全 文 ：第 28卷 ,第 5期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 8 , No . 5
2 0 1 1年 9月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory September , 20 11
大青叶提取物中总黄酮含量测定
① 联系人 ,手机: ( 0) 15803953817;电话: ( 0395) 2112611;传真: ( 0395) 2112612; E-mai l: bei zhan yu@ sina. com; yu99999@ 126. com
作者简介:卑占宇 ( 1964— ) ,男 ,河北省唐山市人 ,副教授 ,主要从事实验教学改革以及中草药化学成分分析研究工作。
收稿日期: 2011-01-13;接受日期: 2011-02-22
卑占宇①　罗晓冰
(漯河医学高等专科学校药学系　河南省漯河市大学路 148号　 462002)
摘　要　建立大青叶中总黄酮含量测定方法。 以超声辅助、 70%乙醇提取大青叶总黄酮 ,采用紫外可
见分光光度法对大青叶总黄酮进行测定。 芦丁标准溶液线性方程为: A = 0. 01087C - 0. 0005833,
r= 0. 9999。加标回收率为 98. 00% ,相对标准偏差为 1. 45%。方法简便、快速、准确 ,且稳定性好 ,适用于测
定大青叶总黄酮的含量。
关键词　大青叶 ;总黄酮 ;紫外 -可见分光光度法
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2011) 05-2570-03
1　引言
大 青叶 ( Folium Isatidis)是十字花科 ( Cruciferae)菘蓝属 ( Isatis)植物菘蓝 ( Isatis indig otica
Fort. )的叶 ,性味与归经:苦 ,寒 ,归心、胃经 ,其根在药典中称为板蓝根。大青叶具有清热解毒 ,凉血
利咽的功效 ,现代药理研究表明具有抗菌、抗病毒、增强免疫调节的作用 [1 ]。 主产于江苏、安徽、河
北、河南、浙江等地。大青叶提取物中总黄酮含量测定研究未见报道。本文研究大青叶提取物中总
黄酮提取工艺最佳条件及其含量测定 ,以期为开发利用其植物资源提供科学依据。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
New Human U P 900型超纯水器 (韩国 Human公司 ) ; BT 125D电子天平 (北京赛多利斯天平
仪器厂 ) ; WF-4000微波快速反应系统 (上海屹尧分析仪器有限公司 ) ; UV 1900 PPC紫外 -可见分
光光度计 (上海亚研电子科技有限公司 ) ; RE-52A型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂 )。
芦丁标准品 ( A1049 Rutin UV≥ 98% ,成都曼思特生物科技有限公司 ) ; NaNO2、 Al( NO3 ) 3、
NaOH、无水乙醇均为分析纯。 实验用水为超纯水 (用单蒸水经超纯水器制得 ,电导率为
18. 3MΨ· cm)。
大青叶 (河南漯河市第三附属医院中药房 )。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　实验原理
黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮醇苷两大部分。在黄酮类化合物溶液中加入铝离子试剂
后 ,黄酮类化合物中的酚羟基与 Al3+ 生成络合物 ,控制适宜 pH值 ,所生成的络合物在可见区能获
得特征吸收峰 ,其质量浓度与吸光度符合朗伯 -比耳定律 ,可以定量测定 [2 ]。
2. 2. 2　校准曲线的绘制
准确称取 105℃常压干燥至恒重的芦丁标准品 10. 0mg ,用少量 70%乙醇溶液溶解 ,然后转移
至 50mL容量瓶中 ,用 70%乙醇溶液定容至刻度 ,充分混匀。 芦丁标准品的工作液浓度为
0. 2mg /mL,备用。
分别取芦丁标准品工作液 0、 0. 05、 1. 00、 1. 50、 2. 00、 2. 50、 3. 00、 3. 50mL于 8个 10mL容量瓶
中 ,各加 5% NaNO2溶液 0. 4mL,放置 6min后 ,加 10% A1( NO3 ) 3溶液 0. 4mL,放置 6min,加 4%
NaOH溶液 4mL,用 70%乙醇溶液定容至刻度 ,摇匀 ,得到芦丁标准溶液 0、 10. 00、 20. 00、 30. 00、
40. 00、 50. 00、 60. 00、 70. 00μg /mL,以不加标准溶液的相应溶液为空白 ,进行全波长扫描 ,在 510nm
处有最大光吸收。因此选择 510nm为测定波长。以空白试剂为参比 ,在 510nm处测定吸光度 ,从而
得校准曲线方程: A= 0. 01087C- 0. 0005833, r= 0. 9999,其线性范围为 0— 70μg /mL。 结果见表 1。
表 1　芦丁标准品校准曲线 (n= 3)
序号 1 2 3 4 5 6 7 8
芦丁标准溶液 C (μg /mL) 0. 00 10. 00 20. 00 30. 00 40. 00 50. 00 60. 00 70. 00
吸光度 A平均值 0 0. 108 0. 216 0. 326 0. 434 0. 544 0. 651 0. 761
2. 2. 3　大青叶中总黄酮提取
准确称取大青叶干燥粉末 2. 50g置于微波反应釜中 ,微波功率为 700W,依据李加林等报道的
盐肤木总黄酮提取工艺研究 [3 ]的方法 ,大青叶总黄酮最佳微波提取工艺条件为温度为 65℃ ,提取
时间为 10min,料液比 ( g /mL)为 1∶ 65, 70%乙醇溶液。按最佳微波提取工艺提取 ,同法提取 3次 ,
合并提取液并 4000r /min离心 3min,将离心后的上清液 ,用旋转蒸发仪减压蒸馏至黄色粘稠状浓
缩液 ,用 70%乙醇溶液溶解并定容至 50mL,得到大青叶样品工作液。
3　结果与讨论
3. 1　样品分析
取大青叶样品工作液 1mL至 50mL容量瓶中 ,加 5% NaNO2溶液 0. 4mL,放置 6min后 ,加
10% Al( NO3 ) 3溶液 0. 4mL,放置 6min,加 4% NaOH溶液 4mL,用 70%乙醇溶液定容至刻度摇匀
静置 15min,制得样品测定液 ,于 510nm波长处 ,按 2. 2. 2中方法测定吸光度 ,按校准方程求得样品
测定液总黄酮的含量为 42. 56μg /mL。 本实验最佳微波提取条件下的提取率按总黄酮提取率 (% )
= (黄酮类化合物质量 /干物料质量 )× 100%计算 ,为 4. 26% 。
3. 2　溶剂对提取率的影响
控制提取时间为 10min,提取温度为 65℃ ,料液比 (g /mL)为 1∶ 65,用不同含量的乙醇溶液为
提取液进行微波辅助提取 ,以 3. 1节中方法测定各提取液中总黄酮的含量。 实验结果表明 ,黄酮提
取率随乙醇溶液的浓度增加先增大后减小 ,当乙醇含量为 70%时 ,微波提取率最高。
3. 3　微波作用时间对提取率的影响
控制提取温度为 65℃ ,料液比 ( g /mL)为 1∶ 65,以 70%乙醇溶液为提取液 ,进行不同时间的
微波辅助提取 ,以 3. 1节中方法测定各提取液中总黄酮的含量。实验结果表明:黄酮提取率随时间
的推移增大 ,但是增加趋势不是很明显 ,考虑经济因素 ,提取时间定为 10min。
3. 4　料液比对提取率的影响
以 70%乙醇溶液为提取液 ,提取温度 65℃ ,以不同的料液比进行微波辅助提取 10min,以 3. 1
2571第 5期 卑占宇等:大青叶提取物中总黄酮含量测定
节中方法测定各提取液中总黄酮的含量。 实验结果表明:黄酮提取率随料液比的增加随之增加 ,考
虑到溶剂与经济因素 ,料液比 (g /mL)选为 1∶ 65。
3. 5　提取温度对提取率的影响
以 70%乙醇溶液为提取液 ,料液比 ( g /mL)为 1∶ 65,在不同的温度下进行微波辅助提取
10min,以 3. 1节中方法测定各提取液中总黄酮的含量。实验结果表明 ,黄酮提取率随提取温度的提
高增大 ,到达一定温度 65℃后增加的趋势基本保持不变 ,因此提取温度选定为 65℃。
3. 6　精密度实验
取 5份大青叶样品工作液 1mL,其他试剂加入量及时间同 3. 1节 ,测定 5次 , RSD= 1. 45% ,表
明样品重现性良好。
3. 7　回收率实验
准确量取大青叶样品工作液 1mL和标准品工作液 10mL至 100mL容量瓶中 ,加 5% NaNO2
溶液 1. 0mL,放置 6min后 ,加 10% Al( NO3 ) 3溶液 1. 0mL,放置 6min,加 4% NaOH溶液 10mL,用
70%乙醇溶液定容至刻度摇匀静置 15min,测定总黄酮的含量 ,测定 3次 ,回收率结果见表 2。
表 2　回收率 (n= 3)
样品 加标前
(μg /m L)
加标量
(μg /m L)
加标后
(μg /m L)
回收率
(% )
总黄酮 21. 28 20. 00 40. 88 98. 00
　　从实验结果看 ,回收率为 98. 00% ,说明测定方法简单、准确、有效 ,适用于中药材中总黄酮含
量测定。
4　结论
根据文献 [3]的正交实验可知 ,对大青叶总黄酮提取率的影响顺序为乙醇浓度> 提取温度> 料
液比> 提取时间 ,在最佳微波提取工艺条件下 ,总黄酮含量达到 4. 26%。
参考文献
[1 ]郑虎占 ,董泽宏 ,余靖 .中药现代研究与应用 (第 1卷 ) [M ] .北京:北京学苑出版社 , 1997. 328.
[ 2 ]努尔阿米娜· 阿尤甫 ,阿不都拉· 阿巴斯 .曼陀罗种子中总黄酮含量测定及提取工艺的研究 [ J ].食品科学 , 2008, 29 ( 3):
260— 263.
[3 ]李加林 ,吴素珍 ,卑占宇 .盐肤木总黄酮提取工艺研究 [ J ].时珍国医国药 , 2009, 20( 5): 1116— 1117.
Determination of Total Flavones in the Extract of Folium Isatidis
BEI Zhan-Yu　 LUO Xiao-Bing
( Department of Pharmacy ,Luohe Medical College,Luohe, Henan 462000,P. R.China)
Abstract　 The method for determination of to tal f lav ones in folium isatidis was established. Total
f lavones in folium isatidis w as ext racted with 70% ethanol, assisted by ult rasound and determined wi th
ultraviolet-visible spect rophotometry. Linear equation of rutin standard solution w as
A= 0. 01087C- 0. 0005833(r= 0. 9999) . Recovery of sample was 98. 00% , relative sandard deviation
w as 1. 45% . The method is simple, fast , stable and accurate, and sui table to determine the total
f lavones in folium isatidis.
Key words　 Folium Isatidis; To tal Flavones; Ult raviolet-Visible Spect rophotometry
2572 光谱实验室 第 28卷