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(收稿日期:2008-05-29;修回日期:2008-09-02)
反相高效液相色谱法测定赶黄草中没食子酸的含量
贺晓华1 , 2 , 许龙1 , 2 , 杜方麓1 , 曾建国1 , 2＊ (1.湖南中医药大学药学院 , 长沙　410208;2.湖南省中药提取工程研究
中心 , 长沙　410331)
摘要:目的　建立测定赶黄草中没食子酸含量的反相高效液相色谱方法。 方法　Hyper sil BDS-C18色谱柱 , 流动相
为乙腈-0.1%磷酸水溶液 (10∶90), 检测波长为 270 nm , 流速为 0.8 mL ·min-1 。结果　赶黄草中没食子酸与其
他成分得到很好的分离 , 测定没食子酸含量的线性范围为 0.004 0 ～ 0.100 6 mg·m L-1 , r=0.999 8 , 平均回收率
为 99.22%。结论　本方法简单 、 快捷 、 重现性好 , 适用于赶黄草中没食子酸的含量测定。
关键词:赶黄草;没食子酸;反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.2 , R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2008)06-0717-03
RP-HPLC determination of gallic acid in Penthorum chinense Pursh
HE Xiao-hua1 , 2 , XU Long 1 , 2 , DU Fang- lu1 , ZENG Jian-guo1 ,2＊ (1.Collegeof Pharmaceutical Sciences , Hunan U-
niversity o f T rad ition Chinese Medicine , Changsha 410208;2.H unan Engineering Research Center of Botanical
E x tract , Changsha 410331)
Abstract:Objective　 To establish an RP-H PLC method fo r the determination o f gallic acid in Penthorum chinense
Pur sh.Methods　 Gallic acid w as analy zed by RP-H PLC on a Hypersil BDS-C18 column and de tected a t 270 nm.The
mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phospho ric acid (10∶90) at 0.8 m L ·min-1 .Results　Gallic acid was
well separated f rom o ther compounds in Penthorum chinense Pur sh.The calibration curve w as linear a t 0.004 0 ～
0.100 6 mg·m L-1 of gallic acid with co rrelation coefficient 0.999 8.The ave rage recovery of g allic acid w as 99.22%.
Conclusion　The method is fast , reliable , accur ate , and suitable for the analy sis o f gallic acid , and fo r the quality
contro l in Penthorum chinense Pursh.
Key words:Penthorum chinense Pur sh;ga llic acid;RP-H PLC
　　赶黄草为虎耳草科扯根菜属植物扯根菜 (Penthorum
chinense Pursh)的干燥地上部分[ 1] , 为苗族民间的草药 ,
主要分布于四川 、 贵州 、 湖南等地 。赶黄草具有清热解毒 、
退黄利湿 、 活血散瘀 、 利水消肿之功效[2] , 广泛用于治疗各
型肝炎 、 胆囊炎 、 脂肪肝等疾病[ 3] 。赶黄草含有黄酮类和有
机酸类物质 , 其中已知的有效成分为没食子酸和槲皮素[4] ,
研究表明 , 这 2 个成分具有抗乙肝病毒和保肝的作用[ 5] 。文
献关于赶黄草中槲皮素含量的测定[6-8] 已有报道 , 但对于另
一主要已知活性成分没食子酸[ 9]的含量测定未见报道 , 本试
验选择反相高效液相色谱法测定赶黄草中没食子酸的含量。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪 (大连依利特 , 型号:P230 , EC2000
色谱工作站 , 紫外检测器)。
没食子酸 (中国药品生物制品检定所 , 含量:98%, 批
　　基金项目:湖南省科技厅国际合作重点项目(2007w k2003)。
作者简介:贺晓华 , 女 , 硕士研究生 , 主要从事中药及其复方化学成分研究。 　　＊通讯作者:曾建国 , 男 , 教授 , 硕士生导师 , 主要
从事中药化学成分研究 , Tel:(0731)3283276 , E-mai l:ginkgo@w orld-way.net
中南药学 2008年 12月第 6卷第 6期　Cent ral S outh Ph armacy.December 2008, Vol.6 No.6
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号:110831-200302);乙腈 、 甲醇为色谱纯 , 试验用水为重
蒸水。
赶黄草药材采于湖南浏阳和四川古蔺 , 经湖南中医药大
学周日宝教授鉴定为赶黄草原植物 Penthorum chinense Pur-
sh。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Hypersil BDS-C18(4.6 mm ×250 mm , 5 μm);
流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液 (10∶90);流速:0.8 mL ·
min-1 ;检测波长:270 nm;柱温:35 ℃;进样量:5μL。采
用外标峰面积法计算含量 , 理论塔板数>5 000 , 没食子酸峰
(tR=9.4 min)与相邻峰分离度>1.5 , 色谱图见图 1。
图 1　没食子酸对照品与样品色谱图
Fig 1　HPLC chromatog ram of gallic acid standard and sample
A.对照品(reference su bstance);B.供试品 (sample);1.没食
子酸 (galli c acid)
2.2　对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品适量 , 加甲醇配
成浓度为 0.100 6 mg·m L-1对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
将赶黄草药材切段粉碎 , 过筛 , 精密称取 1.0 g , 置锥
形瓶中 , 加入 50 mL 重蒸水 , 加热超声 1 h , 过滤至 50 mL
容量瓶中 , 放冷后用重蒸水补至刻度 , 再用 0.45μm 的水相
滤膜过滤 , 即得。
2.4　线性关系的考察
分别精密量取浓度为 0.100 6 mg ·mL -1的没食子酸对
照品溶液 1 、 5、 10 、 15 、 25 mL 置于 25 mL 容量瓶中 , 用
甲醇稀释至刻度 , 每一浓度各进样 2 次 , 每次进样 5 μL ,
以峰面积积分值 A 对进样浓度 C 作图得回归方程:A=
4.861×104 C-10.89 (r=0.999 8 , n =5)没食子酸在
0.004 0 ～ 0.100 6 mg ·mL -1呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验
精密量取浓度稀释为 0.020 1 mg ·mL -1的没食子酸对
照品溶液 , 按 “ 2.1” 色谱条件进样 6 次 , 每次进样 5 μL ,
平均峰面积为 996.2 , RSD 为 0.9% (n=6)。
2.6　重复性试验
精密称取同一批药材 (产地四川 , 批号:080201) 6
份 , 按 “ 2.3” 方法操作 , 分别制备供试品溶液 , 按上述色
谱条件进样测定 , 没食子酸含量的 RSD=1.1%(n=6)。
2.7　稳定性试验
精密称取赶黄草药材 (产地四川 , 批号:080201)按
“ 2.3” 方法操作制成供试品溶液 , 将供试品溶液分别在 0 、
5 、 10 、 15 、 20、 25 h 进样 , 测定峰面积 , 峰面积 RSD=
0.9%(n=6)。
2.8　回收率试验
精密称取已知没食子酸含量的药材 9 份 (产地四川 , 批
号:080201), 按 “2.3” 方法操作 , 再分别加入一定量的对
照品 , 测定含量 , 计算平均回收率为 99.22% , RSD =
1.3%(n=9), 结果见表 1。
表 1　回收率测定结果
Tab 1　Recovery of gallic acid
样品重
(sample
w eig ht)
/ g
样品含量
(sam ple
conten t)
/mg
加入量
(added
amoun t)
/mg
测得量
(detected
amoun t)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均值
(average
valu e)
/ %
RSD
/ %
0.107 2 0.226 7 0.054 2 0.279 9 98.15
0.107 2 0.226 7 0.053 8 0.280 1 99.26 97.89 1.6
0.107 2 0.226 7 0.057 6 0.282 2 96.25
0.104 3 0.220 6 0.202 3 0.423 5 100.3
0.104 3 0.220 6 0.204 1 0.422 8 99.07 99.67 0.6
0.104 3 0.220 6 0.201 9 0.421 8 99.65
0.105 9 0.224 0 0.452 4 0.678 9 100.6
0.105 9 0.224 0 0.449 6 0.672 4 99.73 100.1 0.5
0.105 9 0.224 0 0.450 3 0.674 2 99.98
2.9　样品测定
取 6批 2个不同产地的药材 , 按 “ 2.3” 方法制备供试
品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液 5 μL , 注
入液相色谱仪 , 测定 , 以外标法计算 , 结果见表 2。
表 2　赶黄草中没食子酸的质量分数 (n=3)
Tab 2　Content determination of gallic acid in samples(n=3)
产地
(place of prodluct ion)
批号
(Lot No.)
没食子酸含量
(conten t of gallic acid)
湖南 080101 1.358
080102 1.802
080103 1.749
四川 080201 2.115
080202 2.402
080203 2.523
3　讨论
3.1　测定波长的选择[ 10]
实验结果表明没食子酸的最大吸收峰在 270 nm 波长处 ,
故选择该波长为测定波长。
3.2　流动相的优化
实验过程中选择了多种流动相[ 10 , 11] , 如甲醇-0.1%磷酸
水 、 乙腈-0.1%磷酸水 、 乙腈-水 、 甲醇-水等。结果表明 ,
用乙腈-0.1%磷酸水溶液作流动相 , 基线稳定 , 分离度好 ,
峰形对称 , 因此确定乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相。
3.3　提取方法选择
通过甲醇超声和重蒸水超声 2 种提取方法比较发现 , 甲
醇超声提取液在没食子酸保留时间内无吸收 , 说明无游离没
食子酸存在 , 所以选择重蒸水超声提取。通过对不同时间提
取液测定 , 结果显示 1.0 h 提取液中没食子酸含量最高 , 当
Cen t ral South Pharmacy.December 2008 , Vol.6 No.6　中南药学 2008年 12月第 6卷第 6期
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超声时间>2.0 h 时 , 没食子酸含量反而降低 , 所以确定提
取时间为 1.0 h。
3.4　意义
中国药典 2005 版一部未收录有关赶黄草药材及其制剂
肝苏颗粒的质量控制标准 , 本文建立了检测赶黄草中没食子
酸含量的方法 , 弥补了以前只对赶黄草药材中槲皮素含量进
行测定的不足。通过对没食子酸含量的测定 , 能全面反映出
赶黄草药材中有效成分的含量情况 , 因此适用于赶黄草药材
的质量控制及定量分析。
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(收稿日期:2008-09-28;修回日期:2008-10-28)
高效液相色谱法测定上清丸中盐酸小檗碱的含量
陈蓓1 , 易爱纯1 , 王宁2 (1.湖南省长沙市第一医院 , 长沙　410005;2.湖南省怀化市药品检验所 , 湖南怀化　418000)
摘要:目的　建立上清丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法　采用 HPLC 法。色谱柱为 DiamonsilT M C18柱 (250
mm×4.6 mm , 5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol· L -1磷酸二氢钠溶液 (每 1 000 m L 中加十二烷基磺酸钠 1.7 g)
(40∶60);流速 1.0 m L·min -1 ;柱温:25 ℃;检测波长:345 nm。结果　盐酸小檗碱进样量在0.257 5～ 0.600 9
μg 与峰面积呈良好线性关系 (r=0.999 9), 平均加样回收率为 98.42% (RSD=1.09%, n=9)。结论　该方法简
便 、 准确 、 重现性好 , 可用于上清丸中盐酸小檗碱含量的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;上清丸;盐酸小檗碱;含量
中图分类号:R927.2 , R284.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2008)06-0719-03
Determination of berberine hydrochloride in Shangqing pills by HPLC
CHEN Bei1 , YI Ai-chun1 , WANG Ning2 (1.F irst Hospital of Changsha , Changsha 410005;2.H uaihua Insti-
tute f or Drug Control , H uaihua Hunan 418000)
Abstract:Objective　 To establish a content determination method for be rbe rine hydro chloride in Shangqing pills.
Methods　HPLC analysis was ca rried out w ith DiamonsilTM C18 co lumn (250 mm×4.6 mm , 5 μm), and acetoni-
trile-0.05 mol· L-1 sodium dihydro gen pho sphate (1.7 g sodium laurg lsulfate added to 1 000 mL solution)(40∶60)
was the mobile phase.The flow rate w as 1.0 mL ·min -1 ;the column temperature w as 25 ℃;and the detection wave-
length w as 345 nm.Results　Berberine hydro chlo ride w as linear w ithin 0.257 52 ～ 0.600 88 μg fo r bilirubin (r=
0.999 9), and the aver age r ecovery wa s 98.42%(RSD=1.09%, n=9).Conclusion　The me thod is simple , accu-
rate , reproducible , w hich can be used fo r the quality cont rol of the Shangqing pills.
Key words:HPLC;Shangqing pills;be rbe rine hydrochlo ride;content
　　上清丸[ 1]是由菊花 、 白芷 、 黄芩 、 黄柏等 12 味药组成 , 收载于 《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》 , 具有清热
　　作者简介:陈蓓 , 女 , 主管药师 , 主要从事医院药学等工作 , Tel:(0731) 4667622 , E-m ail:b gtw zh@sohu.com
中南药学 2008年 12月第 6卷第 6期　Cent ral S outh Ph armacy.December 2008, Vol.6 No.6