全 文 ：［收稿日期］ 20121022(013)
［第一作者］ 宋明明，在读研究生，从事中药资源学研究，Tel:
15904244120，E-mail:mingming3639@ 126． com
［通讯作者］ * 王永奇，博士，特聘教授，从事天然活性物质的
研究，Tel:0411-87403834，E-mail:dalianwyq @
163． com
黄杞叶化学成分的定量分析
宋明明1，尚志春1，周辉2，付晓雪1，史丽颖1，唐玲1，于大永1，王永奇1*
(1. 大连大学药物研究所，辽宁 大连 116622;2. 广西钦州市农业机械学校，广西 钦州 535000)
［摘要］ 目的:测定黄杞叶不同提取物中主要化学成分的含量。方法:分别以芦丁、没食子酸和齐墩果酸为对照品，采用
分光光度法测定黄杞叶 95%乙醇提取物及水提物中总黄酮、总多酚以及总皂苷的含量。结果:黄杞叶 95%乙醇提取物中总黄
酮含量为 48. 01%、总多酚含量为 34. 01%、总皂苷含量为 20. 91%;黄杞叶水提物中总黄酮含量为 42. 04%、总多酚含量为
33. 25%、总皂苷含量为 17. 84%。结论:方法简便、准确、稳定性好、重复性好，可用于黄杞中三大类化学成分的含量测定。
［关键词］ 黄杞;黄酮;多酚;皂苷
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)21-0150-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013210150
Quantitative Analysis of Chemical Compositions in Leaves of
Engelhardtia roxburghiana
SONG Ming-ming1，SHANG Zhi-chun1，ZHOU Hui2，FU Xiao-xue1，
SHI Li-ying1，TANG Ling1，YU Da-yong1，WANG Yong-qi1*
(1. Institute of Materia Medica of Dalian University，Dalian 116622，China;
2. Agricultural Machinery Technology College of Qinzhou，Qinzhou 535000，China)
［Abstract］ Objective:To determine the quality of chemical compositions in the different extracts of
Engelhardtia roxburghiana leaves． Method:Ｒutin，gallic acid and oleanolic acid were used as the control
samples． Spectrophotometry was used to determine the content of total flavonoids，total polyphenol and total
saponins in the 95% alcohol extract and water extract of the leaves of E． roxburghiana． Ｒesult:The 95% alcohol
extract content of total flavonoids，total polyphenols and total saponins were 48. 01%，34. 01% and 20. 09%
respectively． The content of water extract was 42. 04%，33. 25% and 17. 84% respectively． Conclusion:This
method is simple，accurate and reliable，which could be used to determine the quality of the three major chemical
compositions in E． roxburghiana．
［Key words］ Engelhardtia roxburghiana;flavonoids;saponins;polyphenol
黄杞系胡桃科黄杞属植物，约 15 种，分布于亚
洲热带和亚热带地区，我国有 8 种，产西南部、南部
至东南部［1］，生于海拔 200 ～ 1 500 m的林中。其叶
为《中华本草》所收载［2］，具有清热止痛之功能，用
于治疗感冒发热、疝气腹痛［3］。作为甜茶，在广东、
广西一带广为使用。大量动物实验表明黄杞叶具有
降血糖、降血脂、抗凝血等作用［4］，但关于黄杞叶化
学成分定量分析的研究报道较少。本实验采用分光
光度法对黄杞叶 95%乙醇提取物及水提物中的黄
酮、多酚及皂苷类成分进行了定量分析，为深入研究
其化学成分和药理活性提供科学依据。
1 材料
Unico 7200 型可见分光光度计(尤尼柯上海仪
器有限公司) ，Laborata 4000 型旋转蒸发仪(德国
Heidolph 公司) ，BP210S(1 /10 万)型电子天平
(Sartorius公司) ，Jasco v-560 型紫外-可见分光光度
·051·
第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013
计(日本 Jasco 公司)。
黄杞叶于 2012 年 4 月采集于广西壮族自治区
钦州市那坡乡，经广西林科院研究员庞定轮鉴定为
黄杞 Engelhardtia leschen． ex Blume，标本存放于大
连大学生命科学与技术学院标本室，芦丁对照品
(东京化成工业株式会社，纯度 98%) ，没食子酸(中
国药品生物制品检定所，批号 120563-200412，纯度
99. 1%) ，齐墩果酸(中国药品生物制品检定所，批
号 110709-200304，纯度 ＞ 98%) ，其余试剂均为分析
纯，水为蒸馏水。
2 方法
2. 1 总黄酮的含量测定［5-6］
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重
的芦丁对照品 10 mg，置 50 mL量瓶中，加入甲醇溶
解并稀释到刻度，摇匀，得质量浓度为 0. 2 g·mL －1
的标准溶液，备用。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 分别精确称取黄杞叶
95%乙醇提取物及水提物的干浸膏 71. 35，71. 10
mg，置 100 mL 棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻
度，摇匀，得质量浓度为 0. 713 5，0. 711 0 g·L －1的供
试品溶液Ⅰ和Ⅱ，备用。
2. 1. 3 测定波长的选择 取黄酮对照品溶液、供试
品溶液各 0. 5 mL，置于具塞试管中，各加甲醇至
4. 0 mL，再分别加入质量分数为 5%的 NaNO2 溶液
0. 3 mL，摇匀，室温放置 6 min，再加 10% AlCl3 溶液
0. 3 mL，摇匀，室温放置 10 min，在 200 ～ 600 nm 波
长下扫描，空白溶液做参比，样品溶液在 400 nm 波
长处有强吸收。因此，总黄酮的检测波长为
400 nm。
2. 1. 4 线性关系考察 分别精确吸取 0，0. 2，0. 4，
0. 6，0. 8 和 1. 0 mL 芦丁对照品溶液，置具塞试管
中，按 2. 1. 3 项方法，自“各加甲醇至 4. 0 mL”起同
法操作，于 400 nm处测定吸光度，同时以空白试剂
做参比。以吸光度 A为纵坐标、浓度 C(g·L －1)为横
坐标绘制标准曲线，得回归方程为 A = 20. 345C +
0. 007(r = 0. 999 8) ，芦丁的线性范围为 8. 70 ～
43. 48 mg·L －1。
2. 1. 5 精密度试验 取 0. 4 mL 供试品溶液Ⅰ和
Ⅱ，按 2. 1. 3 中所述实验方法操作，测定吸光度，平
行测定 6 次，ＲSD 分别为 1. 26%，1. 44%，说明精密
度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 按样品测定方法操作，在
45 min内从起始时间开始每隔 5 min 测定同一供试
液的吸光度一次，ＲSD 1. 15%，表明吸收度在 45 min
内基本稳定。
2. 1. 7 样品中总黄酮的测定 精确吸取供试品溶
液Ⅰ和Ⅱ各 0. 4 mL 置具塞试管中，按 2. 1. 3 项方
法，自“各加甲醇至 4. 0 mL”起同法操作，于 400 nm
处测定吸光度，同时以空白试剂做参比，各平行测定
5 次，计算即得，结果见表 1，2。
表 1 黄杞叶 95%乙醇提取物中总黄酮含量测定
No． A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 620 48. 56
2 0. 627 49. 12
3 0. 611 47. 85 48. 01
4 0. 593 46. 42
5 0. 614 48. 09
表 2 黄杞叶水提物中总黄酮含量测定
No． A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 546 42. 85
2 0. 541 42. 45
3 0. 543 42. 61 42. 04
4 0. 552 43. 33
5 0. 553 43. 41
2. 1. 8 重复性试验 称取同一 95%乙醇提取物及
水提物各 6 份，按 2. 1. 2 项中所述实验方法操作，配
制供试品溶液Ⅰ和Ⅱ，精确量取 0. 4 mL 的供试品
溶液Ⅰ和Ⅱ置具塞试管中，按 2. 1. 3 中所述方法
进行操作并显色，在 400 nm 处测定吸光度，代入回
归方程计算乙醇提取物及水提物中总黄酮的含量，
ＲSD分别为 1. 62%，1. 86%，表示重复性良好。
2. 1. 9 加样回收率试验 精确吸取已知总黄酮含
量的供试品提取液Ⅰ，Ⅱ各 0. 2 mL 置具塞试管中，
分别加入 0. 2 g·L －1的芦丁标准溶液 0. 1 mL，余下
部分按 2. 1. 3 中所述方法进行操作，平行测定 6 次，
计算加样回收率，结果见表 3，4。
2. 2 总多酚的含量测定［7-8］
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重
的没食子酸对照品 7. 45 mg，置 100 mL 棕色量瓶
中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为 0. 074 5
g·L －1的对照品溶液，备用。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 分别精确称取黄杞叶
95%乙醇提取物及水提物的干浸膏 30. 14，30. 83
mg，置 100 mL 棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻
度，摇匀，得质量浓度为 0. 301 4，0. 308 3 g·L －1的供
试品溶液Ⅰ和Ⅱ，备用。
·151·
宋明明，等:黄杞叶化学成分的定量分析
表 3 黄杞叶 95%乙醇提取物的总酚加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 52. 8 93. 23 99. 33
2 52. 8 92. 68 97. 99
3 52. 8 93. 36 99. 66
95. 04 4. 04
4 52. 8 89. 87 91. 09
5 52. 8 89. 53 90. 24
6 52. 8 90. 22 91. 93
注:加入量均为 40. 70 mg(表 4 同)。
表 4 黄杞叶水提物的总黄酮加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 45. 05 82. 93 93. 06 96. 79 2. 99
2 45. 05 84. 28 96. 38
3 45. 05 85. 49 100. 92
4 45. 05 84. 44 96. 79
5 45. 05 83. 51 94. 49
6 45. 05 85. 38 99. 10
2. 2. 3 测定波长的选择 没食子酸对照品溶液和
供试品溶液经磷钼钨酸-碳酸钠显色后，在紫外-可
见分光光度计上，于波长 400 ～ 1 000 nm扫描，两者
均在 754 nm处有最大吸收，因此选择 754 nm 为测
定波长，测得的结果以没食子酸为基准计算总多酚
的含量。
2. 2. 4 线性关系考察 分别精密吸取 0，0. 2，0. 3，
0. 4，0. 6，0. 8 mL 0. 074 5 g·L －1没食子酸标准溶液，
置 10 mL棕色量瓶中，各依次加 4 mL 水，1 mL 磷钼
钨酸试液，最后用 29% Na2CO3 溶液稀释至刻度，摇
匀，以相应的试剂为空白，30 min 后，在 754 nm 波长
下测定吸光度 A。以吸光度 A 为纵坐标、浓度 C(g·
L －1)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程 A =
136. 13C － 0. 000 4(Ｒ2 = 0. 999 7) ，线性范围 1. 49 ～
5. 96 mg·L －1。
2. 2. 5 精密度试验 取 0. 6 mL 供试品溶液Ⅰ和
Ⅱ，按 2. 2. 4 中所述实验方法操作，测定吸光度，平
行测定 6 次，ＲSD 分别为 0. 22%，0. 20%，说明精密
度良好。
2. 2. 6 稳定性试验 按样品测定方法操作，测定同
一供试液在 60 min 内的吸光度。结果吸光度在
30 ～ 60 min 内稳定，ＲSD 2. 85%。因此，显色时间
定为 30 min。
2. 2. 7 样品中总多酚的测定 精确吸取供试品溶
液Ⅰ和Ⅱ各 0. 4 mL，分别置于 10 mL 棕色量瓶中，
照 2. 2. 4 项方法，自“各依次加 4 mL 水”起同法操
作，在 754 nm处测定吸光度，各平行测定 5 次，计算
即得样品中总多酚的含量，结果见表 5 和表 6。
表 5 黄杞叶 95%乙醇提取物中总多酚含量测定
No． 吸光度 A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 492 34. 29
2 0. 489 34. 11
3 0. 488 34. 06 34. 01
4 0. 480 33. 60
5 0. 503 34. 91
表 6 黄杞叶水提物中总多酚含量测定
No． 吸光度 A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 484 33. 07
2 0. 498 33. 85
3 0. 496 33. 74 33. 25
4 0. 496 33. 74
5 0. 489 33. 25
2. 2. 8 重复性试验 称取同一 95%乙醇提取物及
水提物各 6 份，按 2. 2. 2 项中所述实验方法操作，配
制供试品溶液Ⅰ和Ⅱ，各精确量取 0. 4 mL 的供试
品溶液Ⅰ和Ⅱ，分别放入 10 mL 的棕色量瓶中，按
2. 2. 4 中所述方法进行操作并显色，在 754 nm 处测
定吸光度，计算乙醇提取物及水提物中总多酚的含
量，ＲSD分别为 0. 01%，0. 17%，表示重复性良好。
2. 2. 9 加样回收率试验 精确吸取已知总多酚含
量的供试品试液Ⅰ，Ⅱ各 0. 2 mL，置于 10 mL 棕色
量瓶中，分别加入 0. 4 mL 没食子酸对照品溶液，按
2. 2. 4 中所述方法进行操作，测定吸光度，平行测定
6 次，计算得到平均加样回收率分别为 99. 44%，
96. 64%，结果见表 7，8。
2. 3 总皂苷的含量测定［9］
2. 3. 1 对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重
的齐墩果酸对照品 25 mg，置 100 mL 量瓶中，加入
甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得质量浓度为 0. 25
g·L －1的对照品溶液，备用。
2. 3. 2 供试品溶液的制备 分别精确称取黄杞叶
95%乙醇提取物及水提物的干浸膏 52. 58，52. 19
mg，置 100 mL 棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻
度，摇匀，得 0. 525 8，0. 521 9 g·L －1的供试品溶液Ⅰ
·251·
第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013
和Ⅱ，备用。
表 7 黄杞叶 95%乙醇提取物的总酚加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 20. 0 49. 60 99. 33
2 20. 0 49. 70 99. 66
3 20. 0 49. 60 99. 33
99. 44 0. 74
4 20. 0 49. 97 100. 56
5 20. 0 49. 63 99. 43
6 20. 0 49. 30 98. 33
注:加入量均为 29. 8 μg(表 8 同)。
表 8 黄杞叶水提取物的总酚加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 21. 0 50. 20 97. 99
2 21. 0 49. 80 96. 64
3 21. 0 49. 40 95. 30
96. 64 1. 65
4 21. 0 50. 43 98. 77
5 21. 0 49. 80 96. 64
6 21. 0 49. 16 94. 50
2. 3. 3 测定波长的选择 齐墩果酸对照品溶液和
供试品溶液香草醛-冰醋酸-高氯酸显色后，在紫外-
可见分光光度计上，于波长 400 ～ 800 nm扫描，两者
均在 551 nm处有最大吸收，因此选择 551 nm 为测
定波长，测得的结果以齐墩果酸为基准计算样品中
总皂苷的含量。
2. 3. 4 线性关系考察 分别精密吸取 0，0. 20，
0. 25，0. 30，0. 35，0. 40 mL齐墩果酸对照品溶液，置
具塞试管中，挥去甲醇，精密加入 0. 2 mL 5%香草
醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)和 0. 8 mL高氯酸，摇匀，
于 60 ℃水浴中加热 15 min 后置冰浴中冷却;加
5 mL冰醋酸，摇匀，立即在 551 nm 波长下测定吸光
度，同时以试剂空白做参照。以吸光度 A 为纵坐
标、浓度 C为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A =
42. 739C － 0. 017(r = 0. 999 7) ，线性范围 5. 6 ～ 14. 2
mg·L －1。
2. 3. 5 精密度试验 取 0. 6 mL 供试品溶液Ⅰ和
Ⅱ，按 2. 3. 4 中所述实验方法操作，测定吸光度，平
行测定 6 次，ＲSD 0. 45%，1. 83%，精密度良好。
2. 3. 6 稳定性试验 按样品测定方法操作，测定同
一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度在
30 min 内稳定，ＲSD 1. 76%。因此，测定时间应控
制在 30 min内完成。
2. 3. 7 样品测定 精确吸取供试品溶液Ⅰ和Ⅱ各
0. 4 mL和 0. 6 mL，置具塞试管中，按 2. 3. 4 项方法，
自“挥去甲醇”起同法操作，在 551 nm 处测定吸光
度，各平行测定 5 次，计算即得样品中总皂苷的含
量，结果见表 9，10。
表 9 黄杞叶 95%乙醇提取物中总皂苷含量测定
No． A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 344 22. 71
2 0. 349 22. 95
3 0. 348 22. 90 22. 91
4 0. 349 22. 95
5 0. 348 22. 90
表 10 黄杞叶水提物中总皂苷含量测定
No． A 含量 /% 平均值 /%
1 0. 429 18. 06
2 0. 420 17. 76
3 0. 420 17. 76 17. 84
4 0. 414 17. 56
5 0. 427 17. 99
2. 3. 8 重复性试验 称取同一 95%乙醇提取物及
水提物各 6 份，按 2. 3. 2 项中所述实验方法操作，配
制供试品溶液Ⅰ和Ⅱ，各精确量取 0. 4，0. 6 mL 的
供试品溶液Ⅰ和Ⅱ，置具塞试管中，按 2. 3. 4 中所
述方法进行操作并显色，在 551 nm 处测定吸光度，
计算乙醇提取物及水提物中总皂苷的含量，ＲSD 分
别为 3. 52%，3. 18%，显示重复性良好。
2. 3. 9 加样回收率试验 精确吸取已知总皂苷含量
的供试品溶液Ⅰ和Ⅱ，置具塞试管中，加入 0. 1 mL齐墩
果酸对照品溶液，按 2. 2. 4 项方法，自“挥去甲醇”
起同法操作，在 551 nm 处测定吸光度，各平行测定
6 次，计算得到平均加样回收率分别为 99. 44%，
96. 64%，结果见表 11，12。
3 结果与讨论
以芦丁为对照品的氯化铝法是测定总黄酮含量
比较成熟的方法，其显色的原理［10］是黄酮醇类成分
B环的 3，4-邻二酚羟基与显色剂发生络合反应显
黄色。有文献报道［11-12］称从黄杞叶中分离到大量
二氢黄酮醇类成分，这些化合物的 B 环大都符合此
条件，所以氯化铝法具有更好地专属性，更高的准确
度，故选择了此法测定黄杞叶 95%乙醇提取物及水
提物中总黄酮的含量，其结果分别为 48. 01%，
·351·
宋明明，等:黄杞叶化学成分的定量分析
表 11 黄杞叶 95%乙醇提取物的总皂苷加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 20. 01 38. 82 82. 50
2 20. 01 36. 26 78. 41
3 20. 01 36. 82 82. 50 81． 14 1． 83
4 20. 01 36. 58 79. 99
5 20. 01 36. 97 81. 87
6 20. 01 36. 91 81. 56
注:加入量均为 20. 72 μg(表 12 同)。
表 12 黄杞叶水提取物的总皂苷加样回收率试验
No．
试品量
/μg
加样
回收量
/μg
加样
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 16. 02 38. 39 88. 73
2 16. 02 38. 02 86. 90
3 16. 02 37. 75 85. 60
87. 16 1. 28
4 16. 02 37. 92 86. 46
5 16. 02 38. 09 87. 24
6 16. 02 38. 25 88. 03
42. 04%。总黄酮含量如此高的药材，在现有研究报
道中实属罕见。
经大量的文献调研表明，以没食子酸为对照品
的可见分光光度法是测定总多酚的含量比较成熟的
方法，此方法稳定性好，准确度高，且简便快捷，易于
操作，结果可靠。分光光度法测定黄杞叶 95%乙醇
提取物及水提物中总多酚的含量，其结果分别为
34. 01%，33. 25%。
皂苷的分析测定有多种方法，如沉淀法、溶血指
数法、色谱法等，沉淀法测定往往易带进杂质或导致
皂苷变质;色谱法一般可以分离出总皂苷，但对总含
量测定不适，误差大，成本高，但分光光度法操作简
便，灵敏，属于经典、成熟的方法。本研究选择了与
皂苷类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照
品，采用分光光度计法测定黄杞叶 95%乙醇提取物
及水 提 物 中 总 皂 苷 的 含 量，其 结 果 分 别 为
20. 91%，17. 84%。
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 21 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 21
Nov．，2013