全 文 ：大青叶中有机酸药理作用研究
吴启南1＊ ,王立新1 , 2 ,蒋小文1 ,李兰1
(1南京中医药大学药学院 , 江苏 南京　210046;2江苏省药品认证管理中心 ,江苏 南京　210002)
摘要:目的　通过药理实验的方法 , 比较研究大青叶中的有机酸与大青叶清热解毒功效的具体关系。方法　采用注射剂
制备工艺和水煮 、酸化 、乙酸乙酯萃取制备大青叶中总有机酸的样品 , 研究其对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀 , 醋酸致小鼠腹
腔伊文思蓝渗出和酵母致大鼠体温升高的作用。结果　大青叶制剂样品及总有机酸提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均
具有抑制作用;能显著减少小鼠腹腔伊文思蓝渗出量;明显降低干酵母引起的大鼠体温升高。结论　大青叶中总有机酸
可能是大青叶抗炎解热的有效组分之一。
关键词:大青叶;有机酸;抗炎解热
中图号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2008)03-0187-03
　　大青叶为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica
Fort.)的叶 。本品苦寒清热 ,咸以入血 ,能清解血
分热毒实火 ,尤其善于凉血消斑。适用于热入营
血 、气血两燔 、温毒发斑及咽肿口疮等证 ,历来为
清热解毒之要药 。但大青叶中成分复杂 ,究竟哪
类成分是大青叶清热解毒的主要药效成分? 靛玉
红 、靛蓝历来被当作其主要的药效成分[ 1] ,然而许
多学者对此争议 ,这也与许多药理实验的结果相
违背 ,现有的药理实验结果表明靛玉红 、靛蓝没有
抗内毒素的作用 ,没有解热的功效[ 2] 。清气凉营
注射液的薄层色谱图中检不出靛玉红 ,靛蓝类成
分 ,此类成分不宜作为其质量控制的成分 。以水
杨酸为代表的有机酸临床常用于抗炎解热 ,大青
叶中富含有机酸 ,且实验表明大青叶中水杨酸 、苯
甲酸有较强的抗菌作用[ 2] ,提示有机酸类成分可
能是大青叶类药材清热解毒的主要药效成分 。本
实验着重比较研究大青叶中的有机酸与大青叶清
热解毒功效的具体关系。
1　材料
1.1　药品及试剂
大青叶购于安徽太和县高效农业开发研究
所。经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教
授鉴定是十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica 的干
燥叶 ,清气凉营注射剂(苏中制药厂提供)。二甲
苯(成都化学试剂厂生产 ,批号:910320),干酵母
(梅山马利酵母有限公司生产),伊文思蓝(上海化
学试剂采购供应站分装厂 ,批号:970401),分析纯
乙醇 。
1.2　试验动物
昆明种健康小白鼠 ,体质量(20±2)g ,雌雄各
半 ,Wistar健康大鼠 ,体质量 200 ～ 250 g 。由南京
中医药大学实验动物中心提供 。
1.3　实验仪器
岛津 -2401 分光光度计 , PHS-25型 PH 计 ,
R1-25型旋转蒸发仪 ,离心机 ,灭菌锅。
2　方法与结果
2.1　样品的制备
2.1.1　制剂组浸膏制备
按照清气凉营注射剂的制备工艺提取大青叶
中的成分 。取大青叶8 kg ,12倍水 ,1.5 h浸泡后 ,
煎煮 3次 ,每次 1.5 h ,合并滤液 ,浓缩至相对密度
为1.20;放冷 ,加 2倍量的水饱和正丁醇萃取 6
次 ,合并正丁醇萃取液 ,减压回收 ,挥尽正丁醇并
浓缩到相对密度为 1.04(70℃)冷藏 72 h ,滤过 。
收稿日期:2008-01-29;修稿日期:2008-03-02
基金项目:江苏省高校高新技术产业发展项目(JHB04-039);南京中医药大学优秀科技创新团队建设项目(2007)
作者简介:吴启南(1963-),男 ,江苏南通人 ,南京中医药大学教授。 ＊通讯作者:025-51998180
—187—南京中医药大学学报 2008 年 5月第 24 卷第 3期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.24 No.3 May.2008
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2008.03.017
4.5 倍水稀释 ,搅匀 ,过滤 ,挥干滤液得浸膏 A。
适量注射用水溶解 ,滤膜过滤 ,高压灭菌 ,作制剂
组试验样品。
2.1.2　大青叶中有机酸浸膏制备
取8 kg 大青叶 ,12倍水 ,1.5 h浸泡后 ,煎煮 3
次 ,每次 1.5 h ,合并滤液 ,浓缩至小体积 ,用 10%
NaOH调 pH 至 11.5 , 溶液点样于纸片上 , 喷洒
0.1%溴酚兰 70%乙醇溶液 ,蓝色背景上无黄色
斑点 。静置 12 h ,离心 10min(3 000 r/min)。取上
清夜适当浓缩 ,浓缩至相对密度为 1.2 ,用乙酸乙
酯萃取 ,萃至乙酸乙酯层基本无色 。取下层水液 ,
稀HCl调 pH 至 2 ,浓缩至相对密度 1.2时 ,乙酸
乙酯萃取 ,萃取至乙酸乙酯层无有机酸反应即可。
收集乙酸乙酯层 ,回收乙酸乙酯得浸膏 B。适量
注射用水溶解 ,滤膜过滤 ,高压灭菌 ,做有机酸组
试验样品 。
2.1.3　样品制备
取适量纯水分别溶解浸膏 A 、B ,经电位滴定
分析 ,两者有机酸含量为 1∶3 ,用生理盐水将两者
作不同倍数稀释 ,使两者中有机酸含量相等 。分
别作为制剂组样品 、有机酸组样品 ,供实验用 。
2.2　大青叶制剂样品及游离有机酸对二甲苯致
小鼠耳廓肿胀的影响
选用雄性昆明种雄性小鼠 72只 ,体质量为 26
～ 30 g ,随机分成空白模型(NS),制剂高剂量组
(ZG),制剂低剂量组(ZD),有机酸高剂量组(SG),
有机酸低剂量组(SD),清气凉营注射剂共 6 组
(QQLY),分别腹腔给药(模型为 0.9%生理盐水),
30 min后均于每只小鼠左侧耳廓涂 0.05 mL 二甲
苯 ,30 min后将小鼠颈椎脱臼处死 ,用 0.9 cm 打
孔器分别在同一部位打下双耳片 ,精密称质量 ,记
录两耳之差并计算肿胀率及肿胀抑制率[ 3 ,4] , t检
验比较其结果 ,见表 1。
肿胀率(%)=(左耳质量÷右耳质量)×100%
肿胀抑制率(%)=(模型组-给药组)模型组 ×100%
表 1　大青叶制剂样品及游离有机酸对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响( x±s , n=12)
组别 剂量/ mL·kg-1 两耳之差/mg 肿胀率(%) 肿胀抑制率(%)
NS 0.1 21.24±3.17 161.40±28.27 -
ZG 0.15 14.98±3.52 114.06±30.96 29.3＊
ZD 0.1 16.44±5.15 125.637±41.89 22.2
SG 0.15 15.52±2.79 117.03±22.05 27.2＊
SD 0.1 17.25±3.51 127.97±33.95 21.8
QQLY 0.1 15.31±4.10 118.40±35.91 26.6
　　　　　　　　　　注:与模型组比 , ＊P<0.05。
　　由上表可见 ,大青叶制剂样品及游离有机酸
精提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均具有抑制作
用。制剂高剂量组抑制作用最明显 ,其次有机酸
高剂量组 。制剂组相当剂量下 ,稍优于有机酸组。
大青叶制剂样品与有机酸样品对抑制二甲苯所致
小鼠耳廓肿胀相比未见明显差异。
2.3　大青叶制剂样品及游离有机酸对醋酸致小
鼠血管通透性增加的影响
小鼠 72只随机分 6组 ,肌肉注射给药 ,0.5 h
后皮下注射 0.5%醋酸 0.2 mL/只 。30 min后小
鼠尾静脉注射 0.5%伊文思蓝生理盐水溶液 0.1
mL/10 g , 30 min 后小鼠脱臼处死。打开腹腔 ,用
6.0 mL生理盐水反复洗出腹腔内伊文思蓝液 ,合
并洗涤液 ,3 000 r/min离心 15 min ,上清液于分光
光度计上 590 nm处比色测吸光度[ 5] 。结果如表
2。
表 2　大青叶制剂样品及游离有机酸对醋酸致小鼠血
管通透性增加的影响( x±s)
组别 n 剂量/mL·g-1 D(590 nm)
NS 12 0.1 0.424±0.069
ZG 12 0.15 0.328±0.073＊
ZD 12 0.1 0.375±0.066
SG 12 0.15 0.342±0.070
SD 12 0.1 0.385±0.070
QQLY 12 0.1 0.332±0.053
　　　　　　注:与模型组比 , ＊P<0.05。
　　由上表可见 ,大青叶制剂样品及游离有机酸
精提物均能明显减少小鼠腹腔伊文思蓝渗出量。
制剂高剂量组抑制作用最明显 ,其次有机酸高剂
量组 。制剂组相当剂量下 ,稍优于有机酸组。大
青叶制剂样品与有机酸样品对抑制醋酸致小鼠腹
腔伊文思蓝渗出相比未见明显差异 。
2.4　大青叶制剂样品及游离有机酸对酵母致大
鼠体温升高的影响
—188— 南京中医药大学学报 2008年 3 月第 24卷第 3 期
按文献方法 ,选取体温36.6 ～ 38.0℃,且 3次
体温变化不超过 0.3℃的大鼠 ,禁食 12 h ,背部皮
下注射 10%干酵母混悬液 5 mL/kg ,每隔 1 h测肛
温1 次 ,注射后体温上升达高峰 ,选取体温上升
1℃以上大鼠 60只 ,雌雄兼用 ,随机分成 6组 。药
后15 、30 、45 、60 、90 、120 、180 、240 min 以药前同样
方法测体温1次 ,连续 8次[ 6] 。结果见表 3。
表 3-1　大青叶制剂样品及游离有机酸对酵母致大鼠体温升高的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/ mL·kg-1 造模前体温 给药体温差异/ ℃
30 min 45 min 60 min
NS 1 38.6±0.18 -0.08±0.11 0.09±0.01 0.17±0.12
ZG 4 38.6±0.22 0.69±0.15 0.71±0.17 0.77±0.13＊
ZD 2 38.6±0.17 0.53±0.20 0.59±0.21 0.6±0.23
SG 4 38.7±0.20 0.64±0.13 0.65±0.16 0.71±0.20＊
SD 2 38.6±0.22 0.47±0.13 0.52±0.14 0.54±0.15
QQLY 2 38.7±0.25 0.77±0.15 0.85±0.16 0.9±0.18
　　　　　　　　　　注:与模型组相比 , ＊P<0.05。
表 3-2　大青叶制剂样品及游离有机酸对酵母致大鼠体温升高的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/mL·kg-1 给药体温差异/ ℃
90 min 120 min 180 min 240 min
NS 1 0.25±0.14 0.28±0.16 0.32±0.12 0.36±0.12
ZG 4 0.66±0.17 0.59±0.15 0.57±0.17 0.54±0.22＊
ZD 2 0.58±0.22 0.57±0.22 0.53±0.24 0.52±0.22
SG 4 0.64±0.21 0.55±0.22 0.53±0.18 0.50±0.13＊
SD 2 0.52±0.15 0.50±0.19 0.45±0.22 0.48±0.19
QQLY 2 0.85±0.20 0.82±0.16 0.77±0.21 0.67±0.21
　　　　　　　　　　注:与模型组相比 , ＊P<0.05。
　　由上表可见 ,大青叶制剂样品及游离有机酸
精提物能明显降低干酵母引起的大鼠体温升高。
制剂高剂量组抑制作用最明显 ,其次有机酸高剂
量组 。制剂组相当剂量下 ,稍优于有机酸组。大
青叶制剂样品与有机酸样品对抑制酵母致大鼠体
温升高相比未见明显差异 。
3　讨论
实验结果表明 ,大青叶中有机酸及按制剂工
艺提取的制剂组分对二甲苯致小鼠耳廓肿胀皆有
抑制作用;对醋酸致小鼠血管通透性增加作用的
实验表明 ,大青叶中总有机酸及按制剂工艺提取
的制剂组分高剂量组与低剂量组均有减少醋酸致
小鼠腹腔伊文思蓝渗出量的增加;大青叶制剂样
品及游离有机酸精提物能明显降低干酵母引起的
大鼠体温升高。3个实验结果表明制剂工艺提取
物与总有机酸在同剂量下作用效果未见显著性差
异 ,由于事先配制的样品溶液中有机酸浓度相同 ,
说明大青叶中总有机酸可能是大青叶抗炎解热的
有效组分之一 。药材中的活性成分是其产生药理
作用的物质基础。该实验为清气凉营注射剂中原
料药材大青叶的质量标准制定及注射剂指纹图谱
的建立提供了依据。
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(编辑:李伟东)
—189—吴启南 , 等:大青叶中有机酸药理作用研究　第 3期