全 文 ：2011 年 6 月 第 13 卷 第 6 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jun. 2011 Vol. 13 No. 6
［通讯作者］ * 詹雅娴，E-mail:yzhan@ ust. hk
大青叶及其 3 种类似品中靛蓝、靛玉红
含量测定及其指纹图谱初步研究
詹雅娴* ，付强，段然，刘大伟，郑玉忠，朱悦，毕文川，董婷霞，詹华强
(香港科技大学生物系与中药研发中心，香港)
［摘要］ 目的:测定大青叶及其 3 种类似品中靛蓝、靛玉红的含量，并建立指纹图谱以评价药材质量。方
法:采用 HPLC建立含量测定方法和指纹图谱的分析条件，比较国内不同产地的大青叶及其 3 种类似品共 17 批样
品中靛蓝和靛玉红的含量，并计算其 HPLC指纹图谱相似度。结果:总体上，蓼蓝中靛蓝含量高于菘蓝，而靛玉红
含量低于菘蓝，马蓝和路边青均没有检测到靛蓝和靛玉红。另外，17 批样品中，不论是同品种还是不同品种间靛
蓝和靛玉红或指纹图谱都有很大的差异。结论:上述方法可有效区分 4 种称为“大青叶”的商品，并为大青叶药
材的质量评价提供了科学依据。
［关键词］ 大青叶;靛蓝;靛玉红;含量;指纹图谱;HPLC
大青叶始载于 《神农本草经》，是临床上常用
的中药之一，具有清热解毒、凉血消斑的功能。
《中国药典》2010 年版收载的大青叶为十字花科植
物菘蓝 Isatis indigotica Fort. 的干燥叶［1］。蓼大青叶
为蓼科植物蓼蓝 Polygonum tinctorium Ait. 的干燥
叶［1］。爵床科植物马蓝 Baphicacanthus cusia Bremek.
的干燥叶在香港以南大青叶入药，与大青叶功效相
同，福建以马蓝之名入药。马鞭草科植物路边青
Clerodendron cyrtophyllum Turcz. 的叶也作大青叶使
用。由于我国大青叶资源分布广泛，产地的自然环
境差异大，且各地用药习惯不同，大青叶的使用十
分混乱。以前的工作主要集中在: (1)通过性状特
征比较，区分鉴别不同物种［2-3］，但这种方法不能反
映药材内在质量。(2)仅对大青叶中某一物种进行
含量测定，未能全面揭示这些物种中有效成分(靛
蓝和靛玉红)的差异［4］，也未见到有关指纹图谱研
究报道。因此，为了对上述 4 种大青叶药材的内在
质量做出科学的评价，本文用高效液相色谱法测定
并比较大青叶及其 3 种类似品中有效成分靛蓝和靛
玉红的含量，建立 HPLC指纹图谱，计算其相似度。
1 仪器与试药
美国 Waters 600 液相色谱仪(Waters 2996 二极
管阵列检测器，数据处理器 Waters Empower 工作
站) ，SB5200 型超声波清洗机(上海 Branson 公司) ，
R 200D 型电子分析天平(德国 Sartoriius 公司) ，
R210 型旋转蒸发仪 (瑞士 Buchi公司)。
乙 腈 (色 谱 纯， Merck) ，Mill-Q 超 纯 水
(Millipore 公司纯水器) ，甲醇(分析纯，Merck) ，
醋酸乙酯(分析纯，Merck) ，水合氯醛(天津科密欧
化学试剂有限公司) ;靛蓝对照品(中国药品生物制
品检定所，批号:110716-200610，含量测定用) ，
靛玉红对照品(上海中药标准化研究中心，批号:
01-2007)。大青叶药材及其 3 种类似品购自不同产
地，所有样品均经董婷霞博士鉴定，分别为菘蓝
Isatis indigotica Fort.、蓼蓝 Polygonum tinctorium Ait.、
马 蓝 Baphicacanthus cusia Bremek.、 路 边 青
Clerodendron cyrtophyllum Turcz. 的干燥叶。
2 方法与结果
2. 1 靛蓝的测定
2. 1. 1 色谱条件 色谱柱为 Agilent C18 色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;检测波长:604 nm;柱
温:室温;流速:1. 0 mL·min －1;进样量:10 μL;
流动相:甲醇 －水(62∶38)。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 取靛蓝对照品 2. 2 mg，
精密称定，置 50 mL 量瓶中，加含 2 %水合氯醛的
二氯甲烷溶液(取水合氯醛，置硅胶干燥器中放置
24 h，称取 2. 0 g，加二氯甲烷至 100 mL)溶解并定
容至刻度，摇匀，即得(每 1 mL 中含靛蓝 44 μg)。
HPLC图见图 1。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取各样品细粉约0. 1 g，精
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2011.06.014
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图 1 靛蓝对照品(A)和菘蓝 SL004(B)的 HPLC图
密称定，置 25 mL量瓶中，加含 2 %水合氯醛的二
氯甲烷溶液约 25 mL，称定重量，超声处理1. 5 h，
取出，放冷，用 2 %水合氯醛的二氯甲烷溶液补足
减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。HPLC
图见图 1。
2. 1. 4 线性关系试验 精密吸取靛蓝对照品储备液
适量于 2 mL量瓶，加含 2 %水合氯醛的二氯甲烷溶
液稀释至刻度，得到靛蓝浓度依次为 0. 44，1. 76，
4. 40，6. 60，8. 80 mg·L －1对照品溶液，精密吸取以
上各对照品溶液，分别进样 10 μL，注入液相色谱
仪，测定，以峰面积为纵坐标(Y) ，相应浓度为横
坐标(X) ，进行回归分析，得到靛蓝线性回归方程
为 Y = 11. 485X + 6. 507 2，r = 0. 999 3，表明靛蓝在
0. 44 ～ 8. 80 mg·L －1内线性关系良好。
2. 1. 5 精密度试验 精密吸取大青叶供试品溶液(菘
蓝 SL004)10 μL，连续进样 5 次，测得靛蓝保留时
间 RSD =0. 13 %，峰面积的 RSD =1. 07 %，表明精
密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 精密吸取大青叶供试品溶液
(菘蓝 SL004)10 μL，分别在 0，4，8，12，16，
20，24 h 进样，记录靛蓝的峰面积，结果 RSD =
0. 15 %，表明样品溶液在 24 h内稳定。
2. 1. 7 重复性试验 取大青叶样品 (菘蓝 SL004)5
份，精密称定，按 2. 1. 3 项下方法制备供试品溶液，
分别进样，记录峰面积，计算靛蓝的含量，其
RSD =0. 61 %。表明此方法的重复性良好。
2. 1. 8 加样回收率试验 取已知含量的样品粉末(菘
蓝 SL004)5 份，精密称定，加入靛蓝对照品溶液。
按 2. 1. 3 项下方法制备供试液，依法测定含量，计
算回收率，结果靛蓝的平均回收率为 101. 20 %(n =
5) ，RSD =1. 37 %。
2. 2 靛玉红的测定
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱为 Prevail C18 色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;检测波长:291 nm;柱
温:室温;流速:1. 0 mL·min －1;进样量:20 μL;
流动相:乙腈 －水(60∶40)。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取靛玉红对照品
适量，加甲醇制成每 1 mL 含 30 μg 的溶液，即得。
HPLC图见图 2。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 取大青叶样品细粉约
0. 25 g，精密称定，置 50 mL 离心管中，加 20 mL
甲醇，超声处理 30 min，滤过，滤渣重复上述步骤
超声 1 次，滤过，混合滤液，置于 50 mL 量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀，即得。HPLC图见图 2。
图 2 靛玉红对照品(A)和菘蓝 SL004(B)的 HPLC图
2. 2. 4 线性关系试验 精密吸取靛玉红对照品储备
液适量于 2 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得到
靛玉红浓度依次为 0. 1，1. 0，1. 5，3. 0，4. 0，
5. 0 mg·L － 1对照品溶液，分别进样 20 μL，注入液
相色谱仪，测定，以峰面积为纵坐标(Y) ，相应浓
度为横坐标(X) ，进行回归分析，得到靛玉红曲线
回归方程为 Y = 116 501X － 3 297. 2，r = 0. 999 9，表
明靛玉红在 0. 1 ～ 5. 0 mg·L －1内线性关系良好。
2. 2. 5 精密度试验 精密吸取大青叶供试品溶液(菘
蓝 SL004)20 μL，连续进样 5 次，测得靛玉红保留
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时间 RSD =0. 18 %，峰面积的 RSD =0. 22 %，表明
精密度良好。
2. 2. 6 稳定性试验 精密吸取大青叶供试品溶液(菘
蓝 SL004)20 μL，分别在 0，4，8，12，16，20，
24 h 进样，记录靛玉红的峰面积，结果 RSD =
1. 04 %，表明样品溶液在 24 h内稳定。
2. 2. 7 重复性试验 取大青叶样品(菘蓝 SL004)5
份，精密称定，按 2. 2. 3 项下方法制备供试品溶液，
分別进样，记录峰面积，计算靛玉红的含量，其
RSD =0. 21 %，表明此方法的重复性良好。
2. 2. 8 加样回收率试验 取已知含量的样品粉末(菘
蓝 SL004)5 份，精密称定，加入靛玉红对照品溶
液。按 2. 2. 3 项下方法制备供试品溶液，依法测定
含量，计算回收率，结果靛玉红的平均回收率为
100. 20 %(n = 5) ，RSD =2. 19 %。
2. 3 含量测定
分别取来自不同种属的样品粉末，按供试品溶
液制备项下方法制备样品溶液，在上述色谱条件下
分别测定靛蓝和靛玉红的峰面积，根据其线性回归
方程，计算二者的含量，结果见表 1。
表 1 不同种属的大青叶样品中靛蓝和靛玉红的含量
编号 样品 产地
含量 /mg·g － 1
靛蓝 靛玉红
1 菘蓝 SL001 广东广州 0. 340 0. 273
2 菘蓝 SL002 广东肇庆 0. 054 0. 169
3 菘蓝 SL003 安徽毫州 0. 975 0. 068
4 菘蓝 SL004 辽宁沈阳 0. 652 0. 377
5 菘蓝 SL005 河南禹州 0. 094 0. 108
6 菘蓝 SL006 河北保定 0. 097 0. 026
7 菘蓝 SL007 辽宁沈阳 1. 202 0. 693
8 菘蓝 SL008 河北安国 0. 618 0. 097
9 菘蓝 SL009 河北沧州 0. 570 0. 353
10 菘蓝 SL010 河北石家庄 0. 269 0. 029
11 蓼蓝 LL001 河南禹州 0. 511 0. 105
12 蓼蓝 LL002 河北保定 5. 745 0. 111
13 蓼蓝 LL003 河北石家庄 3. 416 0. 041
14 蓼蓝 LL004 山西万荣 6. 093 0. 049
15 马蓝 ML001 香港 - -
16 马蓝 ML002 广东广州 - -
17 路边青 LBQ001 香港 - -
注:n = 3
2. 4 大青叶指纹图谱测定
2. 4. 1 色谱条件 色谱柱: Prevail C18 色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;检测波长:225 nm;柱
温:室温;流速:1. 0mL·min －1;进样量:20 μL;
流动相:乙腈 －水，按表 2 程序梯度洗脱。
表 2 流动相梯度洗脱程序
t /min 乙腈 /% 水 /%
0 20 80
10 22 78
20 55 45
45 57 43
60 60 40
2. 4. 2 供试品溶液的制备 取大青叶样品细粉约
0. 6 g，精密称定，置 50 mL离心管中，加 40 mL醋
酸乙酯，混合均匀并超声处理 60 min，滤过，滤液
蒸干，残渣用甲醇溶解，并移至 25 mL 量瓶中，加
甲醇至刻度，摇匀，即得。
2. 4. 3 精密度试验 精密吸取大青叶供试品溶液(菘
蓝 SL004)20 μL，连续进样 5 次，比较各色谱峰的
保留时间和峰面积。结果表明 5 次进样的特征共有
峰保留时间和峰面积的 RSD 值分别在0. 03 % ～
0. 45 %和 0. 13 % ～0. 27 %，表明精密度良好。
2. 4. 4 稳定性试验 精密吸取大青叶供试品溶液(菘
蓝 SL004)20 μL，分别在 0，4，8，12，16，20，
24 h进样，记录色谱图比较各特征共有峰保留时间
和峰面积的 RSD 值分别在 0. 02 % ～ 1. 05 % 和
0. 13 % ～1. 27 %，表明样品溶液在 24 h内稳定。
2. 5 样品的指纹图谱测定
分别取来自不同种属的大青叶样品粉末，按供
试品溶液制备项下方法制备样品溶液，在上述色谱
条件下分别考察其指纹图谱，发现药材所有成分能
在 60 min内被洗脱出来，对照品和 17 批样品的色
谱图见图 3。
2. 6 参照图谱生成及相似度计算
本实验采用中国药典委员会推荐的中药色谱指
纹图谱相似度评价系统 2004A版对 10 批菘蓝样品的
指纹图谱进行了相似度分析，见表 3。
表 3 10 批大青叶样品与参照图谱的相似度
编号 样品 相似度
菘蓝对照指纹图谱 1. 000
1 菘蓝 SL001 0. 872
2 菘蓝 SL002 0. 855
3 菘蓝 SL003 0. 594
4 菘蓝 SL004 0. 864
5 菘蓝 SL005 0. 784
6 菘蓝 SL006 0. 680
7 菘蓝 SL007 0. 868
8 菘蓝 SL008 0. 694
9 菘蓝 SL009 0. 693
10 菘蓝 SL010 0. 661
注:n = 3
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书2011 年 6 月 第 13 卷 第 6 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jun. 2011 Vol. 13 No. 6
A. 对照品 B. 菘蓝 C. 蓼蓝 D. 马蓝 E. 路边青
图 3 大青叶及其 3 种类似品的 HPLC指纹图谱
3 讨论
在实验过程中，我们发现靛蓝在溶剂中溶解度
较差，通过考察二氯甲烷、甲醇、乙腈和三氯甲烷
等几种溶剂的提取效果，我们选用 2 %水合氯醛的
二氯甲烷作为靛蓝的提取溶剂，能将靛蓝完全提取，
得到满意效果。
从靛蓝、靛玉红的含量测定结果可以看出，菘
蓝和蓼蓝样品中的靛蓝、靛玉红差异很大，其中马
蓝和路边青均没有检测到靛蓝、靛玉红;同一物种
不同产地的大青叶样品之间靛蓝、靛玉红的含量存
在很大差别。马蓝的干燥叶在香港以 “南大青叶”
广泛应用，但所含成分与《中国药典》所列大青叶
和蓼大青叶明显不同，所以应用时，小心区别。
从不同物种的大青叶样品的指纹图谱来看，其成
分差异较大，菘蓝在 225 nm 波长下有 14 个共有峰
(图 3 B:其中峰 8为靛蓝，峰 12为靛玉红) ，蓼蓝有
12个共有峰(图 3 C:其中峰 6 为靛蓝，峰 8 为靛玉
红)，马蓝有 7个共有峰，路边青无明显分离良好的色
谱峰。用指纹图谱可以快速区分不同品种的大青叶。
从菘蓝大青叶指纹图谱相似度的结果可以看出，
不同产地的菘蓝样品的相似度不高。这说明通过相
似度比较可以发现不同产地药材之间的差异。中药
品质的优劣，主要取决于有效物质群的组成和有效
成分的含量，而有效物质群的组成和含量除了受药
用品种(内部因素)的影响外，还可能与产地、生
长环境、采收时期等因素有密切关系，因而生产应
用时，应根据当地实际情况综合考虑。这些因素对
药材的影响正在进一步研究。
本文采用 HPLC 测定了大青叶及其 3 种类似品
中靛蓝和靛玉红的含量，同时建立了大青叶指纹图
谱并进行了分析。结果表明该法不仅体现了大青叶
及其 3 种类似品在化学成分上的差异，为大青叶的
鉴别提供了依据，也为大青叶及含大青叶制剂的质
量控制奠定了基础。
参考文献
［1］国家药典委员会 . 中国药典［S］. 一部 . 北京:中国医药
科技出版社，2010:20，341.
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实践杂志，2000，18(5) :309-310.
［3］滕杰，李庆 . 四种大青叶的鉴别要点［J］. 时珍国医国
药，2006，17(4) :612.
［4］唐晓清，王康才，解芳 . 菘蓝叶片不同部位靛蓝、靛玉红
分布规律研究［J］. 江西农业学报，2008，20(6) :74-76.
(收稿日期 2011-01-25)
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消彼长的现象，结合药理研究，可以发现各品种的
功效偏重，甚至新用途，譬如有的抗早孕、镇吐效
果较好，有的抗肿瘤、降血脂活性较强，有的抗炎
作用较佳，有的毒性较低，有的专入药用，有的还
适于营养保健等等。在尊重药用植物自然生长规律
的前提下，进行有目的的选育培养，提供规格等级
分明、多样的商品药材或者制剂原料，以满足临床
上多方面的需求。
参考文献
［1］湖北省农业厅 . 湖北省农业厅关于发布审定恩施农作物
新品种的通知［S］. 附件 1、2:鄂半夏一号(鄂审药
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材，2010，33(10) :1647-1649.
［3］国家药典委员会 . 中国药典［S］. 一部 . 北京:中国医药
科技出版社，2010:110-112.
［4］李斌，程秀民，周永妍，等 . 半夏的研究进展［J］. 中国民
族民间医药，2010，(1) :47-48.
［5］张跃进，孟祥海，许玲，等 . 不同炮制方法对半夏化学成
分含量的影响研究［J］. 中国实验方剂学杂志，2008，14
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［6］薛建海，肖统海，王晓华，等 . 半夏炮制品中已知化学成
分比较［J］. 中国中药杂志，1991，16(4) :220.
［7］魏其才 . 白矾对半夏浸出性成分的影响［J］. 中成药，
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［8］王潮奎，慕文静 . 半夏炮制的实验探讨［J］. 河南中医药
学刊，2001，16(4) :12.
(收稿日期 2010-12-13)
Comparison the Composition of Different Cultivation Product of Pinellia Ternata(Thunb. )Breit
YANG Hong-bing1，SHI Lei1，LIN Xian-ming2，Yao Yong-xiu1，Yang Hua2，Guo Jie2，Liu Hai-hua2
(1. School of Pharmacy，Hubei university of Chinese medicine，Wuhan 430061，China;
2. Institute of Chinese Materia Medica，Hubei Province Agriculture Academy of Science，Enshi 445000，China)
［Abstract］ Objective:To compare the composition of different cultivation product of Pinellia ternata
(Thunb. )Breit. Methods:Using multiple indicators for comparison. Results:The protein content，the amino acid
content and the water-soluble extract in some cultivation products were higher while the alkaloid content，total acid
content and alcohol-soluble extract in other cultivation products were higher. Conclusion:The compositions of
different cultivation products of Pinellia ternata(Thunb. )Breit. are diffence.
［Key words］ Pinellia ternata(Thunb. )Breit. ;
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
Composition
(上接第 23 页)
Study on Determination of Indigo and Indirubin Contents and HPLC
Fingerprints of Isatidis Folium from Various Sources
ZHAN Ya-xian，FU Qiang，Duan Ran，David Tai Wai Lau，ZHENG Yu-zhong，
ZHU Yue，BI Wen-chuan，DONG Ting-xia，Karl Wah-keung TSIM
(Center for Chinese Medicine R ＆ D，Hong Kong University of Science and Technology，Hong Kong)
［Abstract］ Objective:To determine the contents of indigo and indirubin and establish fingerprints of Isatidis
Folium from various sources in order to control their qualities. Methods:We selected 17 batches of Isatidis Folium
from various sources. The contents of indigo and indirubin were determined and the fingerprints were established by
high performance liquid chromatography (HPLC)method. The fingerprints were compared using similarity evaluation
software published by the Committee of China Codex. Results:The indigo content in Polygonum Folium was higher
than that in Isatis Folium while its indirubin content was lower than that in Folium Isatis. Indigo and indirubin were
not detected in the leaves of Baphicacanthus cusia and Clerodendron cyrtophyllum. The contents of indigo and
indirubin in Isatidis Folium from different sources are varying largely. Conclusion:The above methods have desirable
precision，reproducibility，stability，providing an experimental basis for quality control of Folium Isatidis.
［Key words］ Folium Isatidis;Indigo;Indirubin;Content;Fingerprint;HPLC
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