全 文 ：苯甲酰新乌头原碱可以考察新乌头碱、乌头碱和次
乌头碱在人体内的减毒情况,同样考察新乌头碱、乌
头碱和次乌头碱可以评估乌头类生物碱制剂在人体
内的药效,为开发乌头类生物碱制剂的PK-PD(药
代动力学-药效学)提供参考。
乌头类生物碱(除苯甲酰新乌头原碱)均为双酯
型生物碱,分子结构中含有酯基,易溶于有机溶剂,
加入氨水碱化,使得各生物碱以游离分子形式存在,
从而提高生物碱从血浆提取的效率。乌头类生物碱
均为含氮化合物,流动相纳入醋酸铵,可以显著改善
色谱峰的峰形。
另外,血液的成分较复杂,含多种内源性物质,
容易干扰药物检测,为降低杂质的干扰,本课题考察
了乙醚、乙腈、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷等提取溶
剂(沉淀蛋白剂),采用氯仿提取时,处理有难度,经
过对比,乙腈沉蛋白除杂质效率最高,同浓度的4种
乌头类生物碱的 HPLC图谱面积最高,回收率较
好,对照品溶液处于低浓度时也可达到检测要求,因
此采用乙腈沉蛋白。采用乙腈沉蛋白后经高速离心
后直接吸取上清液,经微孔滤膜即可检测,不需要衍
生化来提高灵敏度,使用溶剂少,降低成本,该方法
灵敏、快速、准确和可靠。
综上所述,本课题采用 HPLC测定人血浆中4
种乌头类生物碱,新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯
甲酰新乌头原碱HPLC方法,该方法简单、快速、灵
敏和准确,可以作为4种乌头碱的药物动力学研究。
参 考 文 献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北
京:中国医药科技出版社,2010:177-178.
[2]HanQB,TangWL,DongCX,etal.Aninterestingtwo-
phasesolventsystemanditsuseinpreparativeisolation
ofaconitinesfromaconiterootsbycounter-currentchro-
matography[J].JSepSci.2013,36(7):1304-1310.
[2]沈红,朱玲英,姚楠.甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头
碱、次乌头碱大鼠药动学的影响[J].中药材,2011,34
(6):937-941.
[3]李耿,张敏敏,赵亚.HPLC法同时测定乌头属不同药
材4种生物碱的含量[J].中药材,2012,35(6):927-729.
[4]ZhangP,ZhangF,WangZ,etal.Simultaneousdetermi-
nationoffourtraceaconitumalkaloidsinurineusingul-
traperformanceliquidchromatography-massspectrom-
etry[J].SePu.2013,31(3):211-217.
[5]NgSW,ChingCK,ChanAY,etal.Simultaneousdetec-
tionof22toxicplantalkaloids(aconitumalkaloids,so-
lanaceoustropanealkaloids,sophoraalkaloids,strychnos
alkaloidsandcolchicine)inhumanurineandherbalsam-
plesusingliquidchromatography-tandem massspec-
trometry[J].JChromatogrBAnalytTechnolBiomed
LifeSci.2013,942-943(12):63-69?.
[6]刘瑶,焦豪妍.川乌毒理与药理现代研究进展[J].云南
中医中药杂志,2010,31(3):66-67.
收稿日期:2014-02-25
基金项目:国家自然科学基金面上项目(81373806);2012年省卫生厅中医药科研立项课题(GZK-2-12-43);兰州大学中央高校基本科研业
务费专项资金资助(lzujbky-2013-172)
作者简介:杨光(1987-),男,硕士研究生,从事中西医结合抗肿瘤研究。Tel:18298376407,E-mail:sunshinenely@163.com。
*通讯作者:程卫东,Tel:0931-8915184,E-mail:chengweidong888@sina.com。
·药理·
益气养血复方中用红芪替换黄芪的含药血清对老龄鼠
脾淋巴细胞增殖和抗氧化衰老作用的比较研究
杨 光1,程卫东1,2*,张李峰3,邢文婷1,周燚炎1,孙晓芬1
(1.兰州大学中西医结合研究所,甘肃 兰州730000;2.南方医科大学中医药学院,广东 广州510515;3.
兰州大学免疫学研究所,甘肃 兰州730000)
摘要 目的:比较红芪替换益气养血复方中黄芪后,含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞增殖和抗氧化衰老作用
的影响。方法:相同剂量红芪替换益气养血复方中的黄芪,用 MTT法确定含药血清最佳浓度和时间及对ConA诱
导的老龄鼠脾淋巴细胞增殖的影响;用含药血清与老龄鼠脾淋巴细胞共培养,测定细胞内T-SOD的活性,MDA、
ROS的含量及培养上清中IL-2的含量。结果:含药血清浓度40%培养72h益气养血含药血清对老龄鼠脾淋巴细
胞增殖的刺激效果最佳,两种药物均可降低细胞内ROS水平,提高IL-2含量,且益红优于益黄。两种药物均能提
高在ConA诱导下淋巴细胞的增殖能力,增强老龄鼠脾淋巴细胞内T-SOD活性,降低 MDA水平,但两者之间无差
异。结论:含黄芪的益气养血复方与含红芪的益气养血复方均能起到一定的体外抗细胞衰老作用,并且两者具有
·0141· JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
网络出版时间：2014-07-31 11:16
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1286.R.20140731.1116.026.html
相似作用。
关键词 红芪;黄芪;益气养血复方;老龄鼠脾淋巴细胞;抗氧化衰老;细胞增殖
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-
ComparativeStudyofInterchangeofHedyseriRadixandAstragaliRadixinYiqiyangxue
PrescriptiononSpleenLymphocyteProliferationandAnti-agingEffectofAgedMice
YANGGuang1,CHENGWei-dong1,2,ZHANGLi-feng3,XINGWen-ting1,ZHONGYi-yan1,SUNXiao-fen1
(1.InstituteofIntegratedChineseandWesternMedicine,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China;2.InstituteofTradi-
tionalChineseMedicine,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China;3.ImmunologicInstitute,SchoolofBasic
MedicalScience,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China)
Abstract Objective:BysubstitutingAstragaliRadixforHedyseriRadixinYiqiyangxueprescription,comparetheeffects
ofbothserumcontainingonspleenlymphocyteproliferationandanti-agingeffectofagedmice.Method:Afterusingthesame
doseofAstragaliRadixtoreplaceHedyseriRadixinYiqiyangxueprescriptionandMTTmethod,wedeterminedthebestcon-
centrationofmedicineserum,thebestincubationtimeandtheeffectsofConA-inducedspleenlymphocyteproliferation.Usere-
agentkitstodetecttheactivityofSOD,MDAlevel,ROSinagedmicespleenlymphocytesandIL-2levelinculturesupernatant
fluidofspleenlymphocytes.Results:Bothmedicineserumscanenhancetheproliferationofagedmicespleenlymphocytes.The
bestconcentrationofmedicineserumwas20%andtheincubationtimewas72h.TheHedyseriRadixserumactedmoreeffec-
tivethantheAstragaliRadixserumontheenhancementofproliferation.Bothmedicineserumsshowedsimilareffectsonin-
creasingT-SOD,IL-2anddecreasingMDA,ROSlevel.Moreover,serumofHedyseriRadixwassuperiorintheenhancementof
proliferation,IL-2andthereductionofROSlevel.Conclusion:BothmedicineserumofHedyseriRadixandAstragaliRadixgen-
eratedthesameeffectofanti-agingandenhancementofproliferation.
Keywords AstragaliRadix;HedyseriRadix;Yiqiyangxueprescription;Agedmicespleenlymphocyte;Proliferationactivity
衰老是一个复杂的过程,气血失衡是中医导致
老年期生理病理变化的基础。研究证实,益气养血
复方中的黄芪可调节免疫功能,有延缓衰老的作
用〔1〕。红芪(RadixHedysari)系多序岩黄芪(Astra-
galiRadix)的干燥根,与黄芪同科不同属。二者作
为传统中药,在中医临床上都有补气固表,利尿托
毒,排脓,饮疮生肌等功效〔2〕,在我国西北地区多以
红芪代替黄芪应用〔3〕。桂曼曼等人发现含红芪和黄
芪的益气养血和补中益气复方均能使免疫抑制小鼠
免疫功能恢复至正常水平,且红芪黄芪在刺激T淋
巴细胞增殖方面无差异〔4〕。实际上红芪与黄芪不仅
在外观、成分上有区别〔5,6〕,而且在某些免疫调节方
面也存在差异。研究发现,红芪体外清除自由基作
用稍强于黄芪〔7〕,Qing-HuaSong等发现红芪在促
进B淋巴细胞活化增强体液免疫方面优于黄芪〔8〕。
但有关红芪和黄芪在抗衰老及氧化损伤方面却少有
研究。本实验通过用红芪替换益气养血复方中的黄
芪,对比二者在复方中抗衰老及氧化损伤的作用,为
深入研究复方中红芪替代黄芪的可行性提供依据。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 清洁级昆明种小鼠120只,雌雄各
半,体质量18~22g,清洁级昆明种老龄鼠40只,18
月龄,雌雄各半,分别购于兰州大学医学动物实验中
心。许可证号:SCXK(甘)2009-0004。
1.2 药物与试剂 红芪、黄芪、党参、人参、当归、白
术、地黄、制何首乌、五味子、陈皮、地骨皮、鹿茸、淫
羊藿购于兰州市药材市场,经兰州大学基础医学院
中西医结合研究所程卫东教授鉴定为正品。含黄芪
益气养血复方参照2010年版《中华人民共和国药
典》〔2〕,含红芪益气养血复方用相同剂量红芪替换原
复方中黄芪而得。将各组药材分别加入适量水浸泡
0.5h,煎煮2次,第1次1.5h,第2次1h,合并2次
滤液,将所得滤液浓缩至含生药1g/mL。按照体
表面积换算小鼠灌胃剂量为生药6g/(kg·d),滤
液放置于4℃冰箱冷藏备用;EZ-SepTMMOUSE1
×小鼠淋巴细胞分离液、红细胞裂解液和IL-2酶联
检测试剂盒购于深圳达科为生物技术有限公司;
MTT和刀豆蛋白A购自美国sigma公司;SDS(天
津化学试剂一厂);RPMI-1640培养液(赛默飞世尔
生物化学制品有限公司);胎牛血清(杭州四季青公
司);Braford蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术
研究所);细胞内活性氧、超氧化物歧化酶、丙二醛试
剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3主要仪器 CO2细胞培养箱(SANYO 公司);
BIO-RAD680iMark型酶标仪;超声细胞粉碎机
(型号:JY92-ⅡD宁波新芝公司);流式细胞仪(美国
·1141·JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
BECKMANCOULTER公司,型号:EpicsXL);超
纯水机(艾科浦,型号AF2-0502-U)。
2 方法
2.1 制备含药血清 将120只昆明种小鼠随机分
为3组,每组40只,分别为空白对照组、含黄芪益气
养血复方组(益黄组)和含红芪益气养血复方组(益
红组)。按生药6g/(kg·d),灌胃量20mL/(kg·
d)灌胃,1次/d,连续14d,空白对照组给予相同体
积的生理盐水作为对照。末次灌胃后摘除眼球取
血,收集血清,分别得到生理盐水空白对照组、含黄
芪益气养血组、含红芪益气养血组含药血清,将同组
的血清混合,56℃、30min灭活,过滤除菌,-80℃
保存备用。
2.2 脾淋巴细胞的分离及收集 取昆明种青龄鼠
和18月龄昆明种老龄鼠,摘除眼球放血,颈部脱臼
处死,无菌操作下分离脾脏,按照EZ-SepTM 小鼠
淋巴细胞分离液说明书分离淋巴细胞。用含10%
胎牛血清的完全RPMI-1640培养液分别稀释细胞
至所需浓度(1×105/mL)。
2.3 测定淋巴细胞增殖与含药血清的时效、量效关
系 取“2.2”中制备的老龄鼠脾淋巴细胞悬液加入
96孔板中,每孔100μL,将2.1中制备的各组含药
血清用完全RPMI-1640培养液分别稀释为7个浓
度,1.25%、2.5%、5%、10%、20%、40%、80%。分
别加入含老龄鼠脾淋巴细胞悬液的96孔板中,每孔
100μL,每个浓度梯度设置10个复孔。同时设置仅
含有脾淋巴细胞和RPMI-1640完全培养基的老龄
鼠、青龄鼠组,及不同浓度含药血清和完全RPMI-
1640培养液的空白对照组,分别培养48、72、96h。
培养结束前4h每孔加入5mg/mLMTT10μL,继
续培养4h。培养结束后每孔加入10% SDS100
μL,吹打混匀,37℃静置过夜,于酶标仪570nm处
检测光密度D(λ)值,以空白孔调零,由光密度值确
定含药血清最佳浓度及作用时间。
2.4 对ConA诱导老龄鼠脾淋巴细胞增殖影响
取“2.2”中制备的老龄鼠脾淋巴细胞悬液加入96孔
板中,每孔100μL。将各组含药血清稀释至2.3所
确定的最佳作用浓度并加入含老龄鼠脾淋巴细胞悬
液的96孔板中。每组设置10个复孔,其中5个复
孔加ConA(终浓度为5μg/mL),另外5个复孔不
加ConA,加入完全RPMI-1640完全培养液作为对
照。同时设不加含药血清的青龄鼠、老龄鼠组和完
全RPMI-1640培养液空白对照孔。时间为“2.3”中
确定的最佳培养时间。用 MTT法于酶标仪570
nm处检测D(λ)值,并用完全RPMI-1640培养液
做空白对照,计算刺激指数。
刺激指数=D(λ)ConA实验孔/D(λ)对照孔
2.5 培养上清液IL-2含量测定 取“2.2”中制备
的老龄鼠脾淋巴细胞和各组最佳浓度含药血清经最
佳培养时间后所得的培养上清液。严格按照IL-2
酶联免疫试剂盒说明书操作,于450nm处检测光
密度D(λ)值,并根据说明书绘制标准曲线,由标准
曲线公式计算培养上清液IL-2含量。
2.6 检测含药血清对细胞内总超氧化物歧化酶
(T-SOD)活性、丙二醛(MDA)水平的影响 取
“2.2”中制备的老龄鼠脾淋巴细胞与各组最佳浓度
含药血清共培养,培养时间为“2.3”中确定的最佳培
养时间。培养结束后收集细胞,用超声波细胞破碎
仪破碎细胞,按照试剂盒说明书绘制标准曲线,用
Braford法测定蛋白浓度。严格按照 T-SOD 及
MDA试剂盒说明书检测。
2.7 细胞内活性氧的测定 按“2.2”步骤制备老龄
鼠脾淋巴细胞与各组含药血清共培养,收集的细胞
严格按照ROS试剂盒说明书处理。于流式细胞仪
488nm激发波长,525nm检测波长测量荧光强度。
2.8 统计处理 所有计量资料以表示,数据采用
SPSS19.0软件进行单因素方差分析(ANOVA),
采用LSD-t检验进行组间比较,以P<0.05差异有
统计学意义。
3 结果
3.1 含药血清与老龄鼠脾淋巴细胞增殖的时效、量
效关系 结果如表1所示,随含药血清浓度的升高
和培养时间的延长,小鼠脾淋巴细胞增殖活性呈现
出先升高后降低的现象。培养72h时脾淋巴细胞增
殖活性优于48、96h,同组内浓度为40%的含药血
清对脾淋巴细胞增殖活性的刺激作用优于其他浓度
(P<0.05)。在刺激增殖活性方面益红组作用优于
益黄组,但均未达到青龄组水平。故确定最佳含药
血清浓度为40%,最佳培养时间为72h。
3.2 ConA诱导老龄鼠脾淋巴细胞体外增殖的影
响 如表2所示,各组细胞在ConA诱导下均表现
出增殖能力的提高,但各实验组在体外自身增殖和
诱导增殖下的增殖能力都与青龄组存在差异(P<
0.05)。老龄组脾淋巴细胞在ConA诱导增殖下与
其自身增殖无显著差异,灌胃生理盐水的空白血清
组脾淋巴细胞的增殖能力与老龄组比较也无显著差
异(P>0.05)。益红、益黄组在体外自身增殖和诱
导增殖下的增殖能力均优于老龄组(P<0.05),但
两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。
3.3 对培养上清IL-2含量的影响 结果如表3所
·2141· JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
示,老龄组和空白血清组小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2
水平相对于青龄组显著减少(P<0.01)。添加益
红、益黄含药血清后可显著提高培养上清IL-2含量
(P<0.01)且益红效果优于益黄(P<0.05),两者
表1 含红芪(益红)与黄芪(益黄)的益气养血复方含药血清与老龄鼠脾淋巴细胞增殖的时效、量效关系(􀭵x±s,n=10)
分组
时间
48h 72h 96h
青龄组 3.780±0.197 4.472±0.258 3.017±0.273
老龄组 1.013±0.196** 1.339±0.145** 1.096±0.212**
空白1.25% 1.005±0.169** 1.176±0.204** 0.989±0.267**
空白2.5% 0.962±0.134** 1.017±0.218** 0.885±0.315**
空白5% 0.935±0.213** 1.113±0.332** 0.993±0.329**
空白10% 1.070±0.172** 1.096±0.354** 1.042±0.217**
空白20% 1.237±0.166** 1.262±0.121** 1.315±0.095**
空白40% 1.165±0.337** 1.192±0.472** 1.163±0.332**
空白80% 1.326±0.173** 1.580±0.412** 1.192±0.332**
益红1.25% 1.011±0.212** 0.926±0.207** 0.973±0.214**
益红2.5% 1.115±0.296** 0.921±0.328** 1.012±0.399**
益红5% 1.002±0.222** 1.151±0.277** 1.033±0.141**
益红10% 1.172±0.168** 1.057±0.241** 0.983±0.443**
益红20% 1.339±0.231** 1.924±0.193**△ 1.552±0.164**
益红40% 1.975±0.282**△△## 3.013±0.329**△△##▲ 2.384±0.434**△△##▲
益红80% 2.175±0.424**△△ 1.957±0.407**△ 1.672±0.473**
益黄1.25% 0.928±0.142** 1.270±0.099** 1.119±0.158**
益黄2.5% 0.657±0.071** 1.12±0.144** 0.972±0.135**
益黄5% 0.960±0.161** 1.035±0.337** 0.952±0.226**
益黄10% 1.186±0.281** 1.762±0.335** 0.947±0.203**
益黄20% 1.368±0.296** 1.744±0.271** 0.921±0.119**
益黄40% 1.995±0.182**△△## 2.862±0.379**△△## 1.431±0.251**#
益黄80% 1.775±0.437**△△ 2.146±0.427**△△ 1.239±0.665**
注:与青龄组比较 *P<0.05,**P<0.01;与老龄组比较 △P<0.05,△△P<0.01;与同组其他浓度比较 #P<0.05,##P<0.01;与益黄
组比较 ▲P<0.05,▲▲P<0.01
表2 含红芪(益红)与黄芪(益黄)的益气养血复方含药血清对老龄鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响(􀭵x±s,n=10)
分组 剂量(g/kg) ConA(-) ConA(+) 刺激指数
青龄组 - 2.217±0.327 4.168±0.299 1.963±0.289
老龄组 - 1.179±0.192** 1.318±0.447** 1.251±0.213**
空白血清组 - 1.015±0.189** 1.472±0.411** 1.216±0.237**
益红血清组 6 1.769±0.174*△△## 2.231±0.256**△△## 1.662±0.167*△△##
益黄血清组 6 1.365±0.239**△## 1.932±0.211**△△## 1.538±0.131**△#
注:与青龄组比较*P<0.05,**P<0.01;与老龄组比较 △P<0.05,△△P<0.01;与空白血清组比较 #P<0.05,##P<0.01;与益黄组
比较 ▲P<0.05,▲▲P<0.01
表3 含红芪(益红)与黄芪(益黄)的益气养血
复方含药血清对老龄鼠脾淋巴细胞培养
上清IL-2含量影响(􀭵x±s,n=10)
组别 剂量(g/kg) IL-2含量(pg/mL)
青龄组 - 221.19±17.62
老龄组 - 64.82±8.31**
空白血清组 - 70.18±11.97**
益红血清组 6 150.22±10.96**△△##▲
益黄血清组 6 121.22±7.27**△△##
注:与青龄组比较*P<0.05,**P<0.01;与老龄组比较 △P<
0.05,△△P<0.01;与空白血清组比较 #P<0.05,##P<0.01;与
益黄组比较 ▲P<0.05,▲▲P<0.01
与老龄组比较差异有统计学意义(P<0.01),但其
IL-2含量尚未达到青龄组水平(P<0.01),空白血
清组培养上清IL-2含量与老龄组差异无统计学意
义(P>0.05)。
3.4 含药血清对细胞内 T-SOD活性、MDA水平
的影响 结果如表4所示,各实验组细胞内T-SOD
活性较青龄组均显著降低(P<0.01)。益红、益黄
·3141·JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
含药血清可提高细胞内T-SOD活性且较老龄组差
异有统计学意义(P<0.05)。青龄鼠细胞内 MDA
水平显著低于其余各组(P<0.05),含益红和益黄
的含药血清与老龄鼠脾淋巴细胞共培养,与老龄组
比较,细胞内 MDA水平降低(P<0.05)。灌胃生
理盐水的空白血清组对细胞内 T-SOD 活性和
MDA水平的影响与老龄组差异无统计学意义(P>
0.05)。红芪和黄芪在调节细胞内T-SOD和 MDA
水平方面差异无统计学意义(P>0.05)。
表4 含红芪和黄芪益气养血复方含药血清
对老龄鼠脾淋巴细胞内SOD活性及
MDA水平的影响(􀭵x±s,n=10)
分组
剂量/
(g/kg)
SOD/
(U/mg·prot)
MDA/
(nmol/mg·prot)
青龄组 - 4.683±0.372 0.929±0.215
老龄组 - 1.173±0.523** 2.093±0.227**
空白血清组 - 1.492±0.466** 2.115±0.183**
益红血清组 6 2.515±0.177**△△##1.612±0.323**△#
益黄血清组 6 2.361±0.331**△△##1.403±0.284*△△##
注:与青龄组比较*P<0.05,**P<0.01;与老龄组比较 △P<
0.05,△△P<0.01;与空白血清组比较 #P<0.05,##P<0.01;与
益黄组比较 ▲P<0.05,▲▲P<0.01
3.5 含药血清对细胞内活性氧水平的影响 结果
如表5所示,益红、益黄含药血清均可显著降低细胞
内活性氧水平,相对于老龄组差异有统计学意义(P
<0.05),但未达到青龄组水平(P<0.01)。其中以
益红组效果最佳。灌胃生理盐水的空白血清组与老
龄组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
表5 含红芪和黄芪益气养血含药血清对老龄鼠脾
淋巴细胞内活性氧水平的影响(􀭵x±s,n=10)
分组 剂量/(g/kg) ROS
青龄组 - 11.518±0.496
老龄组 - 19.372±1.317**
空白血清组 - 20.661±2.583**
益红血清组 6 14.914±0.511**△△##▲
益黄血清组 6 17.331±0.317**△##
注:与青龄组比较*P<0.05,**P<0.01;与老龄组比较 △P<
0.05,△△P<0.01;与空白血清组比较 #P<0.05,##P<0.01;与
益黄组比较 ▲P<0.05,▲▲P<0.01
4 讨论
红芪最早记载于《神农本草经》黄芪项下。陶弘
景曰:“有赤色者,可作膏贴,用消痈肿,俗方多用,道
家不须”〔9〕。中医实践证明,红芪与黄芪药效相近,
均具有补气升阳、益气固表的功效。
中药血清药理学方法,是用含药血清代替煎剂
或粗提物进行体外实验的新方法〔10〕。该法避免了
利用粗提物直接进行体外实验在方法学上存在的问
题,保证了结果的真实性和结论的可靠性。本实验
采用中药血清药理学方法,分别用含红芪与含黄芪
的益气养血含药血清刺激老龄鼠脾淋巴细胞,研究
二者对老龄鼠脾淋巴细胞增殖和抗氧化衰老作用的
影响。
中医认为,延缓衰老需补肾与活血结合〔11〕。王
思程等人发现肾虚与T淋巴细胞CD3、CD4和CD8
亚群的比例密切相关,老年肾虚患者中CD3和CD4
显著下降,CD8升高且T淋巴细胞增殖能力显著降
低〔12〕。张李峰等人研究发现红芪黄芪在增强细胞
免疫调节功能方面作用相似,但红芪在恢复T淋巴
细胞增殖能力方面优于黄芪〔12〕。细胞因子IL-2主
要由活化的CD4+Th1型细胞分泌,可促进Th0和
CTL的增殖,是调节特异性免疫应答的重要细胞因
子。本实验中,老龄鼠脾淋巴细胞无论在自身增殖
还是ConA诱导增殖下相对青龄鼠都表现出显著降
低。老龄鼠脾淋巴细胞分泌IL-2能力也较青龄鼠
显著降低,含红芪和黄芪益气养血复方含药血清均
可增强淋巴细胞的增殖能力和提升淋巴细胞IL-2
分泌能力,且红芪在这两方面作用都优于黄芪。
超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的抗氧
化酶,能消除生物体在新陈代谢中产生的有害物质。
丙二醛(MDA)是生物体内自由基作用于脂质发生
过氧化反应而产生的氧化终产物。,高会丽等人指出
机体自由基及其清除系统平衡紊乱可导致细胞衰老
甚至死亡,并且新疆红芪水提物可提高自然衰老小
鼠体内SOD含量,降低 MDA水平〔14〕。本实验研
究发现,老龄鼠较青龄鼠细胞内SOD活性显著降
低,MDA水平升高,含红芪和黄芪的益气养血复方
含药血清均可升高细胞内SOD活性,降低 MDA水
平,但二者作用无显著差异。活性氧(ROS)是生物
体内的氧自由基,过量积累将导致蛋白质、膜脂、
DNA及其他细胞组分的严重损伤。实验中,老龄鼠
细胞内ROS水平显著高于青龄鼠,益红和益黄含药
血清可显著降低老龄鼠细胞内ROS水平,红芪益气
养血含药血清效果最佳。
综上所述,含红芪的益气养血复方在体外增强
老龄鼠脾淋巴细胞增殖能力和提高培养上清IL-2
含量及降低细胞内ROS水平方面都优于含黄芪的
经典益气养血复方。红芪为甘肃道地药材,本实验
通过对红芪和黄芪在益气养血复方中的可替换性进
行比较研究为红芪替换经典复方中的黄芪的可行性
提供依据。但两者在其他复方中是否具有可替换性
还需要进一步研究论证。
·4141· JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
参 考 文 献
[1]张海滨,姜良铎,朱陵群,等.调养气血方延缓衰老的实
验研究[J].光明中医,2002,17(102):21-24.
[2]国家药典委员会.《中华人民共和国药典[M].2010版.
北京:中国医药科技出版社,2010:142,283-284.
[3]杨林,谭玉玲.中药红芪研究现状[J].中外医疗,2010
(05):120-121.
[4]桂曼曼,张李峰,李雪嫣,等.同一复方用黄芪与用红芪
对小鼠免疫功能影响的比较研究[J].中国实验方剂学
杂志,2011,17(21):203-206.
[5]郝丽晓,窦爱兰,高天爱.红芪于黄芪不同成分的研究
[J].山西医科大学学报,1990(30):37-38.
[6]赵健雄,封士兰,胡芳弟.中药材黄芪与红芪的色谱鉴
别法[J].分析测试技术与仪器,2005,11(1):46-50.
[7]杨小虎,郭延生,曲亚玲,等.红芪、黄芪水提液体外清
除自由基作用的研究[J].甘肃农业大学学报,2010,45
(4):42-45.
[8]SongQ,KobayashiT,XiuL,etal.EffectsofAstragali
rootandHedysarirootonthemurineBandTceldif-
ferentiation[J].JournalofETHNOPHARMACOLO-
GY,2000(73):111-119.
[9]杨扶德,罗文蓉,林丽,等.甘肃红芪质量标准研究[J].
中国药房,2008,19(18):1391-1393.
[10]阴赪宏,谭余庆,霍海如,等.中药血清药理学研究方
法及其应用[J].中国实验方剂学杂志,1997,3(6):41-
43.
[11]石作荣.关于抗衰老的中医理论探析[J].时珍国医国
药,2009,20(12):3173-3175.
[12]张李峰,卫东锋,程卫东,等.红芪替代复芪止汗颗粒
中的黄芪对免疫抑制小鼠细胞免疫作用的差异研究
[J].中成药,2012,34(8):1415-1420.
[13]王思程,郑洪新.肾虚衰老说———肾虚衰老与T细胞
凋亡自由基损伤的相关性[J].中华中医药学刊,2009,
27(4):836-838.
[14]高会丽,王丹巧.中药延缓衰老作用机制研究进展[J].
中国中药杂志,2009,34(15):1994-1997.
收稿日期:2014-02-26
基金项目:“十二五”国家科技支撑计划项目子课题(2011BAI05B0206),甘肃省自然科学基金项目(1212RJZA079),甘肃省中药药理与毒
理学重点实验室开放基金项目(ZDSYS-KJ-2012-004)
作者简介:景琪(1982-),女,在读硕士研究生,药师,专业方向:中药药理与毒理;Tel:13919102724,E-mail:jingqi2012by@163.com。
*通讯作者:任远,Tel:0931-8762653,E-mail:Leyuan816@163.com。
当归黄芪醇提物对糖尿病胃轻瘫模型大鼠的治疗作用
景 琪1,吴国泰1,2,杜丽东1,2,刘五州1,李应东1,任 远1,2*
(1.甘肃中医学院,甘肃 兰州730000;2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室,甘肃 兰州730000)
摘要 目的:研究当归黄芪(1∶2)醇提物对糖尿病胃轻瘫(DG)模型大鼠的治疗作用。方法:SD雄性大鼠腹腔
注射四氧嘧啶(200mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,检测胃肠推进指数和大便性状,判定DG造模成功后,阳性对照
组大鼠灌胃二甲双胍和西沙比利混合溶液(含盐酸二甲双胍200mg/kg和西沙比利0.5mg/kg),当归黄芪醇提物
高、低剂量组大鼠分别灌胃醇提物(生药10.5、5.2g/kg),1次/d,共42d。观察各组大鼠的状态,每隔14d称体质
量,并测空腹血糖值(FBG)和24h进食量及饮水量,末次给药后1h测定大鼠胃肠推进指数,股动脉取血,制备血
浆和血清,ELISA试剂盒测定血浆胃动素(MOT)、血清胰高血糖素(GLG)和胃泌素(GAS)水平,处死大鼠,取胃窦
组织,在光镜和电镜下观察平滑肌细胞和ICC细胞的组织形态。结果:当归黄芪醇提物高、低剂量能不同程度改善
模型大鼠的一般状态和粪便性状;给药28d,当归黄芪醇提物高剂量能显著增加模型大鼠体质量、24h进食量及减
少24h饮水量(P<0.05);给药42d,当归黄芪醇提物高、低剂量均能增加模型大鼠的体质量(P<0.01,P<0.05),
高剂量能增加模型大鼠24h进食量、减少24h饮水量、降低FBG(P<0.05);给药42d,当归黄芪醇提物高剂量能
显著增加模型大鼠胃肠推进指数(P<0.05),当归黄芪醇提物高、低剂量能显著降低大鼠血浆 MOT、血清GAS含
量(P<0.01,P<0.05),高剂量组大鼠血清GLG亦显著降低(P<0.01);当归黄芪醇提物高、低剂量能显著减轻模
型大鼠胃黏膜及黏膜下层充血,使胃窦平滑肌细胞及腺体细胞排列较整齐,细胞间隙稍大,平滑肌纤维化病变改
善。结论:当归黄芪醇提物对糖尿病胃轻瘫模型大鼠具有一定的治疗作用,作用机理与降低FBG、MOT和GAS水
平有关。
关键词 当归黄芪醇提物;糖尿病胃轻瘫;胃动素;胃泌素;Cajal间质细胞
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-
TherapeuticEffectsonEthanolExtractsofAngelicasinensisand
·5141·JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月