全 文 ：·论　著·
不同产地葫芦巴醇溶性化学成分的高效
液相色谱 -电喷雾质谱分析
安福丽 ,张仲 ,陈贵银 ,郭喜军 ,陈迎春 ,相聪坤
基金项目:河北省中医药管理局资助项目(No:2007058)
作者单位:050011　石家庄市 ,河北省中医院(安福丽 、陈贵银 、郭
喜军 、陈迎春 、相聪坤);061001　河北省沧州市传染病医院(张仲)
　　【摘　要】　目的　采用液质联用技术(LC-MS/MS)对不同产地中药葫芦巴中化学成分进行定性分析。方法　运
用 DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱 ,乙腈 -冰乙酸 -水梯度洗脱;质谱采用 ESI离子源 ,正离子与负离
子模式下采集数据。结果　通过分析 Q-TOFMS正 、负离子质谱信息共检测到 23个色谱峰 ,并结合对照品与相关文献
数据其中鉴定出 11个化合物结构 ,主要结构类型为黄酮类 、皂苷类 、生物碱类化合物。结论　经高效液相色谱分离 、
质谱测定相对分子质量及相关文献数据信息检索可快速分析鉴定中药中的主要化学成分 ,为中药效应物质的阐明提
供一定依据 , 为中药成分的分离鉴定提供快速准确的分析方法。
【关键词】　葫芦巴;化学成分;HPC-MS分析
【中图分类号】　R 284.2　【文献标识码】　A　【文章编号】　1674-3296(2010)10-0042-04
AnalysisofchemicalcomponentsofTrigonelafoenum-graecumLindiferentareasbyhighperformanceliquidchro-
matography-electrosprayionization-massspectrometry　ANFu-li＊ , ZHANGZhong, CHENGui-yin, etal.＊ChineseMedi-
cineHospitalofHebeiProvince, Shijiazhuang050011, China
【Abstract】　Objective　ToanalyzeandidentifythechemicalcomponentsofTrigonelafoenum-graecumLofdiferent
producingareabyLC-MS.Methods　TheanalysiswasperformedonanDiamonsilC18(250mm×4.6mm, 5μm)column.The
mobilephaseswereacetonitrileandHAcandwateringradientelution.ESIsourcewasusedanddatawereacquiredinpositive
andnegativemode.Results　Thestructuresof11 compoundsofTrigonelafoenum-graecumLwereidentifiedbydirectcom-
parisonwithMSofQ-TOF, thestandardsubstancesandthedataoftheliteratures.Furthermore, thetypesofthecompounds
wereflavones, saponinsandalkaloidscompounds.Conclusion　Itisarapidandaccuratemethodthatthechemicalcomposi-
tionsoftraditionalChinesemedicinecanbeidentifiedintermsoftheseparationofhighperformanceliquidchromatography, the
accuratemolecularweightsmeasuredbyMSandotherinformation, whichcanprovideamethodforactivecomponentsresearch
forTCMandTCMformulae.
【Keywords】　Trigonelafoenum-graecumL;Chemicalcomponents;HPLC-MSanalysis
　　中药葫芦巴(Trigonelafoenum-graecumL)又名苦豆 、芦
巴 、胡巴 、季豆 、小木夏 、香豆子 , 为豆科蝶形花亚科一年生草本
植物。目前我国不少省区均有栽培或野生资源分布 ,国内葫芦
巴的适生地区是宁夏 、甘肃 、青海 、新疆 、内蒙古等省区 [ 1, 2] 。
我国历代编修的本草著作中均收载有葫芦巴条目 , 其入
肝 、肾二经 ,味苦 、性温 , 无毒 , 具有补肾阳 、祛寒湿之功效。葫
芦巴属于常用中药材之一 ,目前常将其作为补肾药 、祛(肠)风
药和健胃药使用 , 在印度 、埃及 、中东和南非普遍种植。该植物
的种子已被用作许多疾病的传统治疗剂 ,如肠疾病 、痛风 、疗伤
及炎症 、高血脂和糖尿病等。 现代研究表明 [ 3] , 葫芦巴中主要
成分含有皂苷 、黄酮 、生物碱 、香豆素以及氨基酸 、多糖 、酶等。
为进一步阐明葫芦巴的效应物质基础 ,本实验采用高效液相色
谱 /电喷雾电离 /质谱 /质谱方法对不同产地葫芦巴中主要化学
成分进行分析鉴定 , 为其有效成分研究提供参考。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器　葫芦巴药材购于河北省药材公司 , 产地分
别为:河北 、云南 、甘肃 、河南。经鉴定符合 2005版 《中华人民
共和国药典》标准;HPLC级乙腈(Merck, Germany);HPLC级乙
酸(Tedia, USA);Millipore超纯水。 Waters2695高效液相色谱
仪(美国 Waters公司生产), Aliance检测器(美国安捷伦公司生
产), 自动进样器;Waters2695色谱工作站(美国 Waters公司生
产), TOF/MS(英国 Micromass生产), Masslynx4.0软件(美国
Waters公司生产);Drict2Q5超纯水机(Milipore公司生产), Sar-
torisBP211D型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司生产)。
1.2　实验方法
1.2.1　样品制备方法:取不同产地葫芦巴药材粉碎 , 用 70%
乙醇回流提取 2次 ,每次 1h。合并 2次提取液 ,经减压浓缩 、喷
雾干燥 、粉碎 ,过筛孔内径(180.0±7.6)μm80目 ,即得葫芦巴
提取物 ,称取一定量葫芦巴提取物用 50%甲醇充分溶解后过
滤 、定容 、过 0.22微孔滤膜 ,供液质联用技术(LC-MS)分析。
1.2.2　分析条件:色谱分析条件:Diamonsil(钻石)C18色谱柱
(250mm×4.6mm, 5μm), 流动相:A相为 0.5%(体积分数)乙
酸水溶液 , B相为乙腈。梯度洗脱程序:0 ～ 8min:5% ～ 12%B,
8 ～ 12min:13% ～ 19%B, 12 ～ 17min:20%B, 27 ～ 32min:20% ～
40%B, 32 ～ 42min:41% ～ 50%B。流速:0.8ml/min;柱温:
35℃;检测波长范围:200 ～ 400nm;进样量:20μl。质谱检测条
件:ESI源 ,扫描方式:ESI+、ESI-模式 , 毛细管电压:114kV和
113kV,锥孔电压:40V和 23V,离子源温度:100℃, 脱溶剂气温
·42· 临床合理用药 2010年 5月第 3卷第 10期　ChinJofClinicalRationalDrugUse, May2010, Vol.3No.10DOI :10.15887/j.cnki.13-1389/r.2010.10.009
度:250℃,锥孔气流量:50L/h, 脱溶剂气流量:600L/h, 离子能
量:1V, 每 0.2秒采集 1次图谱;准确质量测定采用亮氨酸 -脑
啡肽 (1eucine-enkephalin, ESI+:m/z 556.2771, ESI-:m/z
555.2615)溶液为锁定质量溶液。质量扫描范围:50 ～ 1000m/z。
2　结果与分析
2.1　LC-QTOF/MS成分鉴定　按照 1.2.2项下 LC-MS分析条
件 , 对 4个不同产地葫芦巴样品供试液进行分析 , 测得正 、负总
离子流图(TIC)。不同产地葫芦巴 70%醇提取物中其主要成
分基本一致 , 无明显差异 , 但其提取物得率存在较大差异 ,可能
由于其脂溶性成分的差异所致 ,有待深入研究。见图 1。
2.2　不同产地葫芦巴化学成分分析　通过对比葫芦巴样品 、
对照品化合物色谱图保留时间(tR)、总离子流图 、质谱碎片离
图 1　不同产地葫芦巴化学成分的正 、负总离子流图
注:A甘肃产葫芦巴;B河南产葫芦巴;C云南产葫芦巴;D河北产葫芦巴
子(m/z)以及紫外吸收特征(max)(图 2), 并结合相关参考文
献 [ 4 ～ 10]确定了其中 11个色谱峰 , 分别为葫芦巴碱 、芹菜素-
6, 8-二 C-β -D-葡萄糖苷 、芹菜素-6-C-β -D-葡萄糖-8-C-β -D-半乳
糖苷 、芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷 、芹菜素-6-
C-β-D-半乳糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷 、红蓼苷 、异红蓼素 、雅姆皂
苷元 、牡荆素 、五味子素 、葫芦巴皂苷见表 1。
3　讨　论
考察乙腈 -醋酸水 、乙腈 -甲酸水 、乙腈 -水 3种不同组
成流动相及不同浓度的酸水溶液 ,结果表明酸性水溶液利于成
分的分离 ,最终选择了乙腈 -0.5%乙酸水作为流动相系统。
结果表明 , 不同产地葫芦巴中醇溶性成分基本一致 , 在
ESI+和ESI-模式下共检测到 21个色谱峰 , 鉴定了其中 11个
·43·临床合理用药 2010年 5月第 3卷第 10期　ChinJofClinicalRationalDrugUse, May2010, Vol.3No.10
图 2　不同产地葫芦巴 HPLC-PDA色谱图
注:A甘肃产葫芦巴;B河南产葫芦巴;C云南产葫芦巴;D河北产葫芦巴
表 1　不同产地葫芦巴醇溶性化学成分分析结果　(ESI+, ESI-, m/z)
峰号 反应时间 样本A B C D
ES+, (m/z)
[ M+H] + 其他　　
ES+, (m/z)
[M-H] - 其他　　
UVλmax(nm) 化合物鉴定
1 2.728 + + + + 333 321, 319, 317 - 200 不明
2 3.399 + + + + 138 - 136 258 葫芦巴碱
3 10.768 + + + + 531 450, 311, 295, 285, 213, 182 529 431, 309, 291, 128 212 不明
4 12.442 + + + + 384 321, 252, 188, 146 382 329, 203, 116 212 不明
5 14.028 + + + + 259 241, 223, 172, 130 257 443, 321, 198, 140 212 不明
6 15.771 + + + + 313 295, 241, 166 311 353, 325, 293, 275, 257 208 不明
7 16.150 + + + + 595 577, 457, 422, 403, 295 593 521, 420, 258, 161, 117 214, 333 芹菜素-6, 8-二C-β-D-葡
萄糖苷
8 16.530 + + + + 595 577, 340, 283, 172 593 299, 234, 148, 122 220, 334 芹菜素-6-C-β-D-葡萄
糖-8-C-β-D-半乳糖苷
9 17.533 + + + + 565 547, 529, 290, 198, 121 563 387, 303, 198, 145 220, 334 芹菜素-6-C-β-D-葡萄
糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷
10 18.453 + + + + 565 547, 529, 453, 198 563 241, 198, 121 220, 3334芹菜素-6-C-β-D-半乳
糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷
11 19.020 + + + + 449 431 447 220, 348 红蓼苷
12 20.638 + + + + 449 - 447 327 220, 348 异红蓼素
13 21.932 + + + + 566, 553, 449, 287, 207 - 533, 447, 247, 130 207 不明
14 22.747 + + + + 535 517, 449 533 447 207 不明
15 24.109 + + + + 433 579 431 577 208 雅姆皂苷元
16 24.612 + + + + 433 415, 367, 313 431 311 214, 335 牡荆素
17 25.037 + + + + 433 415, 367, 313 431 529, 311, 250, 132 212, 335 五味子素
18 26.556 + + + + 463 724, 679, 535, 433, 302, 146 461 431, 300, 236 208 不明
19 28.282 + + + + 463 449, 357, 287, 174, 156 461 655, 447, 280, 217, 132 208 不明
20 32.474 + + + + 549 792, 397, 377, 317 547 224, 152 213 不明
21 33.389 + + + + 889 549, 453 - 905[ M+OH] -, 661, 634,
561, 452, 287
210 葫芦巴皂苷
化合物 , 主要分别属于黄酮类 、皂苷类 、生物碱类化合物。
现代研究表明 , 这几类成分均具有多种生理活性如降血糖
作用等 , 是葫芦巴中主要的活性成分类型。实验过程中发现不
同产地葫芦巴提取物得率存在较大差异 ,其中甘肃葫芦巴提取
物得率最高 , 可能由于其成分含量差异及其脂溶性成分(油
脂)含量的差异所致 , 化学物质与功效间的关联有待深入
研究。
本实验 LC-ESI-QTOF联用技术结合高分离效率的色谱及
高灵敏度和特异性质谱等优点 ,能够获得色谱峰准分子离子 ,
有助于化学成分分离与解析 ,是中药活性成分研究的有效分析
手段。 ESI-QTOF/MS分子离子扫描功能是结构解析的有利工
具 , 可为中药及方剂效应物质基础研究提供有力工具。
参考文献
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分离纯化及化学结构测定 [ J].中草药 , 2005, 36(6):805-808.
10　徐学民 ,王笳 ,杨红 ,等.胡芦巴中皂苷成分的研究Ⅰ .新皂苷 A及
其次生苷的分离纯化和化学结构测定 [ J] .中草药 , 2003, 34(8):
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(收稿日期:2010-03-15)
·临床诊疗·
小儿咳嗽变异性哮喘 76例临床分析
肖文秀
作者单位:523750　广东省东莞市黄江医院儿科
　　【关键词】　小儿;咳嗽;变异性哮喘
【中图分类号】　R 562.2+5　【文献标识码】　B　【文章编号】　1674-3296(2010)10-0045-01
　　儿童咳嗽变异性哮喘发病机制与典型哮喘的发病机制相
同 , 都是以持续气道炎性反应与气道高反应性为特点。它是由
多种细胞如嗜酸性粒细胞 、肥大细胞 、T淋巴细胞 、中性粒细胞
及其细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患 [ 1] , 但比典型哮喘
程度轻。 2004年 6月 -2009年 6月我院收治咳嗽变异性哮喘
(CVA)患儿 76例 , 现就其诊治情况分析如下。
1　资料与方法
1.1　临床资料　76例 CVA患儿男 44例 , 女 34例;年龄 1 ～ 3
岁 16例 , 4 ～ 6岁 35例 , 7 ～ 12岁 25例;病程 2个月 ～ 3年 ,平
均 10个月。其中 56例在求治过程中被误诊 ,分别误诊为反复
上呼吸道感染 16例 、支气管炎 12例 、支原体肺炎 10例 、过敏
性鼻炎 10例 、扁桃体炎 4例 、慢性咽炎 3例 、原发性肺结核 1
例。病程中曾有发热 18例。相关因素:一年四季均可发病 ,其
中冬春季发作为主 41例 、夏秋季发作为主 25例 , 春夏季 10
例;有明显发病诱因 66例 , 其中上呼道感染诱发 34例 , 剧烈活
动 、大哭或大笑后咳嗽加剧 21例 , 有个人过敏史 33例(湿疹
13例 、过敏性鼻炎 10例 、荨麻疹 7例 、药物过敏史 3例)。亲
属有过敏史或哮喘史 22例。临床表现:均无典型的哮喘发作 、
呼吸困难等表现 , 主要症状是持续性或反复发作性咳嗽 , 以夜
间发作性频咳或清晨剧咳为主 。部分患儿伴有少许白色稀痰 ,
喷嚏 , 咽部或喉部发痒 ,胸闷等症状。体检:有低 、中度发热 18
例 , 双肺呼吸音粗或深吸气时闻及哮鸣音者 16例 , 咽部充血 7
例 , 余查体未见明显异常。辅助检查:外周血象:WBC总数正
常 70例 , WBC总数轻度升高(<15×109)6例 , 嗜酸性粒细胞
计数升高 37例。影像学检查:所有病例均行 X线胸片检查 ,正
常 66例 , 表现为肺纹理增粗 10例。肺功能检查:≥5岁 51例
患儿用峰流速仪测量呼气峰流速(PEFR), 低于正常者 17例 ,
给吸入沙丁胺醇气雾剂后 PEFR均较前提高 >15%。
1.2　诊断标准　所有患者均根据全国儿科哮喘防治协作组所
订标准诊断 [ 2]:(1)持续咳嗽或反复发作 >1个月 ,常在夜间和
(或)清晨发作 , 运动后 、遇冷空气或嗅到特殊气味后加重 , 痰
少 , 临床无感染征象 ,或经较长时间抗生素治疗无效;(2)气管
扩张剂诊断性治疗可使咳嗽发作缓解(基本诊断条件);(3)有
个人或家庭过敏史 , 过敏原(变应原)检测阳性可作辅助诊断;
(4)除外其他原因引起的慢性咳嗽。
1.3　治疗方法　本组病例以吸入糖皮质激素治疗为主 ,根据
病情联合口服氨茶碱 、非那根 、舒喘灵 、酮替芬等综合治疗。 其
中 26例咳嗽较严重患者曾短期(一般 2 ～ 5d)应用醋酸泼尼松
和(或)β 2受体激动剂治疗。疗程为 1 ～ 6个月。
2　结　果
60例患儿经治疗 3 ～ 6d后症状控制 , 7 ～ 10d咳嗽症状完
全缓解 ,其中 16例停药后症状有反复 , 再次同样处理仍然有
效 , 总有效率为 100%。
3　讨　论
本组病例以咳嗽为主要临床表现 ,就诊前服用多种抗生素
治疗无效 , 用支气管扩张剂和抗过敏药物后短期内有明显效
果 , 支持 CVA的发病机制与典型哮喘发病机制相同的观点。
防止误诊误治的关键是要提高对 CVA的认识。 临床医师必须
掌握诊断要点 , 充分认识小儿慢性咳嗽 、反复呼吸道感染和哮
喘之间的关系。注意检查血常规 、X线胸片 、PPD皮试 、鼻窦摄
片等以排除其他引起慢性咳嗽的疾病 ,必要时还应进行变应原
检测。对于慢性咳嗽用抗生素治疗无效而反复发作或用支气
管扩张剂或糖皮质素治疗有效的患儿 ,排除了其他原因引起的
咳嗽 ,特别是有个人或家族过敏史者 , 应想到本病可能。 >5岁
患儿予肺功能检查 ,若正常可做支气管激发试验 , 它是目前最有
价值的诊断方法。 <5岁患儿疑 CVA时 ,可应用支气管扩张剂、
激素 、抗过敏治疗 ,治疗有效时对诊断有参考意义。
确诊为 CVA的患儿 , 其治疗原则及方法与典型支气管哮
喘相同 ,防止发展为典型哮喘。具体方法是:(1)以吸入性糖
皮质激素为首选治疗 ,选用丙酸氟替卡松 100 ～ 200μg/d,根据
病情酌情加用酮替芬或孟鲁司特和(或)氨茶碱等综合治疗 ,
如病情控制 3个月后减量 ,疗程 0.5 ～ 1年或更长;(2)对于咳
嗽较严重的或反复迁延的患儿 ,在吸入糖皮质激素的基础上加
用免疫调节剂如胸腺肽 、匹多莫德 、转移因子 、草分支杆菌
FU36注射液等以提高机体的抗病能力 , 以巩固疗效 , 减少反
复 , 效果较好。
参考文献
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2　沈晓明 ,王卫平.儿科学 [ M] .7版.北京:人民卫生出版社 , 2008.
(收稿日期:2010-02-27)
·45·临床合理用药 2010年 5月第 3卷第 10期　ChinJofClinicalRationalDrugUse, May2010, Vol.3No.10