全 文 ：基金项目:教育部重点项目(207151);陕西省自然科学基金(2006C220);陕西省教育厅自然科学项目(07JK399)
作者简介:桑柏 ,男 ,硕士研究生　　研究方向:药物代谢与分析方面的研究　　＊通讯作者:郑晓晖 ,男 ,教授 ,博士生导师　　研究方向:复方
药物分析等方面的研究　　Tel:(029)88302686　　Fax:(029)88302686　　E-mail:zhengxh@nwu.edu.cn
RP-HPLC研究冰片对广枣中没食子酸在家兔体内的药动学影响
桑柏 ,王世祥 ,兰薇 ,于洁 ,申旭霁 ,梁杨静 ,郑晓晖(西北大学中草药现代化研究及工程中心 ,西安 710069)
摘要:目的　研究冰片对广枣中没食子酸药动学的影响。方法　采用 RP-HPLC测定广枣水提液和广枣-冰片配伍液灌胃后家
兔血浆中没食子酸的药-时曲线 , DAS2.0药动学软件拟合房室模型 , 计算药动学参数 , 比较没食子酸在家兔体内的药动学差
异。结果　广枣单独给药 、广枣-冰片配伍后给药 , 没食子酸在体内代谢动力学模型均为二室开放模型。配伍后 , 没食子酸的
达峰时间提前 , V/F减少 , CL/F增大。结论　冰片可以促进没食子酸的转运和吸收 , 体现的了冰片对广枣的增效作用。
关键词:广枣;没食子酸;冰片;药动学
中图分类号:R969.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)07-0546-03
EfectsofBorneolonthePharmacokineticsofGalicAcidinHerbofGuangzaoinRatsbyRP-HPLC
SANGBo, WANGShi-xiang, LANWei, YUJie, SHENXu-ji, LIANGYang-jing, ZHENGXiao-hui(Engineering
andResearchCenterofChineseHerbModernization, NorthwestUniversity, Xi′an710069, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Toobservetheeffectofborneolonthepharmacokineticsofgalicacidinrats.METHODS　Thecon-
centrationsofgalicacidinplasmaweredeterminedbyHPLCafteradministratingtheextractionofGuangzaoorGuangzaocombinedwith
borneolinratsbyiginjection.ThedatawereprocessedbyDAS2.0 softwaretocalculatethepharmacokineticparametersandthento
findthediferencesbetweentwogroups.RESULTS　BothgroupsreceivedGuangzaoandGuangzaocombinedwithborneol.Thephar-
macokineticsmodelofgalicacidfolowedthetwo-compartmentmodel.Aftercombiningwithborneol, thepeakingtimeandV/Fofgal-
licacidweredecreased, meanwhile, theCL/Fofgalicacidwereincreased.CONCLUSION　Borneolcanacceleratethetransporta-
tionandabsorptionofgalicacidinrats.ItmayimplythattheborneolcanincreasethetherapeuticefficacyofGuangzao.
KEYWORDS:Guangzao(ChoerospondiasaxillariesBurtetHil);galicacid;borneol;pharmacokinetics
　　广枣为蒙医习惯用药材 ,是漆树科南酸枣属植
物南酸枣(ChoerospondiasaxilariesBurtetHil)的干
燥成熟果实 。其性味甘 、酸 、平 , 具有行气活血 、养
心 、安神的功效 [ 1] ,临床上主要用于治疗心绞痛 、冠
心病 、气滞血瘀等症 [ 2] 。没食子酸 (GA)是蒙药广
枣中主要的酚酸类成分 ,具有抗氧化 、抗病毒和抗血
小板聚集等作用 ,是广枣中的效应物质之一。
冰片又名 “龙脑 ”,为芬香开窍药的一种 ,在许
多中成药中常作为 “药引 ”,即中医所谓的 “芳香走
窜 ,引药上行 ”[ 3] 。现代药理研究表明 ,冰片可提高
药物的生物利用度 ,并可开放血脑屏障 ,对药物透过
皮肤黏膜也有促进作用 [ 4-5] 。冰片对其他药物成分
的药动学影响有少量文献报道 ,如复方丹参方中使
药冰片对君药丹参药动学的影响[ 6]表明 ,使药冰片
可提高君药丹参中原儿茶酸的生物利用度 ,减慢代
谢 。在此基础上 ,研究广枣与冰片相互作用的体内
机制 ,这种药物相互作用符合 “君-使 ”对药相使关系
的可能性 ,为中药引经理论的完善和现代化诠释提
供一定佐证 ,并为起效-导向创新中药的开发提供一
种新思路 。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂
广枣(产地:湖南 ,陕西省药材公司 ,陕西省药品
检验所进行鉴定);GA对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号:1100831-200302);冰片(产地:江西 ,陕西
省药材公司 ,西安市药检所谢志民研究员进行鉴定);
肝素钠注射液(江苏万邦生化医药股份有限公司 ,批
号:080303);色谱纯甲醇(美国 Fisher公司);实验用
水为超纯蒸馏水(自制);其他试剂均为分析纯。
1.2　仪器与设备
Agilent1100系列高效液相色谱仪 ,包括:在线脱
气机 、四元梯度泵 、自动进样器 、柱温箱和二极管阵列
检测器(美国安捷伦公司);TGL-16G高速离心机
·548· ChinPharmJ, 2010April, Vol.45No.7　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 4月第 45卷第 7期
(上海安亭科学仪器公司);BF2000氮气吹干仪;SK-
1型快速混匀器;Maxima超纯水机(美国基因公司)。
1.3　动物
新西兰大白兔(西安交通大学实验动物中心 ,
批号:医动字第 08-018号),雌雄兼用 , 1.9 ～ 2.2kg。
1.4　药材提取
1.4.1　广枣水提液　取广枣药材粉末(过 20 ～ 60
目筛)500.0 g,加 8倍量水浸泡过夜后置于圆底烧
瓶中 ,保持微沸 ,回流提取 3次 ,时间分别为 4 , 3和
3 h,抽滤 ,合并滤液 ,减压浓缩至 100 mL,即得广枣
水提液 , 4 ℃冷藏备用。
1.4.2　广枣 -冰片配伍液　广枣与冰片的配比为
50∶1,因此 ,量取广枣水提液 50 mL,加入碾磨过的
冰片粉末 5.0 g,搅拌均匀 ,制成广枣 -冰片悬浊液 。
1.5　动物实验设计
取健康新西兰家兔 12只 ,禁食不禁水 12h。随
机分为两组 ,分别按 20 g· kg-1的剂量灌胃广枣水
提液和广枣 -冰片配伍液 ,于给药后 5 , 10, 20 , 30, 40,
60 , 90, 120, 180, 240, 360, 480, 720min耳动脉取血 1
mL,置于肝素化离心管中 , 8 000 r· min-1离心 10.0
min,分离血浆 ,于 -20 ℃冻存 。
1.6　血药浓度的测定
1.6.1　色谱条件　色谱柱:UltimateTMXB-C18 , 4.6
mm×250 mm, 5 μm;流动相:甲醇 -0.2%甲酸水溶
液 =8∶92;流速为 0.8mL·min-1;柱温为 25 ℃;检
测波长为 270 nm;进样量为 50μL。
1.6.2　对照品溶液的制备　精密称取 GA对照品
1.0mg,加甲醇定容于 10.0 mL的棕色量瓶中 ,摇
匀 ,配制成质量浓度为 0.10 g· L-1的储备溶液 ,取
1.0mL,用甲醇定容至 25.0mL棕色量瓶中 ,制备成
为 4.0g· L-1的对照品溶液。
1.6.3　样品处理　取 “ 1.5”项下血浆 0.5 mL,加入
50 μL10%三氯乙酸 -水沉淀蛋白 ,涡旋 1min后 ,加
1.5mL乙酸乙酯萃取 , 涡旋 1 min, 离心 10 min
(8 000 r·min-1),取出上清液 ,萃取 2次 。合并乙
酸乙酯层 ,氮气吹干后 ,加入 0.5 mL流动相(甲醇-
0.2%甲酸水溶液 =8∶92)溶解 ,用 0.45μm水系微
孔滤膜过滤 , 4 ℃冷藏备用 。
2　结　果
2.1　方法学考察
2.1.1　专属性及检测限　拟定分析条件下 ,注入
50.0μL空白血浆供试品溶液和 50.0μL空白血浆
加混标供试品溶液 ,记录色谱图(图 1)。结果表明 ,
空白血浆中杂质不干扰测定 。拟定分析条件下 , GA
的检出限(S/N=3计)为 0.01 mg· L-1。
广枣药材溶液(0.39 g·L-1 GA)、空白血浆 、空
白血浆加标(0.16mg·L-1)、血样 。见图 1,将空白
血浆和血浆加标样品色谱图进行比较 ,结果表明 ,血
浆样品经处理后 ,内源性物质不干扰 GA成分的测
定。
2.1.2　线性关系　于 0.5mL空白血浆中加入不同
量的 GA标准溶液 , 配成质量浓度为 0.04, 0.08,
0.16, 0.40, 0.80, 2.00 mg· L-1的标准血浆 。按
“1.6.3”方法处理 ,在 “ 1.6.1”色谱条件下进样分
析 ,记录峰面积 。以待测物峰面积为纵坐标(y),进
样浓度为横坐标(x, mg·L-1)进行回归分析 ,得 GA
的回归方程分别为:y=179.72x-4.984 4, r=0.998
9(n=6),血浆中 GA质量浓度均在 0.04 ～ 2.0 mg
·L-1内线性关系良好 。
2.1.3　精密度和回收率　将相同量的对照品溶液
加入等体积的空白血浆和水中 ,制成低 、中 、高 3个
质量浓度(0.040 , 0.40, 2.0 mg· L-1)的标准血浆
样品和标准水溶液 。分别按 “ 1.6.3”方法进行处
理 ,在 “ 1.6.1”分析条件下 ,进样 50.0 μL, 1 d内重
复测定 6次 , 6 d内连续测定 6次 ,求得日内 、日间精
密度 ,以血浆中 GA与水溶液中 GA的含量之比计
算回收率 ,结果见表 1。
2.1.4　稳定性　取空白血浆样品 ,加入适量 GA标
准溶液 ,得到低 、中 、高质量浓度 (0.04, 0.40, 2.0
mg· L-1)的空白血浆加对照品溶液 ,室温下放置
4.0, 6.0, 8.0 , 10.0, 12.0, 24.0 h,按 “1.6.3”方法进
行处理 ,在 “1.6.1”分析条件下进样 50.0 μL,测定
GA3个浓度的 RSD%分别为 4.93 , 2.66, 1.76,稳定
性良好。
图 1　没食子酸(GA)的高效液相色谱图
a-广枣水提液;b-空白血浆;c-空白加混标;d-含药血浆
Fig.1　HPLCChromatogramsofgalicacid(GA)
a-Choerospondiasaxilariesdecoction;b-controlplasma;c-controlplasmawith
additionofstandardsubstances;d-plasmacontainedmedicine
·549·中国药学杂志 2010年 4月第 45卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010April, Vol.45No.7
2.2　血药浓度及药动学研究
取 “ 1.6.3 ” 项 下 血 浆 样 品 50 μL, 在
“ 1.6.1”色谱条件下进样分析 ,按标准曲线计
算 GA的浓度 , 以时间 (t)为横坐标 , 血药浓度
(ρ)为纵坐标绘制药 -时曲线 ,见图 2。血药浓度
观察值用 DAS2.0药动学软件处理 , 拟合房室
模型 ,结果显示 , GA呈二室开放模型 ,主要的药
动学参数见表 2。
表 1　GA的回收率和精密度 .n=6, x±s
Tab.1　RecoveryandprecisionofGAinplasma.n=6, x±s
ρ
/mg· L-1
Recovery
/%
Precision, RSD/%
Intra-day Inter-day
0.04 86.4±3.55 4.34 6.48
0.40 90.5±2.12 4.67 4.36
2.00 93.8±1.51 2.39 3.67
图 2　兔灌胃广枣 、广枣-冰片后 GA药物浓度-时间曲线 .
n=8, x±s
Fig.2　Concentration-timecurvesofGAinratsbyiginjec-
tion.n=8, x±s
表 2　GA的药动学参数 .n=6, x±s
Tab.2　MainpharmacokineticparametersofGA.n=6, x±s
Parameters Guangzao Guangzao-borneol
t
1/2α/min 15.2±1.23 26.3±2.672)
V/F/L· kg-1 193±35.1 96.4±22.32)
CL/F/L· min-1· kg 0.330±0.104 0.442±0.1121)
AUC(0-∞)/mg· min· L-1 60.7±11.1 45.3±8.981)
K
12
/min-1 0.009 00±0.002 00 0.016 0±0.009 00
K21 /min-1 0.045 0±0.012 0 0.015 0±0.010 01)
Ka/min-1 0.046 0±0.020 0 0.032 0±0.019 0
ρmax/mg· L-1 0.124±0.088 0 0.138±0.092 0tmax/min 60.0±10.1 40.0±8.982)
t1/2Ka/min 15.1±5.02 21.5±6.231)
注:与广枣组比 , 1)P<0.05, 2)P<0.01;广枣剂量 20g· kg-1 ,广枣 +冰片剂
量 20 g· kg-1+0.6g· kg-1
Note:comparedwithgroupGuangzao, 1)P<0.05, 2)P<0.01;DoseofGuangzao20
g· kg-1 , DoseofGuangzaocombinedwithborneol20g· kg-1+0.6 g· kg-1
3　讨　论
药动学参数显示 ,给正常家兔灌服广枣水煎液
后 , GA呈二室开放模型 , V/F、CL/F、AUC、t1 /2α、tmax
和 ρmax分别为 (193 ±35.1)L·kg-1 , (0.330 ±
0.104)L· kg· min-1 , (60.7 ±11.1)mg· min·
L-1 , (15.2 ±1.23)min, (60.0 ±10.1)min和
(0.124±0.088 0)mg·L-1。
GA的半衰期和达峰时间与文献 [ 7-8] 报道有所
不同 ,其原因可能是由于中药本身就是一个复杂的
化学体系 ,进入体内后 ,药效成分之间有较大的相互
作用 ,可能存在拮抗作用或者协同作用 ,从而影响了
指标成分的体内过程 ,这也佐证了中药的 “药辅共
生”理论。另外 ,给药途径和实验对象的差异也会
导致指标成分的药动学发生变化 。
本实验发现 ,一方面 ,与冰片配伍后 , GA在正
常家兔体内的 AUC面积减小 ,达峰时间显著提前 ,
提示冰片使 GA吸收加快 ,可能与冰片促进吸收和
转运的药理作用有关 。另一方面 ,冰片对 GA在正
常组家兔体内 ,清除率 CL/F增大 ,表观分布容积 V/
F显著减小 ,提示冰片加快了 GA的消除。
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(收稿日期:2009-06-29)
·550· ChinPharmJ, 2010April, Vol.45No.7　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 4月第 45卷第 7期