。结论 化合物(Ⅰ) ，(Ⅱ) ，(Ⅲ) ，(Ⅷ)为首次从大青叶中分离得到。
关键词:大青叶; 化学成分; 结构鉴定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 041
中图分类号:R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2144-01
大青叶是十字花科(Cruciferae)菘蓝属(Isatis)植物菘蓝 Isa-
tis indigotica Fort．的干燥叶，其地下部分为板蓝根，具有清热解
毒，凉血利咽的功效，现代药理研究表明具有抗菌、抗癌、抗病毒、
增强免疫调节的作用［1］。大青叶作为传统中药，其疗效得到广
泛认同，为进一步开发该中药，寻找其药理活性成分，便于质量控
制，作者对大青叶的化学成分进行了系统的分离研究。
1 仪器与材料
X24 数字显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司) ，Varian
INOVA2400FTNMR (USA)核磁共振仪，ESI － MS 用 Agilent 1100
LC － MSD － Trap － VL 液质联用仪和 BrukerAPEX II HR － MS 质
谱仪测定、薄层色谱硅胶(GF254)和柱色谱硅胶(200 ～ 300 目)
均为青岛海洋化工厂产品。
药材购自甘肃省兰州市复兴厚药材有限公司，植物标本由兰
州大学附属第二医院王晓飞博士鉴定，植物标本存储于中国科学
院近代物理研究所重离子辐照药物研发中心，编号:2010L01。
2 方法
阴干的大青叶 9． 3 kg，以 5 倍量 95%乙醇室温浸泡提取 3
次，每次 1 周，过滤并弃去药渣，合并滤液，用旋转蒸发仪减压浓
缩至无醇味，得到总浸膏 580 g。总浸膏经硅胶柱色谱分离，依次
用三氯甲烷、醋酸乙酯和甲醇洗脱，分别得到三氯甲烷洗脱组分
Fr． A (28． 0 g) ，醋酸乙酯洗脱组分 Fr． B (32． 0 g)和甲醇洗脱组
分 Fr． C (109． 0 g)。
其中氯仿与醋酸乙酯部分合并经硅胶柱色谱，以氯仿 －甲醇
(1∶ 0，9∶ 1，8∶ 2，0∶ 1)梯度洗脱，得到 F1 ～ F12共 12 个流分。
对各个流分经普通敞口柱层析和制备薄层层析，分别用石油醚 －
醋酸乙酯，石油醚 －丙酮，氯仿 －甲醇，氯仿 －丙酮，氯仿 －醋酸
乙酯，甲醇 －水，反复洗脱，结合 Sephadex LH － 20 纯化，依次制
得化合物Ⅰ ～Ⅶ的纯品。从正丁醇层得到化合物 Ⅷ。
3 结果
3． 1 化合物Ⅰ 无色固体，m． p． 38 ～ 39℃;EI － MS m/z (rel
int) :280( ［M］+ 14) ，265( ［M －15］+ 1) ，252 (1) ，213 (5) ，143
(3) ，129 (17) ，115 (8) ，97 (18) ，83 (26) ，73 (68) ，67 (56) ，60
(63) ，57 (42) ，43 (69) ;，1H － NMR (400 MHz，CDCL3，ppm，
TMS) :δH 5． 36 (4H，m，H － 9，10，12，13) ，2． 77 (2H，dd，J = 6． 0
Hz，H －11) ，2． 36 (2H，t，J = 7． 5 Hz，H －2) ，2． 05 (4H，dt ，J =
6． 7，6． 7 Hz，H －8，14) ，1． 64 (2H，m，H － 3) ，1． 26 － 1． 33 (14H，
m，H －4 ～ 7，H － 15 ～ 17) ，0． 90 (3H，t，J = 6． 5 Hz，H － 18) ;13 C
－ NMR (100 MHz，CDCL3，δ ppm) :δC14． 1 (C － 18，CH3) ，22． 6
(CH2) ，24． 6 (CH2) ，25． 6 (CH2) ，27． 1 (CH2) ，29． 0 (CH2) ，
29． 1 (CH2) ，29． 2 (CH2) ，29． 5 (CH2) ，29． 6 (CH2) ，31． 5
(CH2) ，31． 9 (CH2) ，34． 1 (CH2) ，127． 9 (CH) ，128． 0 (CH) ，
130． 0 (CH) ，130． 2 (CH) ，180． 5 (C = O)。上述数据与文献［2］
对照基本一致，故鉴定化合物 1 为亚油酸。
3． 2 化合物Ⅱ 无色油状物，1H － NMR (CDCl3，TMS，ppm，
400． 16 MHz) :H 5． 35 (m，2 × CH = CH) ;13 C － NMR (CDCl3，
TMS，ppm，100． 63 MHz) :C 174． 3 (C) ，130． 2 (CH) ，129． 9
(CH) ，128． 0 (CH) ，127． 8 (CH) ，70． 2 (－ OCH －) ，65． 0 (－
OCH2) ，63． 3 (－ OCH2) ，34． 2 (CH2) ，29． 7 (CH2) ，14． 0
(CH2)。上述数据与文献［3］对照基本一致，故鉴定化合物 Π为
亚油酸 － 1 －单甘油酯。
3． 3 化合物Ⅲ 无色针晶，m． p． 147 ～ 148 ℃;1H － NMR
(CDCl3，TMS，ppm，400． 16 MHz) :H 9． 77 (1H，s，CHO) ，7． 41
(2H，m，H －2，6) ，7． 00 (1H，d，J = 8． 4 Hz，H －5) ，6． 57 (1H，s，
OH) ，3． 90 (1H，s，OCH3) ;
13C － NMR (CDCl3，TMS，ppm，100． 63
MHz)C 129． 6 (C，C － 1) ，108． 7 (CH，C － 2) ，147． 1 (C，C － 3) ，
151． 8 (C，C － 4) ，114． 4 (CH，C － 5) ，127． 5 (CH，C － 6) ，191． 0
(C，CHO) ，56． 0 (CH3，OCH3)。上述数据与文献［4］对照基本一
致，故鉴定化合物Ш为香草醛。
3． 4 化合物 Ⅳ 暗红色粉末(氯仿) ，EI － MS m/z:262［M］+
(100) ，234 (75) ，205 (50) ，131 (21) ，103(35)。IR (KBr)
cm －1:3 216，1 664，1 619，1 579，751。1H － NMR (500 MHz，DMSO
－ d6)δ:11． 31 (1H，s，H － 21＇) ，11． 27 (1H，s，H － 21) ，9． 07
(1H，d，J = 7． 1 Hz，H － 24) ，7． 90 (1H，d，J = 7． 1 Hz，H － 24＇) ，
7． 79 (1H，dd，J = 7． 5，7． 3 Hz，H － 26＇) ，7． 67 (1H，d，J = 7． 5
Hz，H －27＇) ，7． 49 (1H，dd，J = 7． 8，7． 4 Hz，H －26) ，7． 23 (3H，
m，H －25，5＇，7 )。13C － NMR (100． 63 MHz，DMSO － d6)C:171． 8
(C － 22) ，107． 5 (C － 23 ) ，125． 5 (C － 24 ) ，122． 0 (C － 25) ，
130． 0 (C － 26) ，110． 4 (C － 27) ，141． 8 (C － 28) ，122． 3 (C －
29) ，139． 2 (C － 22＇) ，189． 4 (C － 23＇) ，125． 1 (C － 24＇) ，122． 0
(C － 25＇) ，137． 8 (C － 26＇) ，114． 1 (C － 27＇) ，153． 3 (C － 28＇) ，
119． 9 (C － 29＇)。上述数据与文献［5］相对照，鉴定化合物Ⅳ为
靛玉红。
3． 5 化合物Ⅴ 白色粉末(丙酮) ，E I － MS m/z:146［M ］+
(100) ，145 (40) ，119 (15) ，118 (25) ，92 (15) ，91 (17)。IR
(KB r)cm －1:3 440，3 166，3 135，2 981，2 915，2 878，1 701，
1 663，1 614，1 469，1 404，1 389，1 328，1 234，1 170。1H － NMR
(400 MHz，CDCl3)δ:8． 23 (1H，d，J = 7． 8 Hz，H － 25) ，8． 04
·4412·
时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9
(1H，s，H －22) ，7． 75 (1H，dd，J = 7． 8，7． 2 Hz，H － 26) ，7． 69
(1H，d，J = 7． 6 Hz，H －28) ，7． 48 (1H，dd，J = 7． 6，7． 2 Hz，H －
27) ，3． 36 (1H，br s，N － H)。13 C － NMR (100 MHz，CDCl3)δ:
144． 1 (C － 22 ) ，162． 2 (C － 24 ) ，126． 3 (C － 25 ) ，127． 3 (C －
26) ，134． 8 (C － 27 ) ，127． 0 (C － 28 ) ，148． 3 (C － 29 ) ，122． 5
(C － 10)。上述数据与文献［6］相对照，鉴定为 4(3H)－喹唑
酮。
3． 6 化合物 Ⅵ 无色针晶(甲醇) ，m． p． 158 ～ 159 ℃，13 C －
NMR 给出 7 个碳信号:δ172． 1 (－ COOH)、δ161． 3 (C － 22)、
δ135． 8 (C － 24)、δ130． 4 (C － 26)、δ119． 3 (C － 25)、δ117． 2
(C － 23)、δ113． 1 (C － 21)。其中，δ172． 1 为与苯环相连的羧基
碳信号，δ161． 3 为苯环连氧碳信号。结合1H － NMR 谱:δ 7． 79
(H ，d ，J = 8． 0 Hz ，H －26)、δ 7． 51 (H ，t ，J = 8． 0 Hz ，H －
24)、δ 6． 95 (H ，t ，J = 8． 0 Hz ，H －25)、δ 6． 91 (H ，d ，J =
8． 0 Hz ，H －23)显示化合物含有苯环结构且为双取代。上述数
据与文献［7］相对照，鉴定该化合物为邻羟基苯甲酸，即水杨酸
(salicylicacid)。
3． 7 化合物 Ⅶ 无色针晶(甲醇) ，m． p． 212 ～ 213 ℃;1H －
NMR (DMSO － d6，TMS，ppm，400． 16 MHz) :H 12． 80 (1H，s，－
COOH) ，H 9． 25 (1H，s，－ OH) ，H 7． 22 (2H，s，H － 2，H － 6) ，
H 3． 84 (6H，s，－ OCH3 × 2) ;
13C － NMR (100 MHz，DMSO － d6，)
δ:169． 3 (－ COOH) ，148． 5 (C － 3，C － 5) ，142． 5 (C － 4) ，120． 8
(C － 1) ，108． 0 (C － 2，C － 6) ，56． 1 (－ OCH3 × 2)。上述数据与
文献［8］相对照，鉴定为丁香酸。
3． 8 化合物 Ⅷ 无色针状结晶;m． p． 297 ～ 298 ℃;1H ～ NMR
(丙酮 － d6，TMS，ppm，400． 16 MHz) :H 6． 71 (H － 3，H － 5，s，
2H) ，6． 46 (H － ，d，J = 16． 0 Hz) ，6． 33 (H － ，dt，J = 6． 0，16． 0
Hz) ，4． 12 (H － ，dd，J = 1． 2，6． 0 Hz) ，3． 83(－ OCH3，6H) ，4． 90
(H －1 ，dd，J = 2． 4，7． 2 Hz) ;13 C － NMR (CD3COCD3) :C 133． 9
(C －1) ，152． 9 (C －2) ，104． 5 (C －3) ，132． 9 (C －4) ，104． 5 (C －
5) ，152． 9 (C －6) ，130． 3 (C － ) ，128． 7 (C － ) ，61． 5 (C － ) ，102．
7 (C －1＇) ，74． 22 (C －2＇) ，76． 5(C － 3＇) ，69． 9 (C － 4＇) ，77． 3 (C
－5＇) ，60． 9 (C － 6＇) ，56． 4(－ OCH3)。上述数据与文献［9］相对
照，鉴定为丁香苷(Syringin)。
参考文献:
［1］ 郑虎占，董泽宏，佘 靖．中药现代研究与应用，第 1 卷［M］．北京:
学苑出版社，1997:328．
［2］ 刘世旺，付宏征，林文翰． 糙苏的化学成分的研究 (Ⅰ) ［J］． 中草
药，1999，30 (3) :161．
［3］ 王利勤，赵友兴，周 露，等． 鱼腥草的化学成分研究［J］．中草药，
2007，38 (12) :1788．
［4］ 贾红梅，李 宁，李 铣． 红车轴草化学成分研究［J］． 中南药学，
2008，6 (5) :534．
［5］ 刘 远，欧阳富，于海洋，等． 马蓝叶化学成分研究［J］． 中国药物
化学杂志，2009，19 (4) :273．
［6］ 邓永红，徐任生，叶 阳．常山叶中一种新的喹唑酮生物碱［J］．中
国药学，2000，9 (3) :116．
［7］ 原 忠．北沙参化学成分及生物活性的研究［M］．沈阳药科大学，
2000．
［8］ 李 微，陈发奎，尹相武，等．大青叶的化学成分［J］．沈阳药科大学
学学报，2005，22 (1) :15．
［9］ 刘自民，贾忠建，朱子清． 长毛风毛菊化学成分的研究［J］．高等学
校化学学报 ，1989，10 (11) :1090．
收稿日期:2010-10-22; 修订日期:2011-02-28
基金项目:湖南省教育厅科学研究项目(No． 09C499) ;
湖南农业大学人才基金(No． 08YJ15) ;
长沙市科技局科技计划(No． K0902020 － 11)
作者简介:谢红旗(1974-) ，男(汉族) ，湖南邵阳人，现任湖南农业大学园
艺园林学院副教授，博士学位，主要从事天然产物活性成分提取分离研究
工作．
* 通讯作者简介:刘东波(1970-) ，男(汉族) ，湖南长沙人，现任湖南农业
大学园艺园林学院副教授，博士学位，主要从事天然药物药理研究工作．
酶法提取蛹虫草中虫草素的研究
谢红旗，胡 瑕，罗 巍，夏志兰，刘东明，刘东波*
(湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128)
摘要:目的 研究 UPLC测定虫草素的方法及酶法提取蛹虫草中虫草素的工艺条件。方法 对酶种类、酶用量、酶解温度、
酶解时间、酶解 pH值进行考察，确定最佳提取工艺 。结果 中性蛋白酶提取蛹虫草中虫草的最佳工艺为:酶用量 1． 5%，
酶解温度 50℃，酶解 pH值 5． 5，酶解时间 60 min。结论 该工艺条件下，虫草素提取得率为 0． 732%，与未加酶的热水浸
提相比，虫草素提取得率增加 6． 2 倍。
关键词:中性蛋白酶; 蛹虫草; 虫草素; UPLC
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 042
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2145-03
蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草，
为子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属模式种，是蛹虫草真菌
寄生在鳞翅目夜蛾科昆虫蛹体上形成的子座与蛹体的结合
体［1，2］。其子实体和菌丝体中含有虫草多糖和虫草素等多种生
物活性物质，与冬虫夏草具有相似的药理功能。虫草素是虫草属
真菌中的生物活性物质，其化学结构为 3 ＇ － 脱氧腺苷(3＇－ de-
oxyadenosine) ，是一种核苷类抗菌药，被证明具有多种药理作用，
具有免疫调节作用，抗肿瘤作用，抗菌、抗病毒、抗炎、抗白血病及
抗衰老作用［3 ～ 6］，虫草素含量的高低是衡量虫草属真菌品质的重
要指标之一，虫草素尤以蛹虫草中含量为高，而蛹虫草与冬虫夏
草相比价格便宜许多，因此有望成为冬虫夏草的替代品。因此从
蛹虫草中提取分离虫草素受到各方面的广泛关注［7，8］。
虫草素属于极性物质，易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，文
献报道除以水和乙醇为溶剂，采用热水浸提，索氏提取等常规提
取方法外［9］，还报道了超声波辅助提取和微波辅助提取等一些
现代提取分离方法［10 ～ 13］。经过条件优化，上述方法能在一定程
度上提高虫草素的提取得率，但效果不明显。生物酶辅助提取技
术是近些年发展起来用于天然药物活性成分提取的新技术，具有
专一、高效、成本低等特点［14，15］。本研究选择纤维素酶、中性蛋
白酶、酸性蛋白酶及果胶酶辅助热水提取人工栽培的蛹虫草子实
·5412·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期