全 文 ：第 41 卷第 1 期 东 北 师 大 学 报 (自 然 科 学 版 ) Vo l.41 No.1
2009 年 3 月 Journal o f No r theast Normal Unive rsity(Natural Science Edition) March 2009
[ 收稿日期] 　2008-12-03
[ 基金项目] 　吉林省科技发展计划项目(20060903).
[ 作者简介] 　金永日(1963—),男 ,博士 ,教授 ,主要从事天然产物化学研究.
[ 文章编号] 1000-1832(2009)01-0137-04 ·研究简报·
高效液相色谱法测定葛枣弥猴桃
叶中黄酮苷 A 的含量
姚　华 ,陆　娟 ,刘梦韩 ,时晓磊 ,桂明玉 ,金永日
(吉林大学化学学院 ,吉林 长春 130012)
[摘　要] 　采用高效液相色谱法测定了葛枣猕猴桃叶中一种黄酮苷类成分 ———山奈酚-3-O-α-
L-鼠李糖基-(1※3)-α-L-鼠李糖基-(1※6)-β-D-吡喃半乳糖苷(黄酮苷 A)的含量.用十八烷基
硅烷键合硅胶做填充剂 ,甲醇-1%乙酸(乙酸体积分数为 0.1%)做流动相 , 检测波长为 267
nm .结果表明:线性范围为 0.099 ～ 9.99 μg;平均回收率为 102.3%;相对标准偏差为 1.5%.
[关键词] 　葛枣猕猴桃;黄酮苷 A;反相高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号] 　O 657.7+2　　　[学科代码] 　150·2540　　　　[文献标识码] 　A
0　引言
　　葛枣猕猴桃系猕猴桃科 ,猕猴桃属落叶缠绕藤木 ,别名木天廖 、葛枣子.葛枣猕猴桃喜生于落叶阔叶
林及杂木林中 ,分布于我国东北 、华北 ,还有朝鲜 、日本及俄罗斯远东地区.葛枣猕猴桃果实入药 ,秋季采
收 ,晒干即可.具有理气止痛之功能 ,主治腰痛 、疝痛.枝叶辛温有小毒 ,可治大风癞疾 、症积 、气痢 、风
劳.[ 1] 葛枣猕猴桃叶中含有多种环戊烷单萜类化合物 、三萜类成分及黄酮类化合物 , [ 2] 为了进一步开发
利用及保护葛枣猕猴桃天然资源 ,我们对葛枣猕猴桃叶的化学成分进行了研究 ,从葛枣猕猴桃叶的乙醇
提取物中分离得到了 6种化合物 ,其中黄酮苷 A 含量较高.本文采用高效液相色谱法测定了葛枣猕猴
桃叶中的黄酮苷 A含量[ 3-4] .
1　实验部分
1.1　仪器与药品
仪器:Agilent 1200型高效液相色谱仪;Startorius YDO-OIR电子天平;Re200型旋转蒸发器(瑞士
Buchi公司);KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司).
药品:甲醇(山东禹王实业有限公司禹城化工厂生产);水为重蒸蒸馏水;实验采用的样品为葛枣猕
猴桃叶 ,采自吉林省靖宇县 ,经长春中医药大学邓明鲁教授鉴定.
1.2　标准品的鉴定
葛枣猕猴桃黄酮苷 A 的对照品为自制 ,从葛枣猕猴桃叶的乙醇提取物中分离得到.按本文方法色
谱条件 ,归一化法测得质量分数为 98.4%.
黄酮苷 A:黄色粉末 ,HCl-Mg 鉴别反应 ,FeCl3 试剂显色反应 , Molish 反应均呈阳性 ,显示为黄酮
苷类化合物.ESI-MS(posit ive)m/Z :763.1[ M +Na] + ,1 503.1[ 2M +Na] +.(nega tive)m/Z :1 479.3
DOI :10.16163/j.cnki.22-1123/n.2009.01.026
东 北 师 大 学 报(自 然 科 学 版) 第 41卷
[ 2M-1] -.1H NMR(600 MHz ,DMSO-d6)δ:6.21(1H ,d , J =1.8 Hz , H(6)), 6.42(1H ,d , J =1.8 Hz ,
H(8)),6.87(2H , d , J =8.4 Hz , H(3′),H(5′)),8.05(1H , d , J =9.0 Hz ,H(2′), H(6′)), 5.30(1H ,d ,
J =7.8 Hz ,H(1″)), 4.70(1H ,S , H(1″″)), 4.39(1H ,S , H(1 )),1.06(1H , d , J =6.6 Hz , H(1 )),0.96
(1H ,d , J =6.6 Hz , H(1″″);13 C NMR(150 MHz , DMSO-d6)δ:156.6(C(2)), 133.5(C(3)), 177.5
(C(4)),161.0(C(5)),98.8(C(6)), 164.2(C(7)), 93.9(C(8)), 156.8(C(9)), 104.0(C(10)), 121.1
(C(1′)),131.2(C(2′)),115.1(C(3′)), 159.9(C(4′)),115.1(C(5′)), 131.1(C(6′)), 102.3(C(1″)),
72.1(C(2″)),72.9(C(3″)),68.1(C(4″)), 73.4(C(5″)),65.7(C(6″)),100.2(C(1 )), 70.0(C(2 )),
78.1(C(3 )), 70.9(C(4 )), 68.6(C(5 )), 17.9(C(6 )), 102.4(C(1″)), 70.4(C(2″″)), 70.3
(C(3″)),71.0(C(4″)),68.3(C(5″)),17.7(C(6″″)).其1H NMR和13C NMR数据与文献[ 5]中的黄
酮苷 A 数据一致 ,故鉴定化合物为黄酮苷 A ,结构见图 1.
图 1　黄酮苷 A的结构式
1.3　溶液的制备
1.3.1　对照品溶液的制备
精密称取黄酮苷 A对照品适量 ,加入甲醇制成 1 mg/mL 的溶液 ,即得对照品.
1.3.2　供试品溶液的制备
精密称取干燥的葛枣猕猴桃叶粉末样品 1.0 g ,用甲醇回流 ,提取 3次 ,每次加 25 mL 甲醇 ,提取时
间分别为 1 , 1.5 ,2 h ,合并提取液 ,蒸干溶剂后加入甲醇 ,溶解并定容至 25 mL ,经 0.45 μm 滤膜过滤 ,
取续滤液即得供试品.
2　实验结果
2.1　色谱条件与系统适用性实验
色谱柱为 Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相为甲醇-乙酸梯度洗脱 ,
V(甲醇)∶V(1%乙酸)=37∶63;洗脱时间为 0 ～ 30 m in;在 30 ～ 50 min ,洗脱液为纯甲醇;流速为 1.2
mL/min;检测波长为 267 nm;柱温为 25℃;进样量为 10 μL.在上述色谱条件下 ,对照品及供试品的色
谱图见图 2和 3.
2.2　线性关系的考察
精密吸取对照品溶液 0.1 ,0.5 ,0.0 ,1.0 ,2.0 ,4.0 ,8.0 ,10.0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中 ,加入甲
醇定容.分别取上述系列对照品溶液各 10 μL ,注入高效液相色谱仪 ,以峰面积(y)为纵坐标 ,以进样量
(x ,单位为μg)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算回归方程:y=981.70 x+11.37 ,相关系数 r=0.999 9 ,实
验结果表明 ,黄酮苷 A 在 0.099 ～ 9.99 μg 范围内与峰面积呈现良好的线性关系.
2.3　精密度实验
取 10μL 对照品溶液 ,重复进样 6次 ,根据测得峰面积值进行计算 ,得到的相对标准偏差为0.30%.
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第 1 期 姚华 , 等:高效液相色谱法测定葛枣弥猴桃叶中黄酮苷 A 的含量
2.4　重复性实验
精密称取 6份 1.0 g 干燥的葛枣猕猴桃叶 ,按上述制备供试品溶液的方法处理 ,制得 6 份供试品溶
液 ,注入液相色谱仪 ,测定黄酮苷 A 峰面积 ,计算了黄酮苷 A含量.结果样品中黄酮苷 A 含量的相对标
准偏差为 1.97%.
2.5　稳定性实验
按上述方法处理1份样品 ,制得供试品溶液 ,在 0 ～ 12 h内每隔 2 h进样一次测定峰面积 ,计算黄酮
苷 A峰面积的相对标准偏差为 0.53%.结果表明供试品溶液在 12 h 内稳定性良好.
2.6　回收率实验
分别精密称取同一批 6份样品 ,各加入 25 mL 黄酮苷 A对照品溶液(0.16 mg/mL),按上述方法制
备供试品溶液 ,采用高效液相色谱法测定黄酮苷 A 的含量 ,计算了其回收率(见表 1).由表 1可见 ,平均
回收率为 102.3%,相对标准偏差为 1.5%.
表 1　回收率实验结果
样品量/ g 样品中黄酮苷 A 的含量/(m g/ g) 加标量/mg 测得量/mg 回收率/ %
0.509 3 4.010 4 4.0 8.006 4 99.9
0.500 2 4.001 6 4.0 8.117 6 102.9
0.501 2 4.009 6 4.0 8.149 6 103.5
0.502 1 4.016 8 4.0 8.124 8 102.7
0.501 7 4.013 6 4.0 8.169 6 103.9
0.501 3 4.010 4 4.0 8.046 4 100.9
2.7　样品测定
取三批样品 ,制备成供试品溶液.分别精密吸取黄酮苷 A 对照品溶液和供试品溶液各 10 μL ,注入
液相色谱仪 ,测定其峰面积.三批样品的测定结果分别为 8.35 ,7.98和 8.51 mg/g ,相对标准偏差分别
为 1.65%,1.57%和 1.49%.
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3　讨论
(1)测定波长的选择:紫外光谱图显示葛枣猕猴桃黄酮苷A 在267 nm 附近有最大吸收 ,故选定 267
nm 为测定波长.
(2)流动相选择:考察过流动相乙腈-水 ,甲醇-水 ,乙腈-0.1%乙酸 ,甲醇-0.1%乙酸 ,结果发现只有
以甲醇-0.1%乙酸为流动相时 ,葛枣猕猴桃黄酮苷 A 有较好的分离效果 ,理论塔板数以黄酮苷 A 计为
3 469.因此选用上述条件作为流动相.
(3)考察了提取溶剂的影响 ,比较了水 、甲醇和无水乙醇 ,结果以甲醇的提取效果最佳.通过干燥葛
枣猕猴桃叶以甲醇室温冷浸 24 h ,回流提取2 h(72℃),超声提取 0.5 h ,发现回流提取效率最高.经 RP-
HPLC测定发现 ,回流 3次与 4次的提取率基本一致 ,因此选择回流提取 3次 ,每次加入甲醇量为 25
mL .3次回流时间分别选择 1 ,1.5和 2 h.
(4)通过实验建立了 RP-HPLC测定葛枣猕猴桃叶中黄酮苷 A 含量的测定方法 ,该方法准确 ,结果
可靠.
[参　考　文　献]
[ 1] 　吉林省中医中药研究所.长白山植物药志[ M] .长春:吉林人民出版社 , 1982:1-109.
[ 2] 　李平亚 ,赵春芳 ,刘金平.猕猴桃的化学成分和生物活性研究进展[ M] .长春:吉林科学技术出版社 , 2006:9-125.
[ 3] 　郭忠奎 ,张炜煜.RP-HPLC法同时测定三七安宫胶囊中人参皂苷和三七皂苷的含量[ J] .东北师大学报:自然科学版 , 2008 , 40
(3):126-130.
[ 4] 　尚庆坤 ,玄玉实 ,朱东霞 ,等.高效液相色谱法分离制备菱角壳中的生物碱[ J] .东北师大学报:自然科学版 , 2007 , 39(2):82-86.
[ 5] 　许文东 ,林厚文 ,丘峰 ,等.蛇莓的化学成分[ J] .沈阳药科大学学报 , 2007 , 24(7):402-406.　
Determination of flavonol glycoside A in the leaves of
Actinidia polygama (Sieb.et Zucc.)Miq by HPLC
YAO Hua , LU Juan , LIU M eng-han ,SHI Xiao-lei ,GUI M ing-yu , JIN Yong-ri
(College of Chemis try , Ji lin University , Changchun 130012 , China)
Abstract:T o establish a quanti tative me thod fo r determination of one main f lav onol gly co side
[ kaempfero l-3-O-α-L-rhamnopy rano syl-(1 ※3)-α-L-rhamnopy ranosy l-(1 ※6)-β-D-galactopy rano side]
in the leaves o f Act inid ia polygama(Sieb.et Zucc.)Miq.This me thod w as perfo rmed on the Eclipse
XDB-C18 column w ith a mobile phase o f methanol-water and the detection w aveleng th w as 267 nm .The
linearity of this method w as good in the range of 0.099 ～ 9.99μg and the average recoveries of A w as
102.3%, and the RSD was 1.5%.The method is accurate , reliable and reproducible fo r determination
of A in the leaves of Act inidia polygama .
Keywords:Act inid ia polygama;f lavonol glycoside A;RP-HPLC;dete rminat ion
(责任编辑:石绍庆)
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