全 文 :2016年 第 15期 广 东 化 工
第 43卷 总第 329期 www.gdchem.com · 29 ·
赶黄草中槲皮素的提取工艺研究
柯发敏,余昕,侯杰荣,刘剑,李菲菲
(西南医科大学,四川 泸州 646000)
[摘 要]目的:优选赶黄草中槲皮素的提取工艺。方法:分别用回流提取法、超声提取法和冷浸法,提取赶黄草中的槲皮素。回流法采用单
因素试验分别考察回流时间、乙醇浓度对提取率的影响;超声提取法采用单因素试验分别考察超声时间、乙醇浓度对提取率的影响;冷浸法考
察乙醇浓度对提取率的影响;以槲皮素提取率为指标,提取率越高,提取工艺效果越好;用紫外分光光度法对不同提取工艺中槲皮素的含量进
行测定。结果:超声法最佳提取工艺为:80 %的乙醇超声提取 30 min,回流法最佳提取工艺为:80 %的乙醇回流提取 4 h;冷浸法最佳提取工艺
为:80 %的乙醇浸渍 36 h。结论:回流法提取赶黄草中槲皮素的提取率最高。
[关键词]赶黄草;槲皮素;提取工艺
[中图分类号]TQ [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2016)15-0029-02
Study on Extraction Methods of Quercetin Glycoside from Penthorum chinense
Pursh
Ke Famin, Yu Xin, Hou Jierong, Liu Jian, Li Feifei
(Southwest Medical University, Luzhou 646000, China)
Abstract: Objective The research aimed to optimize the extraction process of quercetin glycoside from Penthorum chinense Pursh. Method Ultraviolet
(UV) spectrophotometry was used, with extraction amount of quercetin glycoside as index, Reflux extraction method, ultrasonic extraction method and
cold-maceration were used in the extraction of quercetin glycoside in penthorum chinense pursh. The effect of reflux time and ethanol concentration was surveyed by
single factor test in reflux method method. The effect of ultrasonic time and ethanol concentration were surveyed by single factor test in ultrasonic extraction method.
The effect of ethanol concentration was surveyed by single factor test in cold-maceration. Result The optimal extraction conditions by ultrasonic extraction method
were ethanol (80 %) ultrasonic extraetied for 30 minutes. The optimal extraction condition by reflux extraction metlled were follow as: ethanol(80 %), extraction of 4
hours. The optimal extraction condition by cold-maceration were follow as: ethanol(80 %), extraction of 36 hours. Conclusion The best extraction process is reflux
method.
Keywords: Penthorum chinense Pursh;quercetin glycoside;extraction process
赶黄草为虎耳草科扯根菜属植物扯根菜 Penthorum chinense
Pursh 的干燥地上部分,为苗族民间草药,主要分布于海拔 1000 m
左右的乌蒙山区。赶黄草是四川省泸州市古蔺县地道药材,民间
以其全草入药,当地农民更是素有种植药材的传统,以前人们大
多把赶黄草当成了生活中必不可少的“保健品”—暑热上火,泡
赶黄草水喝;活血化瘀,泡赶黄草水喝。近年来逐渐驯化变为家
种,大量种植于四川省古蔺县境内[1]。其全草性平、味苦、微辛、
无毒,具有清热解毒、退黄化湿、活血散瘀、利水消肿之功效,
临床广泛用于治疗黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤,
以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等症[2]。赶黄草中的槲皮素具有
抗乙型肝炎病毒和保肝的作用[3]。
槲皮素作为一种自然界天然存在的黄酮类化合物,槲皮素广
泛存在于植物的花、叶、果实中,已知有100多种中草药中含有槲
皮素[4]。因其具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤[5]、抗氧化、保护心血管
[4]、免疫抑制和维持血糖等稳定强大的生物活性和广泛的药理作
用,对感染、心血管疾病、糖尿病、肿瘤和自身免疫病等疾病的
治疗及预防具有重要的临床意义[6]。体外研究还发现槲皮素具有
一定的抗人类免疫缺陷病毒(HIV)作用。槲皮素还具有逆转肿瘤多
药耐药(multi-drug resistance,MDR)效果,与其他抗癌药物联合应
用也可增强抗癌药的作用[7]。杨俊玲等[8]在研究槲皮素与人子宫内
膜癌耐药细胞株B-MD-C1/ADR的关系时发现,槲皮素可以增加阿
霉素在细胞内的分布。
本研究利用泸州古蔺有丰富的赶黄草中药材资源对赶黄草的
化学成分槲皮素的提取方法进行较深入的研究,本试验以槲皮素
提取率为指标,对不同的提取方法进行比较研究,以获得最佳提
取条件,为赶黄草的化学成分槲皮素生产提供一定的实验依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
1.1.1 仪器
B-220 恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂);AN1574 型电子分
析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);KQ3200B 型超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司);中药材粉碎机(浙江武义县屹立
工具有限公司);UV1700PC 型紫外可见分光光度计(上海凤凰光学
科仪有限公司)。
1.1.2 试剂
槲皮素标准品 ( 中国药品生物制品检定所,批号:
100081-200406);赶黄草(购于四川泸州荷花中药饮片公司),经四
川医科大学药学院生药学教研室税丕先教授鉴定虎耳草科扯根菜
属植物赶黄草 Penthorum chinense Pursh;水为超纯水(实验室自
制);其余试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 槲皮素的提取
1.2.1.1 回流提取
分别精密称取约 0.3 g 赶黄草粉末 9 份于 50 mL 锥形瓶中,
分别加入 60 %、70 %、80 %乙醇 15 mL,称重,分别按 2 h、3 h、
4 h 的条件进行回流提取,放冷至室温,分别用提取液补足减失的
重量,过滤,弃去初滤液,取 0.4 mL 续滤液于 10 mL 容量瓶中,
加入 95 %乙醇定容至刻度,即得供试品溶液。
1.2.1.2 超声法
分别精密称取约 0.3 g 赶黄草粉末 9 份于 50 mL 锥形瓶中,
分别加入 60 %、70 %、80 %乙醇 15 mL,称重,分别按 10 min、
20 min、30 min 的条件进行超声提取,超声功率为 120 W,分别
用提取液补足减失的重量,过滤,弃去初滤液,取 0.4 mL 于续滤
液 10 mL 容量瓶中,加入 95 %乙醇定容至刻度,即得供试品溶液。
1.2.1.3 冷浸法
分别精密称取约 0.3 g 赶黄草粉末 3 份于 50 mL 锥形瓶中,
分别加入 60 %、70 %、80 %乙醇 15 mL 冷浸 12 h,24 h,36 h,
分别用提取液补足减失的重量,过滤,弃去初滤液,取 0.4 mL 续
滤液于 10 mL 容量瓶中,加入 95 %乙醇定容至刻度,即得供试品
溶液。
1.2.2 槲皮素的含量测定
1.2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取适量干燥至恒重的槲皮素对照品,用 95 %乙醇配成
浓度为 0.543 mg/mL 的槲皮素对照品溶液。
1.2.2.2 测定波长的选择
精密吸取槲皮素对照品溶液 0.1 mL 于 10 mL 容量瓶中,用
95 %乙醇定容至刻度,以 95 %乙醇作为空白,在 200~800 nm 处
对槲皮素标准溶液进行扫描。结果显示槲皮素在波长 376 nm 处有
最大吸收,因此本次实验研究选择 376 nm 波长为测定波长。
[收稿日期] 2016-05-21
[基金项目] 泸州市科技局基金项目(2012-135)
[作者简介] 柯发敏(1983-),女,四川雅安人,硕士研究生,主要从事药物分析的教学与科研工作。
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1.2.2.2 标准曲线的绘制
取 54.3 μg/mL 的槲皮素标准溶液 0.6、0.8、1.1、1.4、1.7、
2.0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中,用 95 %乙醇稀释到刻度,作
为测定溶液。以用 95 %乙醇作为空白溶液,在波长 376 nm 处测
定其吸光度,绘制标准曲线,计算回归方程。
1.2.2.3 样品含量测定
取样品溶液,以 95 %乙醇为空白,在 376 nm 处测定其吸光
度,计算样品溶液中槲皮素的含量。
2 结果与分析
2.1 线性关系考察
以槲皮素标准品浓度(μg/mL)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,
得回归方程 y=0.0712x-0.0399,r=0.9992。结果表明,槲皮素在
3.26~10.86 μg/mL 范围内具有良好的线性关系。
2.2 回流提取法试验
将回流提取法制得的 9 份样品,分别置于石英比色皿中,以
95 %乙醇为空白,于最大吸收波长 376 nm 处测定吸光度值,计
算样品中槲皮素的含量,结果见表 1。
表 1 回流提取法试验结果
Tab.1 Test result of reflux extraction
乙醇浓度 回流时间
2 h 3 h 4 h
60 %乙醇 0.93 0.99 1.0
70 %乙醇 1.05 1.08 1.09
80 %乙醇 1.12 1.14 1.15
2.3 超声提取法试验
将超声提取法制得的 9 份样品,分别置于石英比色皿中,以
95 %乙醇为空白,于最大吸收波长 376 nm 处测定吸光度值,计
算样品中槲皮素的含量,结果见表 2。
表 2 超声提取法试验结果
Tab.2 Test result of ultrasonic extraction
乙醇浓度 超声时间
10 min 20 min 30 min
60 %乙醇 0.86 0.89 0.9
70 %乙醇 0.93 0.96 0.98
80 %乙醇 0.98 1.02 1.04
2.4 冷浸法试验
将冷浸提取法制得的 3 份样品,分别置于石英比色皿中,以
95 %乙醇为空白,于最大吸收波长 376 nm 处测定吸光度值,计
算样品中槲皮素的含量,结果见表 3。
表 3 冷浸提取法试验结果
Tab.3 Test result of cold-maceration
乙醇浓度 冷浸时间
12 h 24 h 36 h
60 %乙醇 0.52 0.56 0.58
70 %乙醇 0.6 0.61 0.62
80 %乙醇 0.65 0.67 0.69
2.5 回流法单因素试验
2.5.1 回流时间对槲皮素提取率的影响
由表 1 可知,随着回流提取的时间的增加赶黄草粉末中槲皮
素的提取率逐渐增加,回流 3 h 和回流 4 h 对槲皮素的提取率变化
比较小,考虑到生产周期和设备的利用率,确定回流时间为 3 h
为宜。
2.5.2 乙醇浓度对槲皮素提取率的影响
由表 1 可知,随着回流乙醇浓度的增加赶黄草粉末中槲皮素
的提取率逐渐增加,确定回流乙醇的浓度为 80 %。
2.6 超声法单因素试验
2.6.1 超声时间对槲皮素提取率的影响
由表 2 可知,随着超声提取的时间的增加赶黄草粉末中槲皮
素的提取率逐渐增加,所以确定超声时间为 30 min 为宜。
2.6.2 乙醇浓度对槲皮素提取率的影响
由表 2 可知,随着乙醇浓度的增加赶黄草粉末中槲皮素的提
取率逐渐增加,确定超声提取法的乙醇的浓度为 80 %。
2.7 冷浸法单因素试验
2.7.1 乙醇浓度对槲皮素提取率的影响
由表 3 可知,随着乙醇浓度的增加赶黄草粉末中槲皮素的提
取率逐渐增加,因此确定提取液乙醇的浓度为 80 %。
2.7.2 冷浸时间对槲皮素提取率的影响
由表 3 可知,随着冷浸时间的增加赶黄草粉末中槲皮素的提
取率逐渐增加,所以确定冷浸时间为 36 h 为宜。
2.8 超声法、回流法和冷浸法最佳工艺的比较
由表 1、表 2 和表 3 可知,采用回流法提取赶黄草中槲皮素
的提取率最高,其中采用 80 %的乙醇回流 4 h,槲皮素的提取率
最高为 1.15 %;采用超声法提取赶黄草中槲皮素的提取率其次,
其中采用 80 %的乙醇超声提取 30 min,槲皮素的提取率最高为
1.04 %;采用冷浸法提取赶黄草中槲皮素的提取率较低,其中采
用 80 %的乙醇冷浸提取 36 h,槲皮素的提取率最高为 0.69 %。本
次试验结果表明采用 80%的乙醇回流 4 h,槲皮素的提取率最高为
1.15 %。
3 讨论
3.1 测得方法的选择
赶黄草中槲皮素的含量测定方法的原理是利用槲皮素在376
nm处产生最大紫外吸收。因此,本次研究选择紫外分光光度法作
为测定槲皮素的方法,该法具有样品处理简单、分析速度快、分
析结果准确等优点。
3.2 最佳提取工艺的选择
回流法的提取率与超声法提取率相比稍高,回流法加热,根
据槲皮素的溶解特性,温度高有利于槲皮素的溶出。超声法虽然
温度不高,但是超声具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用,对植物
药材的细胞有破坏现象,使其溶媒渗透到药材的细胞中,以便使
药材中的化学成分溶于溶媒之中[9]。冷浸法温度为室温,不能破
换细胞壁结构,并且需要的时间长,提取率比较低。回流法不仅
提取效率最高,操作也比较方便,故本次研究最终选择 80 %乙醇
回流 4 h 为赶黄草中槲皮素的最佳提取方法。
参考文献
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(本文文献格式:柯发敏,余昕,侯杰荣,等.赶黄草中槲皮素的
提取工艺研究[J].广东化工,2016,43(15):29-30)