全 文 ：· 870· 第二军医大学学报
2010 年 8 月第 31 卷第 8 期 http:/ /www． ajsmmu． cn
Academic Journal of Second Military Medical University，Aug． 2010，Vol． 31，No． 8
DOI:10． 3724 /SP． J． 1008． 2010． 00870 ·论 著·
檀香对广枣中原儿茶酸和没食子酸的药代动力学影响
梁杨静，桑 柏，申旭霁，兰 薇，王世祥，郑晓晖*
西北大学生命科学学院药物化学，西安 710069
［摘要］ 目的 建立大鼠体内的没食子酸和原儿茶酸的反相高效液相色谱分析方法，研究檀香对广枣中没食子酸、原儿
茶酸在大鼠体内药代动力学的影响。方法 给 SD大鼠灌服广枣水提液和广枣 －檀香水提液，采用反相高效液相色谱法测定
大鼠给药后不同时间血浆中原儿茶酸和没食子酸的浓度，DAS2． 0 药动学软件拟合房室模型，计算药动学参数。结果 广枣
水提液组没食子酸的主要药动学参数 Cmax为 (0． 112 ± 0． 008)mg·L
－1，CL /F (0． 132 ± 0． 016)L·min －1·kg －1;Tmax(45． 0 ±
0)min，t1 /2β(69． 3 ± 0)min;原儿茶酸的主要药动学参数 Cmax为 (0． 550 ± 0． 028)mg·L
－1，Tmax(52． 0 ± 0)min，CL /F
(0． 078 ± 0． 011)L·min －1·kg －1，t1 /2β(60． 7 ± 1． 1)min。广枣 －檀香水提液组没食子酸的主要药动学参数 Cmax为 (0． 187 ±
0． 010)mg·L －1，CL /F (0． 094 ± 0． 017)L·min －1·kg －1，Tmax(30． 0 ± 0)min，t1 /2β(69． 3 ± 3． 3)min;原儿茶酸的主要药动学参
数 Cmax为(1． 080 ± 0． 066)mg·L
－1，Tmax(45． 0 ± 0)min，T1 /2β(69． 3 ±0． 2)min，CL/F(0． 011 ±0． 001)L·min
－1·kg －1。结论
广枣 －檀香水提液组没食子酸和原儿茶酸的达峰时间提前，清除率降低，半衰期延长，提示檀香可促进广枣中酚酸类物质吸收，
延缓其消除。
［关键词］ 药代动力学;广枣;檀香;没食子酸;原儿茶酸
［中图分类号］ R 969． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 0258 － 879X(2010)08 － 0870 － 04
Effects of Sandalwood on pharmacokinetics of gallic acid and protocatechuic acid in Choerospondiatis fruit
LIANG Yang － jing，SANG Bai，SHEN Xu － ji，LAN Wei，WANG Shi － xiang，ZHENG Xiao － hui*
The Pharmaceutical Chemistry，College of Life Sciences，Northwest University，Xi’an 710069，Shaanxi，China
［收稿日期］ 2010 － 04 － 02 ［接受日期］ 2010 － 06 － 24
［基金项目］ 教育部科学研究重点项目(207151) ，陕西省中医管理局项目(2007 － 25 － 6)． Supported by the Key Project of Chinese Ministry of
Education(207151)and Administration of Traditional Chinese Medicine of Shaanxi Province (2007 － 25 － 6)．
［作者简介］ 梁杨静，硕士． E － mail:lyj860819@ 163． com
* 通讯作者(Corresponding author)． Tel:029 － 88302686，E － mail:zhengxh@ nwu． edu． cn
［Abstract］ Objective To establish a HPLC method for in vivo determination of gallic acid (GA)and protocatechuic acid (PA)
in rat plasma，and to study the effect of Sandalwood on the pharmacokinetics of GA and PA． Methods SD rats were given the water
extracts of Choerospondiatis fruit or Choerospondiatis fruit and Sandalwood． The pharmacokinetic parameters of GA and PA were calculated
by DAS2． 0 software at different time points after an oral ration of the above extracts． Results The pharmacokinetic parameters after oral
administration of Choerospondiatis fruit extract were as follows:GA:Cmax:(0． 112 ±0． 008)mg·L
－1，CL/F: (0． 132 ±0． 016)L·min －1
·kg －1，t1 /2β: (69． 3 ±0)min，Tmax: (45． 0 ±0)min;PA:Cmax: (0． 550 ±0． 028)mg·L
－1，Tmax: (52． 0 ±0)min，t1 /2β: (60． 7 ±
1． 1)min;CL/F: (0． 078 ± 0． 011)L·min －1·kg －1 ． The pharmacokinetic parameters after oral ration of Choerospondiatis fruit －
Sandalwood extract were as follows:GA:Cmax: (0． 187 ±0． 010)mg·L
－1，CL/F: (0． 094 ± 0． 017)L·min －1·kg －1，t1 /2β:(69． 3 ±
3． 3)min，Tmax: (30． 0 ±0)min;PA:Cmax: (1． 080 ±0． 066)mg·L
－1，Tmax: (45． 0 ±0)min，t1 /2β: (69． 3 ±0． 2)min，CL/F:(0．
011 ±0． 001)L·min －1·kg －1 ． Conclusion Oral ration of Choerospondiatis fruit － Sandalwood extract results in earlier plasma peaks of
PA and GA，lower clearance rate，and longer half life，indicating Sandalwood can promote the absorption of phenolic compounds in
Choerospondiatis fruit．
［Key words］ pharmacokinetics;Choerospondiatis;Santalum album;galic acid;protocatechuic acid
［Acad J Sec Mil Med Univ，2010，31(8) :870 － 873］
广枣为漆树科植物南酸枣的干燥成熟果实，是
蒙医常用药材，性味甘、酸、平、脂、重、柔，有行气活
血、养心、安神的功效，用于气滞血瘀、胸痹作痛、心
悸气短、心神不安。原儿茶酸(PA)和没食子酸
(GA)是广枣中的水溶性酚酸成分［1］，具有明显的抗
氧化、清除自由基、抑制血小板聚集作用和抗缺氧活
性［2 － 3］，檀香性味辛温，具有行气温中、开胃止痛的
第 8 期．梁杨静，等．檀香对广枣中原儿茶酸和没食子酸的药代动力学影响 · 871 ·
功效，对各种血瘀证和冠心病均有较好的治疗作
用［4 － 5］。本研究组已建立了 GA 和 PA 体内的药代
动力学研究 RP － HPLC 方法，并进一步研究了使药
冰片对广枣中 GA 和 PA 在家兔体内药动学的影
响［6 － 8］。但檀香对广枣药动学的影响未见报道。
本研究在复方三味檀香散的基础上提出君 －使
药对“广枣 －檀香”，采用 RP － HPLC 方法观察广枣
与檀香合用后，檀香对广枣中 PA和 GA 在大鼠体内
的药动学过程的影响，以期为临床安全、合理用药提
供实验依据。
1 材料和方法
1． 1 药品与试剂 广枣 Choerospondias axillaries
(Roxb． )Burtt et Hill (产地:湖南，购于陕西省药材
公司，由西安交通大学医学院王军宪教授鉴定) ;檀
香 Santalum album L． (产地:印度，购于陕西省药材
公司，由西安交通大学医学院王军宪教授鉴定) ;GA
对照品(中国药品生物制品检定所，批号:1100831 －
200302) ;PA 对照品(中国药品生物制品检定所，批
号:110809 － 200503) ;肝素钠注射液(河北常山生
化药业有限公司，批号:050800) ;色谱纯甲醇(美国
Fisher公司) ;实验用水为超纯水(自制) ;其他试剂
均为分析纯。
1． 2 仪器与设备 Agilent1100 系列高效液相色谱
仪，包括在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温
箱和二极管阵列检测器(美国安捷伦公司) ;TGL －
16G高速离心机(上海安亭科学仪器公司) ;BF2000
氮气吹干仪(北京八方世纪科技有限公司) ;VER-
TEX26 型快速混匀器(海门市其林贝尔仪器制造有
限公司) ;Maxima超纯水机(美国基因公司) ;BP221S
电子天平(德国赛多利斯公司)。
1． 3 动物 SD 大鼠(由西安交通大学实验动物中
心提供，合格证号:陕医动证字 2006105) ，雌雄兼用，
体质量 200 ～ 230 g。
1． 4 药材提取 取广枣药材粉末(过 20 ～ 40 目筛)
100． 0 g，置于 2 000 ml圆底烧瓶中，加 8 倍量水，加热
回流提取 3次，提取时间分别为 3． 0、3． 0、2． 0 h，抽滤，
合并滤液，减压浓缩至 100 ml，得广枣水提液，GA 和
PA含量分别为 0． 43 g·L －1和 1． 30 g·L －1，4℃冷藏
备用。广枣及檀香药材粉末(过 20 ～ 40 目筛)各
100． 0 g，于 3 000 ml圆底烧瓶中，8 倍量水，加热回流
提取 3次，提取时间分别为 3． 0、3． 0、2． 0 h，抽滤，合并
滤液，减压浓缩至 100 ml，得广枣 －檀香水提液，GA
和 PA的含量分别为 0． 39 g·L －1和 1． 14 g·L －1，4℃
冷藏备用。
1． 5 血浆样品预处理 取健康 SD大鼠 12 只，随机
分为 2 组，每组 6 只，雌雄兼用，禁食 12 h，自由饮
水。分别灌服广枣水提液(原药材 30 g·kg －1)以及
广枣 －檀香水提液(原药材 30 g·kg －1) ，给药后于
0、5、15、30、45、60、90、120、150、180、240、360、480、
720 min 眼球取血 0． 5 ml 置于肝素化离心管中，2
800 × g离心 10 min，分离血浆，于 － 20℃冻存。
1． 6 血药浓度的测定
1． 6． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent TC － C18，5 μm，
4． 6 mm ×250 mm;流动相:甲醇 － 0． 2%甲酸水(6 ︰
94，V /V) ;流速:0． 8 ml·min －1;检测波长:270 nm;
柱温:25℃;进样量:50 μl。
1． 6． 2 混合对照品溶液的制备 分别精密称取 GA
和 PA 对照品各 1． 0 mg，置于 10． 0 ml 棕色容量瓶
中，用甲醇稀释至刻度，制得浓度为 0． 10 g·L －1的
混合对照品溶液，4℃冷藏备用。
1． 6． 3 血浆样品的预处理 取 1． 5 项下血浆 0． 3
ml，加入 60 μl 10%三氯乙酸 －水沉淀蛋白，涡旋 2
min 后，加 0． 9 ml 醋酸乙酯萃取，涡旋 2 min，
2 800 × g离心 10 min，取出上清液，萃取 2 次。合并
醋酸乙酯层，氮气吹干后，加入 0． 3 ml 流动相溶解，
用0． 45 μm水系微孔滤膜过滤，进样。
1． 6． 4 方法学考察 线性关系及检测限:取大鼠空
白血浆 0． 3 ml，加入适量混合对照品溶液，按 1． 6． 3项
下空白血浆供试品溶液制备方法制备样品，制得 PA
浓度分别为 3． 50、1． 75、0． 88、0． 44、0． 22、0． 11、0． 05、
0． 03 mg·L －1和 GA 浓度分别为 2． 50、1． 25、0． 63、
0． 31、0． 16、0． 08、0． 04、0． 02 mg·L －1的系列空白血浆
加混标供试品溶液。在拟定分析条件下精密吸取
50． 0 μl注入液相色谱仪，记录峰面积。分别以浓度
(x，mg·L －1)为横坐标，以峰面积(y)为纵坐标，进行
回归分析。
精密度和回收率试验:将相同量的混合对照品
溶液加入等体积的空白血浆和水中，制成低、中、高 3
个浓度(GA 为 0． 04、0． 16、1． 25 mg· L －1;PA 为
0． 06、0． 22、1． 75 mg·L －1，下同)的混标血浆样品和
混标水溶液。将混标水溶液在拟定分析条件下进
样，记录峰面积，由 GA 和 PA 的线性方程计算得到
测量值，计算方法回收率。分别按 1． 6． 3 项下的样
品制备方法制备样品，在拟定分析条件下进样，日内
重复测定 5 次;将上述 3 个浓度的样品在 5 d内连续
测定 5 次;分别计算日内、日间精密度及回收率。
冻融稳定性:取空白血浆，分别加入适量 GA 和
PA对照品溶液，得到低、中、高 3 个浓度的空白血浆
加对照品溶液，置于 － 20℃冷冻，24 h 后于室温下解
冻，按 1． 6． 3 项下的方法制备样品。进样 50． 0 μl，
在拟定的分析条件下进行检测，测定 GA 和 PA 的浓
· 872· 第二军医大学学报 2010 年 8 月，第 31 卷
度变化。并将样品重新冷冻 24 h。按上述步骤重复
6 次，考察冻融周期对样品稳定性的影响。
短期稳定性:取空白血浆样品，加入适量 GA 和
PA对照品溶液，得到低、中、高浓度的空白血浆加对
照品溶液，室温下放置 4． 0、6． 0、8． 0、10． 0、12． 0、
24． 0 h，按 1． 6． 3 项下样品制备方法制备样品。进样
50． 0 μl，在拟定分析条件下进行检测，检测 GA 和
PA的浓度变化，考察温度对样品稳定性的影响。
长期稳定性:取空白血浆样品，加入适量 GA和 PA
对照品溶液，得到低、中、高浓度的空白血浆加对照品溶
液，置于 －20℃冷冻，分别贮存 1、2、4、8 周后在室温条
件下解冻，按1． 6． 3项下方法制备样品，进样50． 0 μl，在
拟定分析条件下进行检测，检测 GA和 PA的浓度变化，
考察贮存时间对样品稳定性的影响。
1． 7 药动学研究 取 1． 6． 3 项下样品 50 μl，在拟
定色谱条件下进样分析，按标准曲线计算 GA、PA 的
浓度，以时间(t)为横坐标，血药浓度(c)为纵坐标绘
制药 －时曲线。DAS 2． 0 药动学软件处理，拟合房
室模型。
2 结 果
2． 1 方法的选择性 如图 1 所示，GA和 PA的峰形
良好，保留时间分别为 15． 0、28． 0 min，空白血浆中
杂质以及内源性物质均不干扰酚酸类成分样品峰，
基线噪音小。
图 1 样品的 HPLC图谱
Fig 1 HPLC chromatograms
A:Choerospondiatis fruit;B:Choerospondiatis fruit － Sandalwood;C:
Blank plasma;D:Blank plasma with addition of standard substances;E:
Plasma contained Choerospondiatis fruit;F:Plasma contained Choerospon-
diatis fruit － Sandalwood
2． 2 线性关系及检测限 得 GA 和 PA 回归方程分
别为 y = 250． 75x + 3． 179 1 (r = 0． 998 9，n = 8)和
y = 149． 51x － 1． 773 5(r = 0． 999 6，n = 8)。线性范
围分别为 0． 02 ～ 2． 5 mg·L －1和 0． 03 ～ 3． 5 mg·
L －1，检出限(S /N = 3 计)均为 0． 01 mg·L －1。
2． 3 精密度和回收率 如表 1 所示，GA和 PA的加
样回收率均在 85%以上，日内、日间精密度 RSD 值
均小于 7%，表明在所选浓度范围回收率较高，精密
度良好。
表 1 原儿茶酸和没食子酸的回收率和精密度
Tab 1 Recovery and precision of gallic acid and
protocatechuic acid in plasma
Compd． Recovery(%，n = 6)
Precision，RSD(%)
Intra Inter
Gallic acid
0． 04 mg·L －1 88． 22 ± 6． 32 4． 21 6． 21
0． 16 mg·L －1 94． 52 ± 4． 52 4． 35 5． 66
1． 25 mg·L －1 93． 94 ± 3． 95 3． 38 4． 87
Protocatechuic acid
0． 06 mg·L －1 89． 59 ± 2． 53 4． 46 5． 62
0． 22 mg·L －1 91． 92 ± 4． 70 5． 51 6． 65
1． 75 mg·L －1 91． 90 ± 2． 42 3． 82 3． 99
2． 4 稳定性实验
2． 4． 1 冻融稳定性 在拟定分析条件下，进样
50． 0 μl，测定 GA 3 个浓度的 RSD 分别为 99． 8%、
101． 5%、98． 7%，PA 3 个浓度的 RSD 分别为
102． 1%、103． 3%、99． 9%，稳定性良好。
2． 4． 2 短期稳定性 在拟定分析条件下，进样
50． 0 μl，测定 GA 3 个浓度的 RSD 分别为 103． 2%、
102． 0%、97． 7%，PA 3 个浓度的 RSD 分别为
104． 6%、102． 0%、101． 6%，稳定性良好。
2． 4． 3 长期稳定性 在拟定分析条件下，进样 50． 0
μl，测定 GA 3 个浓度的 RSD 分别为 98． 2%、
96． 6%、95． 6%，PA 3 个浓度的 RSD 分别为96． 7%、
98． 1%、95． 2%，稳定性良好。
2． 5 药代动力学研究 GA、PA均呈二室开放模型，
药 －时曲线见图 2，主要的药代动力学参数见表 2。
3 讨 论
在色谱条件优化的过程中，考察了不同比例的
甲醇 －水及乙腈 －水流动相，发现在甲醇 －水 (含
0． 2%甲酸)6∶94 体系时分离效果最佳，基线平稳，
主要色谱峰的对称性良好，保留时间适宜。血样处
理时，先经 10%三氯乙酸沉淀蛋白，再用乙酸乙酯萃
取 3 次，此方法快速准确，绝对回收率高。因此，该
法可用于 PA和 GA血药浓度的测定及药动学研究。
GA和 PA的半衰期和达峰时间与文献报道［9］有所
第 8 期．梁杨静，等．檀香对广枣中原儿茶酸和没食子酸的药代动力学影响 · 873 ·
不同，其原因可能是由于中药在体内的作用就是一
个综合、复杂的化学体系在机体内协同调节作用的
结果，中药进入体内后，药效成分之间可能存在拮抗
或者协同作用，从而影响了指标成分在体内的代谢
行为，这也佐证了中药的“药辅共生”理论。
实验数据显示，给大鼠灌胃广枣或广枣 －檀香
后，GA和 PA在大鼠体内的药 －时曲线均符合二室开
放模型。广枣与檀香配伍后，檀香可使 PA 和 GA 吸
收半衰期 t1 /2Ka明显增大，血药浓度 Cmax增大，血药浓
度曲线下面积 AUC 增加，清除率 CL /F 降低，表观分
布容积 V/F减小，提示檀香可使 GA和 PA 的吸收加
快，吸收量增大，排泄减慢，提高了 GA 及 PA 的生物
利用度。这可能是檀香中的挥发油可以增加广枣中
酚酸类成分的跨膜能力，使酚酸类成分吸收加快、吸
收量增大的结果。檀香中的挥发油有着与冰片相似
的结构特点，冰片可竞争抑制 P － 糖蛋白药泵作
用［10］，提示檀香中的挥发油可能也具有抑制 P －糖蛋
白药泵作用，从而减慢广枣中酚酸类成分的排泄。
图 2 大鼠灌胃广枣、广枣 －檀香后 GA(A)和
PA(B)药物浓度 －时间曲线
Fig 2 Concentration － time curves of GA(A)and
PA(B)in rats after i． g． injection
n = 6，珋x ± s
表 2 大鼠灌胃广枣、广枣 －檀香后的药代动力学参数
Tab 2 Main pharmacokinetics parameters of GA and PA
(n = 6，珋x ± s)
Parameter
Choerospondiatis fruit
PA GA
Choerospondiatis fruit － Sandalwood
PA GA
t1 /2α t /min 28． 5 ± 7． 8 24． 5 ± 7． 1 43． 1 ± 0＊＊ 49． 9 ± 2． 7＊＊
t1 /2β t /min 60． 7 ± 1． 1 69． 3 ± 0 69． 3 ± 0． 2＊＊ 69． 3 ± 3． 3＊＊
V /F(L·kg －1) 3． 75 ± 0． 97 16． 20 ± 7． 31 1． 37 ± 0． 21＊＊ 5． 85 ± 1． 86＊＊
CL /F (L·min －1·kg －1) 0． 078 ± 0． 011 0． 132 ± 0． 016 0． 011 ± 0． 001* 0． 094 ± 0． 017*
AUC(0 －∞)(mg·min·L
－1) 61． 7 ± 10． 2 20． 3 ± 2． 7 276． 0 ± 2． 6 21． 0 ± 3． 9*
K12(min －1) 0． 006 ± 0． 001 0． 017 ± 0． 032 0． 007 ± 0． 004 0． 006 ± 0． 012*
K21(min －1) 0． 015 ± 0． 002 0． 039 ± 0． 024 0． 011 ± 0 0． 013 ± 0． 002
Cmax ρB /(mg·L －1) 0． 550 ± 0． 028 0． 112 ± 0． 008 1． 08 ± 0． 07 0． 187 ± 0． 010
Tmax t /min 52． 0 ± 0 45． 0 ± 0 45． 0 ± 0 30． 0 ± 0＊＊
t1 /2Ka t /min 14． 8 ± 6． 4 15． 7 ± 8． 8 29． 0 ± 36． 6 21． 5 ± 15． 6*
Dose of Choerospondiatis fruit:20 g /kg，dose of Choerospondiatis fruit － Sandalwood:20 g /kg + 0． 6 g /kg． * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01 vs Choerospondi-
atis fruit
［参 考 文 献］
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［本文编辑］ 尹 茶