全 文 ：收稿日期:2013-12-19;修回日期:2014-01-22
基金项目:四川农业大学双支计划项目(2130301);四川省教
育厅重点项目(11ZA085)
作者简介:孙会松(1991 －)，女，本科生．
通信作者:舒 刚(1978 －)，男，讲师，博士研究生，研究方向
为中药药理与药剂，cndyx2005@ 163． com．
赶黄草保肝泡腾颗粒的制备及工艺优化
孙会松，易 洁 ，孙雪昆，梁 娜，王 杉，符华林，舒 刚
(四川农业大学 动物医学院，四川 雅安 625014)
中图分类号:S859． 79 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2014)12 － 0166 － 04
关键词:赶黄草;泡腾颗粒;制备工艺;工艺优化
摘 要:为了获得赶黄草保肝泡腾颗粒的最佳制备工艺，试验将赶黄草浸膏、柠檬酸、碳酸氢钠等混合
制粒，并采用 L9(3
3)正交试验分析方法优选颗粒的制备工艺。结果表明:酸碱比 1 ∶1，糊精淀粉比
2∶3，不包合碱性泡腾剂为最佳制备工艺。说明应用试验优选的制备工艺可得到质量稳定可控的赶黄
草保肝泡腾颗粒。
赶黄草为苗族传统药物，又名水泽兰、水杨柳等，
学名扯根菜，是虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属
(Penthorum gronvexl)植物扯根菜的干燥地上部分［1］。
史载于明代《救荒本草》，现收载于《中华人民共和国
卫生部药品标准中药成方制剂十三册》附录［2］。《中
药大辞典》和《四川中药志》也均有记载。赶黄草可
全草入药，性温、味甘、无毒，具有清热解毒、消肿活
血、平肝健脾、利尿祛黄疸等功效［3］。临床用于黄
疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤、各型肝炎、胆囊
炎、脂肪肝等疾病的治疗［4］。
在畜禽养殖过程中，脂肪综合征和药源性肝肿大
等疾病常导致肝功能的损伤，对患病畜禽用药不但不
能治愈疾病反而会加重病情延误治疗。结合泡腾颗
粒的酸碱系统反应产生二氧化碳气体并在毛细管和
膨胀作用下促进泡腾颗粒本身体积溶胀使所载药物
迅速溶出释放的作用，研制出了用于治疗和保护禽畜
肝脏的赶黄草泡腾颗粒。本试验以黄酮类成分及溶
出时间为评价指标，通过正交试验法优选最佳工艺并
进行验证，检测泡腾颗粒的质量控制指标，为工业生
产提供理论依据。
1 材料
1． 1 药材
赶黄草，采自四川古蔺县观文乡，由四川农业大
学范巧佳副教授鉴定为正品。
1． 2 主要试剂
芦丁对照品，成都思科华生物技术有限公司生
产;碳酸氢钠(批号为 120923)、柠檬酸(批号为
120712)、可溶性淀粉(批号为 120614)、糊精(批号为
120602)、亚硝酸钠(批号为 120705)、硝酸铝(批号为
120806)、氢氧化钠(批号为 120915)，均为青岛精科
仪器试剂有限公司生产。
1． 3 主要仪器
紫外可见分光光度计(型号为 UV －2000)，尤尼
柯上海仪器有限公司生产;旋转蒸发仪(型号为 WFZ
ＲE － 2000B)，上海亚荣生化仪器厂生产;电子天平
(型号为 ESJ200 － 4A)，上海精密仪器有限公司生
产;电热鼓风干燥箱(型号为 101A － 4)，上海实验仪
器厂有限公司生产;蛇形脂肪抽出器、电热套
(250 mL)，青岛精科仪器试剂有限公司生产。
2 方法
2． 1 赶黄草浸膏粉的制备
将赶黄草烘干后粉碎，以 70%乙醇回流提取 2
次，第 1 次用 8 倍量溶剂提取 2 h，第 2 次用 6 倍量溶
剂提取 1 h，弃去药渣，合并所得滤液，回收溶剂后于
80 ℃减压干燥，得干浸膏后研磨成赶黄草浸膏粉［5］。
2． 2 泡腾颗粒的制备工艺
对药物进行适当前处理后，经混合制粒、干燥、整
粒、包装、质量检查和分剂量即得泡腾颗粒。这与普
通颗粒剂的制备工艺相似，但在温度、湿度等方面的
要求更为严格，一般要求相对湿度为 20% ～ 25%，温
度为 15 ～ 25 ℃。
2． 3 泡腾颗粒的性能检测
2． 3． 1 外观 判断标准:颗粒松散，自由流动，无可
见硬块，吸附均匀，基本无粉尘为合格［6］。
2． 3． 2 粒度 采用双筛分法［6］检测粒度。取供试
品 2 ～ 5 g，称重后置于规定药筛中，保持水平状态过
筛，左右往返，边筛动边拍打(3 min)，收集不能通过
1 号筛和能通过 5 号筛的颗粒及粉末，称重，计算粒
度。计算公式:粒度 =过筛后的颗粒粉末总重量 /供
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试品总重量 × 100%。
2． 3． 3 水分(干燥失重) 采用烘干法［6］检测水分。
取供试品 2 ～ 5 g，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，
厚度不超过 5 mm，疏松样品不超过 10 mm，精密称
定，打开瓶盖于 100 ～ 105 ℃干燥 5 h;盖好瓶盖，移至
干燥器中，冷却 30 min;精密称定，再于 100 ～ 105 ℃
干燥 1 h;冷却，称重，至连续 2 次称重差异不超过
5 mg为止。根据减失重量，计算供试品的百分含水
量。计算公式:百分含水量 =(供试品重量 －干燥的
供试品重量)/供试品重量 × 100%。
2． 3． 4 溶出时间 用电子天平称取泡腾颗粒 2． 00 g
置于盛有 200 mL 水的烧杯中溶解，水温为 15 ～
25 ℃，记录产生气体而呈泡腾状、完全分散或溶解在
水中的时间［6］。
2． 3． 5 有效成分含量 1)配制芦丁标准液。称量
芦丁(120 ℃干燥至恒重)13． 0 mg，60%乙醇溶解，
定容至 100 mL容量瓶中，摇匀备用［7］。
2)绘制标准曲线。取芦丁标准液 0，1． 25，2． 50，
5． 00，7． 50，10． 00 mL 于 6 支 25 mL 容量瓶中，加入
60%乙醇至总体积为 12． 50 mL，再加入 0． 75 mL 5%
NaNO2 溶液，摇匀，放置 6 min;加入 0． 75 mL 10%
Al(NO3)3 溶液，摇匀，放置 6 min;用 10． 0 mL
1． 0 mol /L NaOH 溶液稀释并定容，摇匀，放置
15 min;第 1 瓶作为空白对照，在 510 nm处测定吸光
度值，绘图得线性回归方程［7］。
3)准确性试验。进行精密度试验、重复性试验、
加样回收率测定试验，检验标准曲线的准确性。
4)测定供试品有效成分含量。称取供试品
0． 20 g，用 60% 乙醇溶解，定容至 50 mL 容量瓶
中［7］。移取供试品溶液 2． 5 mL 倒入 25 mL 容量瓶
中，显色后在 510 nm处测定吸光度值，计算供试品总
黄酮含量。
2． 4 正交试验优选
根据 L9(3
3)正交表进行试验［8］，应用综合平衡
法分析试验结果，以黄酮类成分含量及泡腾颗粒的溶
出时间作为评定标准，综合考察酸碱比(A)、糊精淀粉
比(B)及聚乙烯吡咯烷酮是否添加或包合(C)3 个因
素，进行工艺优选。正交试验的因素与水平见表 1。
表 1 正交试验的因素与水平
水平
因素
A B C
1 1∶0． 875 2∶1 包合
2 1∶1 2∶2 不包合
3 1∶1． 125 2∶3 不添加
2． 5 正交验证试验
按照已经确定的最佳制备工艺对指标进行评定，
检测制得的赶黄草保肝泡腾颗粒中黄酮类有效成分
含量及泡腾颗粒的溶出时间。
2． 6 质量控制
按照现有的国家质量检测标准，对制备得到的泡
腾颗粒的性状、粒度、水分、溶出时间、有效成分含量
状况进行质量检测。
3 结果与分析
3． 1 标准方程及线性回归曲线的建立
以吸光度值(Y)对标准溶液浓度(X)作图建立
回归曲线，得到的回归方程为:Y = － 0． 002 9 +
12． 193X，r = 0． 999 4，在 0． 005 ～ 0． 055 g /L浓度范围
内，有良好的线性关系。
精密度试验所测样品中总黄酮含量为 112． 544，
112． 339，112． 749，112． 544，113． 159 mg /g，相对标准
偏差(ＲSD)为 0． 27%。
测定试验样品的加样回收率，平均回收率为
99． 4%，ＲSD为 0． 78%，见表 2。
表 2 加样回收率试验结果(n = 6)
供试品溶液总
黄酮含量 /mg
加入芦丁
含量 /mg
测定量 /
mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
ＲSD /
%
0． 451 0． 260 0． 708 98． 9
0． 451 0． 260 0． 707 98． 5
0． 451 0． 325 0． 775 99． 7 99． 4 0． 78
0． 451 0． 325 0． 778 100． 6
0． 451 0． 390 0． 840 99． 9
0． 451 0． 390 0． 837 99． 0
重复性试验所测样品中总黄酮含量为 114． 184 ，
113． 364 ，111． 929 ，112． 339，112． 954 mg /g，ＲSD 为
0． 78%。
3． 2 正交试验结果
对 1 ～ 9 号泡腾颗粒中黄酮类成分的含量进行检
测，结果显示差异不明显。检测泡腾颗粒的溶出时
间，统计试验结果，应用正交法分析，并进行重复
试验。
极差分析正交试验结果显示，较优制备工艺为
A2B2C3，即酸碱比 1∶1，糊精淀粉比 2∶2，不添加包合材
料。溶出时间的影响因素大小为:酸碱比 ＞聚乙烯吡
咯烷酮是否添加或包合 ＞糊精淀粉比。正交试验结
果见表 3。
方差分析结果表明，酸碱比为主要影响因素，差
异显著 (P ＜ 0． 05)，酸碱比为 1∶1 和 1∶1． 125 时对溶
出时间的影响没有显著差异，结合生产适应性，确定
最佳工艺方案为 A2B3C3，即酸碱比为 1∶1，糊精淀粉
比 2∶3，不添加包合材料，方差分析结果见表 4。
3． 3 正交验证试验结果
按照已经确定的较优制备工艺制备泡腾颗粒
3 份，测量 3 份泡腾颗粒的有效成分含量(以芦丁计)
761《黑龙江畜牧兽医》科技版
表 3 正交试验结果
试验号
因素
A B C
溶出时
间处理 1 /s
溶出时间
处理 2 /s
合计 / s
1 1 1 1 178 158 336
2 1 2 2 211 43 254
3 1 3 3 56 50 106
4 2 1 2 91 43 134
5 2 2 3 27 18 45
6 2 3 1 19 111 130
7 3 1 3 62 14 76
8 3 2 1 45 50 95
9 3 3 2 83 31 114
K1 696 546 561
K2 309 394 502
K3 285 350 227
Ｒ 411 196 334
表 4 方差分析结果
变异来源 离差平方和 自由度 均方 F F(0． 05) F(0． 01) P
A 17 737． 00 2 8 868． 50 4． 21 4． 10 7． 56 ＜ 0． 05
B 3 525． 33 2 1 762． 67 0． 84 4． 10 7． 56
C 10 592． 33 2 5 296． 17 2． 55 4． 10 7． 56
单位组 3 584． 22 1 3 584． 22 1． 70 4． 96 10． 04
模型误差 2 358． 33 2 1 179． 17 0． 56
试验误差 18 686． 78 8 2 335． 85
合并误差 21 045． 11 10 2 104． 51
和溶出时间。3 份样品中黄酮含量分别为 112． 75，
113． 36，113． 16 mg /g，相对标准偏差为 0． 27%;溶出
时间分别为 24． 7，23． 8，24． 0 s，相对标准偏差为
1． 8%，见表 5。最终确定的赶黄草保肝泡腾颗粒配
方见表 6。
表 5 3 批样品验证试验结果
编号
供试品
质量 / g
总黄酮 溶出时间
含量 /(mg·g － 1) ＲSD /% 时间 / s ＲSD /%
1 10． 0 112． 75 24． 7
2 10． 0 113． 36 0． 27 23． 8 1． 8
3 10． 0 113． 16 24． 0
表 6 配方组成
成分 重量 /g 成分 重量 /g
赶黄草浸膏粉 400 糊精 160
柠檬酸 100 淀粉 240
碳酸氢钠 100 90%乙醇 适量
制成颗粒 1 000
3． 4 泡腾颗粒的质量检测(结果见表 7)
由表 7 可知，各项指标均符合国家标准。
4 讨论
表 7 泡腾颗粒质量检测结果
项目 指标要求 测定值
外观
颗粒松散、均
匀、无粉尘
颗粒呈棕色、松散、
均匀、无粉尘
有效成分含量 /(mg·g － 1) ≥100 112． 954
粒度 /% ≤8 6． 08
水分 /% ≤6 1． 15
溶出时间 / s ≤300 45． 7
肝苏颗粒以赶黄草为主药，对各类肝炎疗效显
著，降酶退黄快、滴度下降快、症状改善快、食欲增进
快、精神恢复快，临床上治疗急性肝炎的治愈好转率
为 93． 65%［9 － 10］。赶黄草水提取物能抑制血清谷草
转氨酶、谷丙转氨酶等酶的活性［11］。没食子酸和槲
皮素为已知的赶黄草保肝作用的主要有效成
分［12 － 13］。没食子酸可水解鞣质，有抗病毒作用［14］;
槲皮素有清除自由基、抗氧化、抗乙肝病毒、抗肝纤维
化等药理作用 ［15 － 16］。
水、乙酸乙脂、乙醇、甲醇等常作为黄酮类化合物
的提取溶剂，但不同原料或成分提取效果差别很
大［17］。综合考虑宜用乙醇提取，既得到较完全的有
效成分，且杂质含量相对较少，又可以满足药物制剂
要求。
泡腾颗粒有产气、膨胀、润湿和毛细管等作用，酸
碱崩解剂遇水快速作用，产生大量二氧化碳，帮助颗
粒润湿瓦解分散。为避免酸碱提前反应，失去泡腾效
果，需包合碱性泡腾剂。不包合药物泡腾效果更好，
溶出更迅速，原因可能是干燥浸膏粉的含水量极少，
各辅料均是干燥粉末，干燥的酸碱接触不会提前反
应。固定辅料总量，选择适宜比例设计正交试验，结
果酸碱比为 1∶1，糊精淀粉比为 2∶3，不包合碱性崩解
剂时药品溶出效果最好。
综合分析，按照最终优选配方制备出赶黄草保肝
泡腾颗粒，质量稳定可控，对大批量工业生产有一定
的参考价值。
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收稿日期:2014-05-12;修回日期:2014-10-11
基金项目:广东省医学科研基金项目(B2012179)
作者简介:张锦红(1978 －)，女，高级实验师，硕士，研究方向
为实验动物学，gdpuzjh@ 163． com．
高脂高糖联合氧化剂 tBHP 诱导胰岛素抵抗
2 型糖尿病模型的建立与稳定性观察
张锦红1，曾昭智1，夏 恒2
(1．广东药学院 实验动物中心，广州 510006;2．广东药学院 第一附属医院，广州 510080)
中图分类号:S856． 9 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2014)12 － 0169 － 03
关键词:2 型糖尿病;胰岛素抵抗;动物模型;叔丁基过氧化氢(tBHP);高脂高糖;稳定性
摘 要:为了建立高效稳定的胰岛素抵抗 2 型糖尿病(T2DM)模型并观察该模型的稳定性，试验以高
脂高糖联合氧化剂叔丁基过氧化氢(tBHP)0． 005 mL /g 诱导建立胰岛素抵抗 T2DM模型，测定 SD大
鼠不同时间点的体重、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(CHO)、胰岛素(FINS)、胰岛素敏
感指数(ISI)，将 24 h FBG≥10． 0 mmol /L及 ISI≤正常动物平均值的大鼠定为 T2DM模型大鼠;然后
连续 3 d给 T2DM模型大鼠灌胃盐酸二甲双胍片 75 mg /kg，研究该模型的有效性。结果表明:4 周后，
与对照组、双高组相比，tBHP 组大鼠体重、FBG、TG、CHO、FINS、ISI 均差异显著(P ＜ 0． 05);该 T2DM
模型在 4 周内非空腹血糖(NFBG)水平较高;盐酸二甲双胍片能降低该 T2DM模型的 NFBG。说明建
立的胰岛素抵抗 T2DM模型具有易行、稳定的特点。
根据《中国 2 型糖尿病防治指南》(2010 年版)
发布的我国糖尿病流行特点，患病人群以 2 型糖尿病
(T2DM)为主，占 90%以上。T2DM 及其并发症的病
因复杂，发病机制尚未完全阐明，预防和治疗仍不理
想，因此建立较理想的动物模型研究该病及其并发症
的发病机制和治疗具有重要意义。研究发现，胰岛素
抵抗(IＲ)与 T2DM的发生密切相关，T2DM 的糖代谢
紊乱产生糖毒性的根源为脂代谢异常，甚至将 T2DM
称为“糖脂病”［1］。胰岛素抵抗是 T2DM 发病的主要
特点之一，同时也是高血压、冠心病等心脑血管疾病
的共同发病基础，胰岛素抵抗被定义为胰岛素靶组织
对胰岛素反应能力的缺陷。近年来有关于此造模方
法的报道［2］，但未见此种模型稳定性的研究报道。
为此，广东药学院实验动物中心动物模型研发小组从
2012 年 6 月份—2013 年 12 月份对胰岛素抵抗的
T2DM模型进行了研究，并观察了该模型的稳定性，
现将结果报道如下。
1 材料
1． 1 试验动物
SPF 级 8 周龄 SD 大鼠 24 只，雄性，体重为
(200 ± 10)g，由中山大学实验动物中心提供，实验动
物质量合格证号为 4408501465，动物试验证号为
00062336，饲养在广东药学院实验动物中心 SPF级动
物房。
1． 2 药品与主要试剂
链脲佐菌素、叔丁基过氧化氢(tBHP)，Sigma 公
司生产;盐酸二甲双胍片(批号为 130352)，北京京丰
961《黑龙江畜牧兽医》科技版
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2014.1451