全 文 ：黑石耳多搪对氧自由基及脂质过氧化的影响
西安交通大学(西安 7 1以万l )靳菊情 边 晓丽 葛 萍 靖 会 丁 玲 丁东宁
摘要 目的 : 研究黑石耳 ( 及丽欧仍叫刀 瓜油汉娜 , D EM )多糖对氧自由基的清除作用及其对脂质氧化 (】只 ) )的抑
作用 。 方法 :经自由基 ( · oH )由 eF ~ 体系产生
,超氧自由基 (街 )由邻三酚 自氧化法产生 ,通过比色法测定脂质过
氧化反应 (】」刃 )的终产物— 丙二醛 ( MD A )的相对含量来反映黑石耳多糖对 1尸O 的影响 。 结果 : 黑石耳多搪对 ·
oH 和 伐
· 有较强的清除作用 ,达到 50 %清除率所需药物浓度 Eha( 分别为 1 . 72 111岁耐 和 2 . 12 m g/ d ;可降低 L八〕的
终产物 MD A 的含量 。 结论 :黑石耳多糖对氧自由基有清除作用 , 对脂质过氧化有抑制作用 ,其活性大小与剂量呈
正相关 。
关键词 黑石耳 多糖 氧自由基 脂质过氧化
黑石耳 烧
~
“柳 n 而 n妞咖 ( L . ) M~ . 〕 ,又
名皮果衣 , 主治高血压及消化不 良等症 。 有关黑石
耳多糖的提取及其结构特征已有报道〔’ 〕。 近年来研
究表明 ,多糖具有清除活性氧 、 延缓机体衰老之功
能图 。 本文主要研究 了黑石耳多糖对活性氧的影
响 , 为开发天然的抗氧化新药提供参考 。
1 仪器与试剂
,
.
1 仪器 7 52 型紫外光栅分光光度计 (上海第三
分析仪器厂 ) , PH S一3C 型酸度计 (上海雷磁仪器厂 ) 。
,
,
2 试剂 藩红花红 0 、 氯化硝基 四 氮哇兰 N班
(生化试剂 ) , 乙 二胺 四 乙 酸二钠 ( E DT A~ N硕) 、 硫酸
亚铁 、邻苯三酚 、 硫代巴 比妥酸 ( T BA )等均 为分析
纯 。 黑石耳多糖为本实验室提取 , 经 阮 p h a d e x O 150
柱层析证明为均一多糖 ,硫酸 一酚法测得多糖含量为
90
.
2%
,实验时用二次蒸馏水溶解 。
2 实验方法与结果
2
.
, DE M 多糖对 · oH 的清除作用 测定方法参考文献方法阁 。 · O H 由 ED T A一 N aZ 一 eF ( n )一姚仇 体系
产生 , 由于 · OH 可特异地使藩红花红 0 褪色 , 根据
褪色程度用比色法来衡量 . O H 的含量 。 反应体系含
州 7 . 4 的磷酸缓 冲液 1 , s d , 藩 红花红 0( 2团 子侣 /
d ) 0
.
2 d
,
3% 的 玩仇 0 . 8 而 , 2 n nU o F L 的 E l” A -
N匆 一eF ( n ) 0
.
7 d
, 再加人一定量不 同浓度的供试
液 ,混合均匀后于 37 ℃水浴保温 30 而 n , 然后于 520
urn 处测吸光度 A 值 。 空白组以重蒸水代替供试液 ,
对照组 以重蒸水代替供试液和 E D r A一N aZ 一eF ( n ) ,
反应总体积为 4 . 0 时 。 每个浓度组平行测定 5 个 ,
求其平均值 。 实验结果以清除率 E% 表示 , E C , 表
示达到 5 0% 清除率体系中的药物浓度 。 按 E% =
( A提二 一 A , 。 ) / ( A , 。 一 A。 白 ) x lo % 进行计算 , 结
果详见表 1。 由表 1 可见 , DEM 多糖对 . O H 有一定
的清除作用 ,其清除能力大于阳性对照物甘露醇 。
2
.
2 多糖对 仇· 的清除作用 邻苯三酚在碱性 条
.
660
`
件下易氧化产生超氧 自由基 (仇 · ) , 仇 · 与 N BT 作用
形成紫色化合物在 530 mn 处有吸收 , 以 A 值反映
街 的含量 。 加入不同量样液 , 测定样 品对 A 值的
影响 。 测定 方法参 考文献 方法阎 。 取 0 . 05 n l o l / L
声 8 . 2 的 irT s 一H CI 缓冲液 3 耐 于试管 中 , 置 25 ℃水
浴中预热 20 而 n , 加 .0 4 耐 不 同浓 度 样 液 , 0 . 98
仙加】/ L 的 N BT 0 . 8 时 , 10 n u n o l / L 的邻苯三 酚 .0 4
时 ,混匀后在 25 ℃水浴 中反应 4 而 n ,立即用 8 mo F L
的 H CI 0 . 1 司终止反应 ,并在 530 ln 处测吸收度 A 。
对照管用 0 . 4 耐 重蒸水代替样品 。 测定结果以清
除率 E% = ( A对照 一蛛品 ) / ( A对照 一 A空白 ) x 10 % 表
示 。 结果见表 o2
表 1 D E 叭多糖及甘露醉对 . O H 的清除作用
试样
甘露醇
体系浓度
( m g /耐 ) 清
除率 E%
614372985
1) EM 多糖
士 S , n =
.
10 土 1
.
.
4 5 士 1 .
.
1翅玉土 0 .
2 0 士 0 .
.
59 土 1 .
.
1 )士 0 .
.
36 土 0
.
E与
( m g/ d )
3 9
.
38 士 1 . 14
.伪 土 0 . 16
.
84 士 0
.
24
.
56 士 0 . 63
2034561以13985卯62盯430211傀、4nU
表 Z D目她 多糖对仿 的清除作用
体系浓度 (C n 1岁耐 ) 清除率 E% (又士 s , n 二 5) E与 ( n娜 d )
24
.
10 士 1 . 48
36
.
0 士 2
,
67
40
.
48 士 l
,
86
46
.
43 士 2
、
36
6 1
.
3 1 士 1
.
76
2
.
1 2
728613501-
,乙
2
2
.
3 多糖对脂质过氧化的抑制作用 经 自由基
(
·
OH )由 E D T A一 NaZ 一eF ( n 卜线仇 体系产生 , · o H 使
中药材第 24 卷第 9 期 2X( ) 1年 9月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2001. 09. 021
肝匀浆中不饱和脂肪酸发生 1尸0 反应 , 其终产物为
丙二醛 ( MD A ) ,在 H Ae 条件下 , T BA 可使 MDA 显色 ,
根据显色程度衡量 M DA 的相对含量 。 测定方法参
考文献 方法以 4〕。 采用 BT A 显 色 法 , 反应 体系 为
or % 的肝匀浆 0 . 5 血 ,声 7 . 4 磷 酸缓冲液 1 . 0 而 ,
E朔队 一呱 一 eF ( 1 ) 2 . 0 而 , 3% 玩仇 1 . 0 诫 , 不 同浓度
多糖样品液 1 . 0 血 。 对照组以等体积重蒸馏水代替
样品液 。 空 白组 以重蒸馏水代替样品液及 E创队 -
嘱 一eF ( n )和 3% 姚仇 。 各组反应液混匀后于 37 ℃
水浴加热 30 m in , 各取反 应混合液 0 . 3 而 , 分别加
20 % HA
。 1
.
2 d
,
0
.
5% 的 T B A 2 . 0 耐 , 95 ℃水浴加热
l h
,冷却后在 53 0 ln 处 , 以空白管调零 ,测定吸收度
A值 ,按下式计算抑制率 , 抑制率 = (橱照 一 嘛品 ) /
橱照 ` 1阅% 。 结果详见表 3。 结果表明 : DE M 多糖
对脂质过氧化有明显抑制作用 , 达 50 % 抑制效应所
需黑石耳多糖量 ( E C , )约为 2 . 79 n l g/ 耐。
表 3 D E她 多精对脂质过氧化的抑制作用
体系浓度 (C l l娜 d ) 清除率 E% (又土 s , n 二 5) E与 (叫犷d )
当活性氧在体内的代谢失衡时 , 将导致氧自由基增
多 , 脂脂过氧化增强 ,进而诱发一系列的机体损伤过
程 ,从而导致人体器官的衰老阁 。 因此国内外许多
学者正在积极从事具有清除氧自由基和抗脂质过氧
化药物的筛选工作 。 有关氧自由基的测定方法除比
色法外还有许多其它方法 。 如化学发光法 , 电子 自
旋共振波谱法等 。 因比色法简便易行 , 使用比较广
泛 。 本实验结果显示黑石耳多糖对 · oH 和 街 有较
强的清除作用 , E与分别为 l , 72 m g/ d 和 2 . 12 m g/
以 ;对 ` O H 诱导的肝匀浆 LR ) 有明显的抑制作用 。
此结果只是初步肯定了 DE M 多糖的体外抗氧化作
用 , 能否作为抗衰老药物还需要进一步通过体内药
理实验证实 。
参 考 文 献
巧 .伪 土 1 . %
26
.的 士 1 . 13
4 1
.
7 士 1
.
85
53
.
5 8 土 2 , 03
57
.
7
土 1 . 42
2
.
7 9
3 小结与讨论
目前衰老的自由基学说引起人们的广泛重视 ,
1 靳菊情 ,等 . 黑石耳多糖的初步化学研究 . 中国药学杂
志 , 11从i , 31 (9 ) : 5加
2 黄芳 ,等 . 活性多糖的研究进展 . 天然产物研究与开发 ,
19臾〕, 11 ( 5 ) : 93
3 王巨存 ,等 . 有机储 G e . 132 对氧自由基和经 自由基诱导
的脂质过氧化的影响 . 中国药学杂志 , l , , 冬, 29 ( 1 ) : 23
4 向荣 ,等 . 过氧化脂质硫代 巴比妥酸分光光度法的改
进 . 生物化学与生物物理进展 , 19以) , 17 ( 3) : 24 1
5 莫简主编 . 医用自由基生物学导论 . 北京 : 人民卫生出
版社 , 1989 : 113 一 157
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一
05
一 25 收稿 )
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中药材第 抖 卷第 9 期 2X() 1年 9 月