全 文 ：龙牙木忽木中多糖含量的测定
刘　娟1 ,徐　倩1 ,姜　博 2
( 1.佳木斯大学化学与药学院 ,黑龙江 佳木斯 154007; 2.佳木斯市中心医院 ,黑龙江佳木斯 154002)
摘要: 目的:分别从龙牙木忽木茎皮及心材、芽、叶中提取龙牙木忽木多糖并测定其含量。 方法: 采用水提醇沉法提取龙牙木忽木
多糖 ,用改良的硫酸—苯酚法测定其含量。 结果: 测定龙牙木忽木多糖在四个不同部位的含量分别为: 茎皮: 20. 39% ,茎心材:
11. 17% ,芽: 20. 21% ,叶: 13. 29%。 结论:改进的硫酸—苯酚法操作简单、准确度高、灵敏度好。
关键词: 龙牙木忽木 ;多糖 ;硫酸—苯酚法 ;含量测定
中图分类号: R927. 2　文献标识码 : A　文章编号: 1008- 0104( 2009) 04- 0027- 02
　　龙牙木忽木 ( Ar alia ela ta Seem. A. mandsh urica Max )为五
加科木忽木属植物 ,别名辽东木忽木、刺老鸦 ,产于我国东北、朝
鲜、苏联、日本等地。据《本草纲目》记载有除风疾、治水瘤、补
腰肾、壮筋骨等作用 [1]。味辛、平 , 有小毒。具补气安神 ,强精
滋肾 ,去风除湿 ,活血止痛 ,健胃利水之功。主治神经衰弱 ,风
湿性关节炎 ,糖尿病 ,胃痉挛 ,便秘 ,外伤出血 ,肝炎等。 长期
以来对辽东木忽木的皂苷类化合物、黄酮类化合物、挥发油类
化合物和氨基酸等研究较多 [2～ 4 ] ,对龙牙木忽木多糖 ( A ralia
ela ta Polysaccha rides, AEPS)的研究较少见报。 本文用水提
醇沉法从龙牙木忽木地上的四个部位中提取了龙牙木忽木多糖 ,
并采用改进的硫酸—苯酚法测定了其四个部位的多糖含量 ,
旨在为其开发和利用提供科学基础依据。
1　 仪器、材料与试剂
1. 1　仪器
分析天平 ( FA2004N ,上海恒平科学仪器有限公司 ) ; 757
型紫外 -可见分光光度计 (上海精密科学有限公司 ) ;台式冷
冻高速离心机 TGLL- 18K (江苏太仓华美生化仪器公司 )。
1. 2　材料
龙牙木忽木采自黑龙江省萝北县地区 ,经本校生药学教研
室刘娟教授鉴定为五加科木忽木属植物龙牙木忽木。
1. 3　试剂
葡萄糖对照品 ;氯仿 ;正丁醇 ;苯酚 ;乙醇均为分析纯。
2　 实验方法 [5～ 6 ]
2. 1　 龙牙木忽木多糖的提取与精制
将龙牙木忽木茎皮及心材 ,芽 ,叶 ,阴干后 ,粉碎 ,过 60目
筛。 精密称取 30. 011g , 30. 001g , 30. 015g , 30. 012g分别用
300m L蒸馏水于 100℃水浴提取 3次 ,每次 2h ,过滤 ,将三次
滤液合并 ,减压浓缩至 50m L,离心取上清液 ,用 Sevag法脱蛋
白 ,反复萃取 10～ 15次 , 30min /次。 将脱蛋白后的上层液置
于透析袋中 ,先用自来水透析 10h ,再用蒸馏水透析 10h ,向透
析后的溶液中加入石油醚萃取 1h ,过滤 ,加入 150m L的 95%
乙醇沉淀 2次 ,低温静置过夜 ,去上清液 ,抽滤 ,固形物分别用
无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤 ,干燥 ,得精致的龙牙木忽木多糖
( AEPS)。
2. 2　 溶液的配制
2. 2. 1　 5%苯酚溶液的配制
精密称取苯酚 50g ,加铝片 0. 1g (铝片预先用酸处理 ) ,碳
酸氢钠 0. 05g ,用加热套加热蒸溜 ,收集 182℃馏分 ,冷却 ,称
取 5. 0g稀释至 100m L,摇匀后 ,装入棕色试剂瓶中 (避光保
存 )备用。
2. 2. 2　 标准液的配制
精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 10mg于 100mL容
量瓶中稀释至刻度 ,摇匀得标准液。
2. 2. 3　 龙牙木忽木贮备液的配制
精密称取干燥至恒重的精致龙牙木忽木多糖 ,其四个部位
的多糖分别称取 9. 800mg ,置于 100m L容量瓶中 ,加水溶解
并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成样品溶液备用。
2. 2. 4　 样品溶液的制备
精密称取各样品粉末 50mg,按照“ 2. 1”项下的提取方案
进行提取精制 ,将多糖粉末用蒸馏水溶解 , 50m L容量瓶定
容 ,制得各样品溶液。
2. 3　 吸收光谱的绘制
取对照品溶液和供试品溶液 ,分别经苯酚—硫酸试剂显
色后 ,作全波长扫描测定。结果葡萄糖和样品经显色后 ,均在
490nm波长处有最大吸收峰。
2. 4　 标准曲线的制备
精密量取标准贮备液 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10m L分别置于
10m L容量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀。取稀释液 1. 0m L于10m L
具塞试管中 ,加入苯酚 1. 0m L摇匀 ,迅速加入浓硫酸 5mL ,震
荡混匀。 置于沸水浴中加热 30min,取出 ,冷却至室温。 另取
1. 0m L水同法配成空白参比液 ,在 490nm处测定吸光度 A,以
吸光度 A为纵坐标 ,葡萄糖浓度 C为横坐标作图 ,得校正曲
线 ,计算回归方程。
3　 实验结果
3. 1　 葡萄糖标准曲线
回归方程为 Y = 0. 0025X + 0. 0271(R = 0. 9993)表明
10～ 100mg /L范围内吸光度与葡萄糖含量呈良好线性关系 ,
如图 1。
图 1　 标准曲线
3. 2　 换算因子的测定
精密移取多糖贮备液 2. 00m L,按照“ 2. 4”项的方法测定
吸光度 ,根据回归方程计算多糖溶液中葡萄糖的浓度 ,按下
式计算出换算因子 f。
换算因子 f= W /C· D
式中: W为多糖的重量 ( mg ) , C为多糖溶液中葡萄糖的
浓度 (μg /m L) , D为葡萄糖的稀释倍数。
由此求出龙牙木忽木多糖与葡萄糖的换算因子 ,茎皮 ,茎
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心材 ,芽 ,叶的换算因子分别为: f1= 1. 64, f2= 0. 59, f3=
1. 18, f4= 0. 80。
3. 3　 稳定性试验
分别取四种供试液按“ 2. 4”项方法每隔 30min测定一次
吸光度 ,连续 3h 考察其稳定性 ,结果 RSD分别为 , RSD1=
0. 36% , RSD2= 0. 46% , RSD3= 0. 27% , RSD4= 0. 46% ,表明
供试液在 3h内稳定性均良好。
3. 4　 精密度试验
分别取龙牙木忽木 4种粉末 ,按照“ 2. 2. 4”项方法分别同时
制取 5份样品溶液各 2. 00mL ,按照“ 2. 4”项方法测定吸光度 ,
以吸光度计算 , RSD为 RSD1= 0. 61% , RSD2= 0. 69% , RSD3
= 0. 69% , RSD4= 0. 41% ,表明仪器精密度良好。
3. 5　 样品中多糖含量测定
精密移取各样品溶液 2. 00m L,按照“ 2. 3”项方法测定吸
光度 ,根据回归方程和多糖含量计算公式:
多糖含量 (% )= CDf /W× 100,
式中: W为多糖质量 ( mg ) , C为样品溶液中葡萄糖浓度
(μg /mL ) , D为葡萄糖的稀释倍数 , f为换算因子。结果见表
1。
表 1　龙牙木忽木四个不同部位多糖含量比较
部位 平均多糖含量 (% ) RSD% 产率 (% )
茎皮 20. 39 0. 33 1. 16
心材 11. 17 0. 35 1. 57
芽 20. 21 0. 32 2. 30
叶 13. 29 0. 41 3. 17
3. 6　 加样回收试验
精密吸取同批 5份已知含量的龙牙木忽木粉末 (过 60目
塞 )各 1g ,按“ 2. 2. 4”项下的方法同时制取样品溶液。 精密吸
取各样品溶液 1m L,分别至于 10m L具塞刻度试管中 ,分别测
其吸光度 ,并根据葡萄糖的检出量 ,计算其回收率。茎皮的平
均回收率为 95. 67% ,茎心材的平均回收率为 96. 54% ,芽的
平均回收率为 95. 33% ,叶的平均回收率为 95. 77%。
表 2　 加样回收试验结果
部位 平均取样量 ( g ) 平均原含量 ( mg) 平均加样量 ( mg) 平均测得量 ( mg ) 平均回收率 (% ) RSD%
茎皮 1. 0025 20. 39 5. 02 25. 19 95. 67 0. 89
茎心材 1. 0031 11. 17 5. 21 16. 20 96. 54 1. 48
芽 1. 0023 20. 21 5. 12 25. 09 95. 33 1. 12
叶 1. 0029 13. 29 5. 22 18. 29 95. 77 1. 34
4　 讨论
硫酸—苯酚比色法测定龙牙木忽木多糖的原理是龙牙木忽
木多糖在浓硫酸的作用下 ,先水解为单糖 ,并迅速脱水成糠
醛衍生物 ,该衍生物在强酸条件下与苯酚起反应 ,生成橙黄
色物质 ,在波长 490nm处和一定浓度范围内 ,其吸光度 A值
与糖浓度 C成线性关系 ,从而可用比色法测定其含量。 在试
验过程中 ,发现影响显色的最重要因素是水浴温度和水浴放
置时间 ,保证沸水浴 30min后立即用冷水冷却至室温 ,能得
到重现性较好的测定结果。 在多糖含量测定中 ,得到相应多
糖对照品较困难 ,因多糖组成比较复杂 ,往往采用单糖如葡
萄糖代替对照品 ,测定样品中多糖的相对含量。 用精致多糖
计算葡萄糖与龙牙木忽木多糖的换算因子 ,这样可避免用葡萄
糖做标准引起的系统误差 ,结果比较准确真实。 实验结果表
明 ,龙牙木忽木的茎皮和芽中多糖含量较高 ,叶在提取过程中
产率较其它 3个部位高。采用改进的硫酸—苯酚法测定龙芽
木忽木多糖 ,吸光度稳定 ,方法简便、快捷并得到了较好的测定
结果。
参考文献:
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[ 2 ] YoshikamaM , Matsud a H, Harada E. Chemter [ J ] . Ph arm Bul l,
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[3 ]Song S J, Nakamura N, Ma CM. Ch em. Pharm. B ull [ J ]. 2000,
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2003, 24( 11): 118- 120
(收稿日期: 2009- 02- 28)
作者简介: 刘娟 ( 1949～ )女 ,黑龙江佳木斯人 ,硕士研究生导师。
Determination of polysaccharide content in Aralia elata Seem
L IU Juan
1 ,XU Qian
1 , J IANG Bo
2
( 1. Th e College of Chemist ry & Pharmacy of Jiamusi Univ ersi ty, Jiam usi 154007, Ch ina; 2. Cen t ral Hospi tal, Jiamusi 154002, China)
Abstract: Objective: To ex t ract po lysaccharides f rom the skin and xylem o f the stems and buds and
leaves of Aralia ela ta Seem and determine their content. Methods: The poly saccha ride w as obtained by the
method of w ater ex t raction and alcoho l precipitation, and the polysaccharide content wa s measured by the
improved pheno l- sulphuric acid method. Results: The polysaccharide content in the stem skin o f Aralia
elata Seem was 20. 39% ,and in the stem xylem o f Aralia elata Seem was 11. 17% , and in the buds of Aralia
elata Seem was 20. 21% , and in the leave of Aralia elata Seem was 13. 29% . Conclusion: The improved
phno l- sulphuric acid method is simple, accurate and sensitiv e.
Key words: Aralia elata Seem; po lysaccharide; phenol- sulphuric acid; determina tion
·28·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　黑龙江医药科学　 2009年 8月第 32卷第 4期