全 文 ：·药品质量控制 ·
反相高效液相色谱法
测定大青叶中邻氨基苯甲酸与丁香酸的含量＊
王文清 ,张　飞 ,方建国 ,李园园 ,汪秋兰 ,汤　杰
(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部 ,武汉　430030)
[摘　要 ] 　目的　建立测定大青叶中邻氨基苯甲酸和丁香酸含量的反相高效液相色谱法。方法　固定相:
LichrosorbC18色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm);流动相:乙腈-水-磷酸(18 ∶82 ∶0.3);检测波长:272 nm;流速:0.8
mL· min-1;柱温:30℃;进样体积:10μL。结果　邻氨基苯甲酸 、丁香酸分别在 12.7 ～ 127.0和 5.10 ～ 51.0 μg· mL-1
浓度范围内线性关系良好;邻氨基苯甲酸的平均回收率为 98.7%(RSD=1.0%);丁香酸的平均回收率为 99.0%(RSD=
1.2%)。结论　该方法灵敏 、快速 , 准确可靠。
[关键词 ] 　大青叶;邻氨基苯甲酸;丁香酸;反相高效液相色谱法
[中图分类号 ] 　R927.2;R286　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2006)05-0456-02
DeterminationofAnthranilicAcidandSyringicAcidinFoliumIsatidisby
RP-HPLC
WANGWen-qing, ZHANGFei, FANGJian-guo, LIYuan-yuan, WANGQiu-lan, TANGJie(Departmentof
Pharmacy, TongjiHospitalAfiliatedwiththeTongjiMedicalColege, HuazhongUniversityofScienceand
Technology, Wuhan430030, China)
ABSTRACT　Objective　ToestablishaRP-HPLCmethodtodeterminethecontentsofanthranilicacidandsyringicacid
inFoliumIsatidis.　Methods　ChromatographywascarriedoutonaLichrosorbC18 column(4.6mm×150mm, 5 μm);mobile
phase:acetonitrile-water-phosphoricacid(18 ∶82 ∶0.3);flowrate:0.8 mL· min-1;columntemperature:30 ℃, sample
volume:10μL;andthedetectionwavelengthwas272 nm.　Results　Agoodlinearityofanthranilicacidwasobtainedwithin
12.7-127.0 μg· mL-1andsyringicacidwaswithin5.10-51.0 μg· mL-1.Theaveragerecoveriesofanthranilicacidwas
98.7%(RSD=1.0%);andsyringicacidwas99.0%(RSD=1.2%), respectively.　Conclusion　Themethodissensitive,
rapid, andaccurate.
KEYWORDS　FoliumIsatidis;Anthranilicacid;Syringicacid;RP-HPLC
　　大青叶系十字花科菘蓝属植物菘蓝 IsatisIndigo-
ticaFort.的干燥叶 ,性寒味苦 ,具有清热解毒 、凉血消
肿之功效。药理研究表明 ,大青叶主要有抗病毒 、抗细
菌内毒素 、抗菌 、抗肿瘤和免疫调节等功能 [ 1] 。其抗
内毒素作用日益引起研究者的重视。本课题组曾发现
邻氨基苯甲酸和丁香酸具有明显的抗内毒素活
性 [ 2, 3] 。笔者在本实验中建立了反相高效液相色谱法
测定大青叶中邻氨基苯甲酸和丁香酸含量的方法。该
方法操作简便 、准确 ,重复性好 。
1　仪器与试药　
美国 Agilent1100型高效液相色谱仪 , 7725i定量
[收稿日期 ] 　2005-05-12　　　[修回日期 ] 　2005-06-20
[基金项目 ] 　＊国家自然科学基金资助项目(基金编号:
39800193)
[作者简介 ] 　王文清(1969 -), 女 , 四川遂宁人 , 主管药
师 , 在读博士 ,主要从事中药有效成分活性评价与药物分析研
究工作。电话:027-83649095。
阀 ,可变波长紫外检测器;UV-265FW型分光光度计
(日本岛津);AUW 220D型双量程分析天平。甲醇为
色谱纯 ,磷酸为分析纯 ,水为多效纯化水。邻氨基苯甲
酸(批号:20020510,购自湘中地质实验研究所 ,面积归
一化法测得纯度为 99.3%),丁香酸(批号:S6881-5G,
供含量测定用 ,购自德国 Sigma公司),大青叶(定点种
植并采集于安徽亳州 ,经华中科技大学同济医学院方
建国教授鉴定为十字花科植物菘蓝 IsatisIndigotica
Fort.的干燥叶)。
2　方法与结果　
2.1　色谱条件　固定相:LichrosorbC18色谱柱 (4.6
mm ×150 mm, 5 μm);流 动 相:乙 腈-水-磷 酸
(18 ∶82 ∶0.3);流速:0.8 mL· min-1;检测波长:
272nm;柱温:30℃;进样量:10μL。
2.2　对照品溶液的制备　分别取邻氨基苯甲酸及丁
香酸对照品适量 ,精密称定 ,各加甲醇制成每毫升含邻
氨基苯甲酸 0.05mg及丁香酸 0.02 mg的溶液 ,即得 。
·456· HeraldofMedicineVol.25No.5 May2006
2.3　供试品溶液的制备　取大青叶粉末 3.0 g,精密
称定 ,置索氏提取器中 ,加乙醚 60 mL,回流提取 8 h,
过滤 ,挥干乙醚 ,残渣加甲醇溶解 ,并定量转移至 10
mL容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤
液作为供试品溶液。
2.4　线性关系考察　分别取邻氨基苯甲酸对照品
25.4mg,丁香酸对照品 10.2 mg,精密称定 ,加甲醇溶
解并定容至 100 mL,作为储备液 。精密吸取储备液
0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL分别置于 10 mL容量
瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 。按上述色谱条件分别进样
10 μL,测定峰面积 。邻氨基苯甲酸在 12.7 ～ 127.0
μg·mL-1的浓度范围内线性回归方程为 Y=80.574X-
1.698 , r=0.999 8(n=6);丁香酸在 5.10 ～ 51.0
μg·mL-1 的 浓 度 范 围 内 线 性 回 归 方 程 为
Y=25.043X-1.104 1, r=0.999 9(n=6)。
2.5　精密度试验　精密吸取储备液 3.0 mL置于 50
mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀。连续进样 6次 ,每
次进样 10 μL,测得邻氨基苯甲酸及丁香酸峰面积
RSD值分别为 0.81%和 0.93%。
2.6　稳定性试验　取同一份样品溶液 ,分别在 0, 2,
4, 6, 8 h分别进样测定 ,样品峰面积基本保持不变 ,邻
氨基苯甲酸和丁香酸的 RSD分别为 0.62%和 0.78%。
说明供试品溶液中的邻氨基苯甲酸和丁香酸在放置 8
h内含量稳定 。
2.7　重复性试验　取 5份大青叶粉末 ,每份约 3.0g,
精密称定 ,按照 “ 2.3”项下方法制备供试品溶液 ,依法
测定 ,邻氨基苯甲酸和丁香酸的 RSD值分别为 1.54%
和 1.27%,表明本法重复性良好。
2.8　回收率试验　精密称取 9份已知含量的大青叶
粉末 1.5 g,分别精密加入线性试验项下储备液 2.0,
3.0, 4.0 mL。照 “ 2.3”项下方法操作 ,结果 3种浓度
的回收率分别为:邻氨基苯甲酸 99.4%(RSD=
0.7%), 98.2%(RSD=1.3%), 98.6%(RSD=1.1%);
丁香酸:98.1%(RSD=1.0%), 99.8%(RSD=1.2%),
99.0%(RSD=1.4%)。
2.9　样品的含量测定　按 “ 2.3”项下方法制备大青
叶供试品溶液 ,依法测定含量 ,大青叶中邻氨基苯甲酸
的含量为 0.052 mg· g-1 , 丁香酸的含量为 0.027
mg·g-1(n=3)。
3　讨论　
笔者在本实验中首次采用反相高效液相色谱方法
同时测定了大青叶中邻氨基苯甲酸和丁香酸的含量。
为该药材的质量控制提供了操作简便 、准确 、重复性好
的测定方法 。
[参考文献 ]
[ 1] 　王　寅 , 乔传卓.一阶导数光谱法测定大青叶中邻氨基苯
甲酸的含量 [ J] .中草药 , 2000, 31(9):664-665.
[ 2] 　WuXY, QinGW, ShengZY, etal.Chemicalconstituents
ofisatisindigotical[ J] .PlantaMed, 1997, 63(33):55-57.
[ 3] 　FangJG, LiuYH, WangWQ, etal.Antiendotoxicefectof
O-AminobenzoicacidfromRadixIsatiais[ J] .中国药理学
报 , 2005, 26(5):1025-1028.
金边瑞香滴鼻剂的质量标准研究＊
熊学敏 1 ,曹　珏 2 ,张晓辉 1 ,吉刚峰 3 ,朱建平 3 ,陈　乐 1 ,孙　磊 4
(1.江西中医药研究院中药所 ,南昌　330077;2.江西医学院 ,南昌　330006;3.江西中医学院
中药学专业 2004届硕士研究生班 ,南昌　330006;4.江西中医学院中药制药专业本科班 ,南昌　330006)
[摘　要 ] 　目的　建立金边瑞香滴鼻剂中瑞香素的鉴别及含量测定方法。 方法　采用高效液相色谱法 , 固定相:
DiamonsilTMC18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈-水(64 ∶36);流速:1.0 mL· min-1;检测波长:210 nm。
结果　在 5.08 ～ 90.19 μg· mL-1范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系 , 稳定性良好 , 平均加样回收率为 98.94%, RSD
为 2.95%;重复性 RSD为 1.49%。结论　该方法精密度高 ,分离度良好 , 可作为测定金边瑞香滴鼻剂中瑞香素含量的方
法 , 为该制剂的质量控制提供了依据。
[关键词 ] 　金边瑞香;瑞香素;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号 ] 　R927.1;R286　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2006)05-0457-03
QualityStandardsofDaphneodoraThunbNoseDrops
XIONGXue-min1 , CAOJue2 , ZHANGXiao-hui1 , JIGang-feng3 , ZHUJian-ping3 , CHENLe1 , SUNLei4(1.
JiangxiProvincialInstituteofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica, Nanchang330077, China;2.
JiangxiMedicalColege, Nanchang330006, China;3.Clasof2004 SessionsforMastersGraduated,
·457·医药导报 2006年 5月第 25卷第 5期