全 文 ：组 ,说明三七能抑制 Ⅰ 、Ⅲ型胶原的合成而发挥抗肝纤维化作
用。
肝纤维化的形成和发展受多种因素的影响 ,其中影响 ECM
代谢的细胞因子调控失衡是重要原因之一。 肝星状细胞是
ECM 产生的主要来源 ,而细胞因子在肝星状细胞活化过程中发
挥着重要作用 ,能使星状细胞向肌成纤维细胞转化。转化生长
因子 β1(TGF-β1)是一类多功能生长因子 , 尽管其不促进星状细
胞增殖 ,但能使单个细胞胶原合成增加 60 ～ 80%, 被认为是肝
纤维化形成的关键因子[ 4 , 5] 。本实验表明 ,模型组肝纤维组织
中 TGF-β1 的表达量明显强于三七治疗组。
进年来的研究表明 , 三七能改善肝脏微循环 , 减轻局部炎
症反应 , 抑制肝星状细胞的增殖及胶原合成。本文也说明三七
能抑制Ⅰ 、Ⅲ型胶原的合成 , 同时对炎症产生的细胞因子 TGF-
β1 的表达也有抑制作用 , 由此看来三七抗肝纤维化作用是通过
抑制 TGF-β1 的产生而抑制肌成纤维细胞的生成或是直接抑制
胶原的合成或两者皆而有之 ,尚待进一步研究。
参考文献
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The effects of Total Saponins of Panax Notoginseng on Ⅰ 、Ⅲ-type collage and TGF-β1 in l iver of cirrhosis rats
Shi Xiaofeng , Xu Man , Liu Q i
(Institute for V iral Hepatitis , Chongqing University of Medical Sciences , Chonqing　400010)
　　Objective:To research the effect of to tal saponins of panax notoginseng(PNS)on the production of collagen Ⅰ 、Ⅲ and TGF-β1 in ex-
perimental cirrhosis rats induced by carbon tetraclo ride.Methods:Experimental ccirrhosis model w as made by intracutaneous injection of
CCl4 tw ice a week in rats for 12 times.From the 1st day after the CCl4 injection , SPN(60 or 30mg/ kg)were given intracutaneously once
a day fo r 42 days.The animals were sacrificed at the end of the 43rd days.Then type collag en Ⅰ 、Ⅲ and TGF-β1 w ere obsered with im-
munohistochemical method.Results:The positiv e stain of the type collag en Ⅰ 、Ⅲ and TGF-β1 were stronger in liv er cir rhosis model group
than in PNS trea tment group , the contents of the collagen also were indentical with the immunohistochemical results.Conclusions:SPN in-
hibted the expression o f the type collagen Ⅰ 、Ⅲ and TGF-β1 in liver cirrhosis rats.
Key words　total saponins of panax no toginseng(SP);liver cirrhosis rats;collagen Ⅰ 、Ⅲ;transforing g rowth factor β1(TGF-β1)
广枣总黄酮抗氧化作用的实验研究
包保全　张昕原　乌日娜　孙福祥　巴根那　李宝山
(内蒙古民族大学实验中心　通辽　028041)
　　提　要　目的:研究广枣总黄酮(TFFC)抗自由基 、抗氧化的作用。方法:在 O2· 、·OH 及 MDA 生成体系中分别观察 TFFC 对
O 2
· 、·OH 及 OxyHb和 MetHb含量的影响;用 ADR大白鼠模型及培养的乳鼠心肌细胞 , 观察 TFFC 对 LDH 、AS T、CK 以及培养心肌细
胞中 LDH 及 MDA 影响。结果:TFFC 能使ADR模型升高的心肌 LDH 、AST 、CK含量降低 , 而心 、肝 、红细胞中抗氧化酶 SOD、GSH-
Px、CAT 上升 ,脂质过氧化物(MDA)下降 ,并降低 ADR损伤的培养心肌细胞中 LDH 及 MDA 含量。结论:TFFC 通过抗自由基 、抗
氧化对氧合血红蛋白及心 、肝产生保护作用。
　　关键词　广枣总黄酮;阿霉素;自由基;抗氧化;心酶谱;心肌细胞
　　广枣为漆树科植物南酸枣 Chorspomias axillaris(Rorb)Batt
et Hill的干燥成熟果实 , 蒙语名为居日很芍沙 , 为常用蒙药 , 内
服蒙成药中广枣占 10%[ 1] , 已被中华人民共和国药典收集 。蒙
医认为广枣有行气活血 、养心安神功能。 用于治疗气滞血淤 、
胸痹作痛 、心悸气短 、心神不安等症[ 2] 。 药理研究表明广枣主
要有效成分黄酮类物质能明显降低小鼠耗氧量及耗氧速度 、提
高耐缺氧能力 、扩张冠状动脉 、改善微循环 、清除自由基并提高
心肌 SOD 活性[ 3] 。 作者提 取分离了广枣总黄酮(Total
Flavonoids of Fructus Chorspondiatis TFFC)并进行了体外 、体内
及细胞水平的抗自由基 、抗氧化的研究 ,现报告如下。
8 中药药理与临床 2001;17(2)
内蒙古自然科学基金资助项目 9713031
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2001.02.005
1　材料及方法
1.1　试验药物　通过正交试验 , 用 8 倍量的 70%乙醇回流提
取广枣 1h ,共 2次 , TFFC得率达 90%以上[ 4] 。
1.2　动物　SD大鼠由锦州医学院动物中心提供 , 雄雌各半 , 体
重 242±15g。
1.3　试剂　阿霉素(ADR)为浙江海正药业股份有限公司生
产 ,用生理盐水配成所需浓度。 乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨
酶(AST)、肌酸激酶(CK)测定试剂盒由北京中生试剂厂提供。
在 CB171TRACe半自动生化分析仪上测定。 超氧化物歧化酶
(SOD)测定用 VB2-Met-NBT 法[ 5] , 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-
Py)用 DTNB 法[ 6] , MDA 用 TBA 法[ 7] ,过氧化氢酶(CAt)用钼
酸铵法[ 8] ,蛋白质测定用考马斯亮兰法。所用仪器为日立 557
型分光光度计和 754 分光光度计。
1.4　体外实验　O 2·生成采用 VB2-Met-NBT 、·OH 生成采用
Vit C-CuSO4-Cy t C 体系[ 9] ;MDA 生成采用 Fe-DR-TBA 体
系[ 10] 。用氧合血红蛋白 、高铁血红蛋白的变化来观察 TFFC 对
血红蛋白的保护作用[ 11] 。
1.5　整体实验　用阿霉素(ADR)攻击大白鼠造成自由基损伤
模型 ,观察 TFFC 清除自由基 、激活自由基清除酶活性和对心肌
酶谱的作用。实验分为5 组 , 空白对照组只灌胃生理盐水;ADR
组于 2、4、6d 给 ADR 1.5mg/ kg , 8 、10 、12 、14d 给 ADR 3.0mg/
kg;另外 3 组为 ADR+TFFC 100、150及 200mg/ kg 组。
1.6　乳鼠心肌细胞培养　取出生 1 ～ 3d 的乳大鼠 , 取心室肌用
胰蛋白酶消化分离出心肌细胞。用 15%小牛血清的 Eagle培养
基培养 ,按每毫升 1×106 个细胞分装 5 组 ,即正常对照组 、ADR
(1.8μmol)组 、ADR(1.8μmol)+TFFC 100、500 、1000mg/ L 组。
经 37℃ 48 小时培养后测定上清液中 LDH 、MDA的含量。
2　结果
2.1　TFFC 对 O 2· 、·OH 的清除和抑制作用　当在 VB2-Met-
NBT 体系 、Vit C-CuSO 4-Cyt C 体系中加 TFFC 后 , 对 O 2· 、·OH
有明显的清除作用 ,对 O 2·的 IC50为 3.76mg/ L , SC50为 3.60mg/
L;对·OH 的 IC50为 49.39mg/ L , SC50=74.30mg/ L。
2.2　TFFC对氧合血红蛋白的保护作用　RBC 受 O2·、·OH 攻
击后氧合血红蛋白(OxyHb)减少 , 高铁血红蛋白(MetHb)增加 ,当
在体系中加入 TFFC 后 ,随着浓度增加 , OxyHb上升 , MetHb下降 ,
说明 TFFC 有保护氧合血红蛋白的作用(图 1 、2)。
图 1　TFFC对 O2·氧化　　　　　　　图 2　TFFC对 H2O2 氧化
Hb的抑制作用　　　　 Hb的抑制
A:Hb;B:Pyr+Hb;C:Pyr+Hb+　　　　A:Hb;B:Hb+H2O 2;
β-胡萝卜素;D:Pyr+Hb+SOD;　 C ～ F:Hb+H2O 2+TFFC
E ～ H:Pyr+Hb+TFFC　　 (30 、60 、120 、240μg)
(3.6 、15 、30 、45μg)
2.3　TFFC 对心肌 LDH 、AST、CK 活性的影响　于最后一次给
TFFC 24h , 用戊巴比妥钠 40mg/ kg 麻醉大白鼠 ,心脏取血 , 分离
血清 ,于 24h 内测定血清 LDH 、AST 、CK 活性 ,结果见表 1。
　　表 1　TFFC对 ADR 处理大鼠血清中 LDH 、AST 、CK 活性的影响
( x ±s)
组别 剂量(mg/ L)
LDH　
(u/ L)　
AST　
(u/ L)　
CK　
(u/ L)　
对照 0 133±60＊＊ 138±19＊＊ 183±32
ADR 　 235±58 256±29 650±95
ADR+TFFC 100 210±66 216±44 533±85
150 183±56＊ 192±47＊ 391±64＊
200 156±38＊＊ 182±55＊＊ 277±85＊＊
　　与ADR比较 ＊ P<0.05 , ＊＊P<0.01(下同)
2.4　TFFC 对心肌 、肝组织中 SOD、GSH-Px、MDA 的影响　采
血后的大鼠解剖 ,取心尖肌肉 、肝组织 , 用 0.15mg/ L 的 KCl为
介质制成 10%匀浆 , 冷冻离心(0 ～ 4℃4000rpm)10min , 取上清
液测定蛋白质含量后用于 SOD、GSH-Px 、MDA 的测定 ,见表 2。
　　表 2　 TFFC对 ADR处理大鼠心 、肝中 SOD 、GSH-Px 活性和MDA含量的影响( x±s )
组别 剂量(mg/ kg)
心
MDA(nmol/ L) SOD(U/mg) GSH-Px(U/mg)
肝
M DA(nmol/ L) SOD(U/mg) GSH-Px(U/mg)
对照 0 7.4±0.6＊＊ 249.3±32.6＊＊ 11.5±2.5＊＊ 6.4±0.73＊＊ 3.3±85.6＊＊ 10.40±2.1
ADR 　 16.7±1.2 184.7±41.6 6.2±0.8 12.6±1.2 409.8±109.5 7.12±2.5
ADR+TFFC 100 14.1±0.9 204.5±36.7 7.2±1.5 11.3±1.5 428.3±76.5 7.24±3.2
150 13.2±0.7＊ 210.2±52.3 8.7±1.9＊ 8.6±1.0＊ 436.4±67.8 7.84±2.9
200 8.7±0.8＊＊ 226.2±35.2＊＊ 9.3±1.8＊＊ 7.4±1.3＊＊ 466.4±76.5＊＊ 8.96±3.1＊＊
2.5　TFFC 对大白鼠红细胞中 SOD、GSH-Px、Cat活性及 M DA
含量的影响　分离血清后 , 剩余红细胞用生理盐水洗三次
(4000rpm 10min)蒸馏水破溶 , 冷冻保存 ,用前将溶血液融化后
适当稀释 ,测定 Hb 含量后用于实验。
2.6　TFFC对培养乳鼠心肌细胞中 LDH 、MDA 的影响　37℃
48 小时培养后 ADR组 LDH 、MDA 均显著高于正常对照组。当
TFFC 加入培养细胞中 , 随着加入量的增加 , LDH 、MDA 回落 ,
结果见表 4。
3　讨论
　　体外试验 TFFC 具有抗 O2· 、·OH 引起红细胞溶血作用。
当红细胞受 O2·和·OH 攻击后 , OxyHb降低而 MetHb上升 ,当 TF-
FC 后 OxyHb上升 MetHb下降 , 表明 TFFC 有保护Hb 不被氧化的
9中药药理与临床 2001;17(2)
作用 。在O2·、·OH生成体系中 , TFFC显示对自由基较强的清除
　　表 3　T FFC对ADR大鼠红细胞中 SOD、GSH-Px 、Cat活性和 MDA
含量的影响( x ±s )
组别 剂量(mg/kg)
SOD
(U/mgHb)
MDA
(nmo l/mgHb)
GSH-Px
(U/Ghb)
Cat
(U/gHb)
对照组 0 133.3±25.6 1.55±0.91 18.5±3.2 192.4±13.5
ADR 　 85.8±26.3 3.28±0.23 13.4±4.1 51.3±8.4
ADR+ 100 91.4±32.5 2.98±0.35 15.2±3.1 63.1±9.6
TFFC 150 106.9±28.1＊ 2.72±0.22 16.3±3.3＊ 82.5±10.5＊＊
200 116.5±31.8＊＊2.15±0.31＊＊ 17.1±2.8＊＊ 128.2±12.3＊＊
　　表 4　T FFC对受损心肌细胞 LDH及 MDA的影响( x ±s )
组别 浓度(/ L) LDH(U/ L) MDA(mol/ L)
正常对照 69.27±12.23＊ 10.28±1.96＊
ADR 1.8μmol 102.71±31.25 13.25±2.11
TFFC 100mg 90.50±15.62 12.12±2.13
TFFC 500mg 81.32±17.69＊ 10.91±1.88＊
TFFC 1000mg 89.67±13.69＊ 11.02±2.19＊
和抑制作用。体内动物实验 TFFC 大鼠血清 LDH 、AS T、CK 活
性增多较之 ADR组下降 , 说明心肌细胞膜得到修复 ,“心酶谱”
外漏减少 ,显示了 TFFC 的抗氧化及保护心脏作用。ADR在细
胞内经生物氧化体系的传递产生超氧阴离子(O2·)、过氧化氢
(H2O2)、羟自由基(·OH)等 ,促使自由基清除酶(SOD、GSH-Px)
大量消耗 , 活性降低 , 从而引起过氧化反应增强 , MDA 含量增
大。本文 ADR 组心肌 、肝中 SOD、GSH-Px 活性明显降低 , 而
M DA 则明显升高 ,说明ADR对心肌 、肝细胞膜已造成损伤。同
时给大鼠服用 TFFC , 随着剂量增大 , 心 、肝中 SOD、GSH-Px 活
性逐渐上升 ,MDA含量逐渐下降 ,说明 TFFC 确有清除自由基 、
抑制过氧化反应的作用。
本研究还证实 ,在 ADR的作用下 , 大鼠红细胞中自由基清
除酶(SOD、GSH-Px 、Cat)活性下降 , 同时超生理量的自由基对
红细胞进行过氧化 , 因而 MDA 上升。当大鼠服用 TFFC 后情
况发生逆转 , 随着 TFFC 剂量增大 , 三种自由基清除酶活性上
升 ,MDA含量下降 , 显示了 TFFC 的抗氧化能力。
培养心肌细胞 ADR组 LDH 活性 、MDA含量显著高于正常
对照组 ,说明 ADR对心肌细胞膜细胞已构成损伤 , 膜通透性改
变 , LDH 外漏 , 脂质过氧化反应加剧。当培养液中加入 TFFC
时 , LDH、MDA 逐渐下降 , 提示 TFFC 能在细胞水平上发挥抗氧
化作用。
综上述 ,可以初步认定 , TFFC 是广枣有效成分 , 其抗氧化
作用可能是由于黄酮类物质既是脂自由基清除剂 , 又是金属离
子的螯合剂 ,能抑制 Fenton 反应。另一方面 , TFFC 对 ADR 所
产生的 O2·的清除和歧化作用 ,降低了 O2·对组织细胞的损伤[ 12] ,
确切机理有待深入研究。
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Experimental study on anti-oxidation effects of Total Flavonoids of Fructus Chorspomias(TFFC)
Bao Baoquan , Zhang Xinyuan , Wu Rina , Sun Fuxiang , Ba Genma , Li Baoshan
(Inner Mongolia National University , Tongliao　028041)
　　AIM:To study the protective effect of TFFC on pero xida tion in rat s cardiac muscle and cultured cardiomyocy tes.Methods:In O 2· ,
·OH and M DA productive system , the effect of TFFC on the content of O2·, ·OH , OxyHb and Me tHb was determined;after TFFC was ad-
ministered on rats with Adriamycin-induced perosidation , activities of LDH 、AST 、CK in rat s serum and the content of MDA in cardiac
muscle , the activity of LDH and content of MDA in cultured suckling rat cardiomyocy tes were determined.Results:The content o f LDH、
AST、CK in the rat s cardiac muscle decreased in TFFC group , w hen activities of SOD、GSH-Px、CAT increased gradually , activities of
M DA decreased.The activity of LDH and MDA in culture fluid and in cultured cardiomyocy tes decreased too.Conclusion:TFFC can pro-
tect heart , liver and haemoglobin by scavenging free radicals and inhibiting lipid peroxidation.
Key words　Total flavones from Fructus Choero spondias;adriamycin;free radical;anti-oxidation;cardiac zymogram
10 中药药理与临床 2001;17(2)