全 文 ：蒙药广枣中没食子酸在正常和气滞血瘀
家兔体内的药代动力学研究
西安交通大学-西北大学中草药现代化研究中心(西安 7l0069)
兰　薇　王世祥　房敏峰　骆　凯　杨　洁　郑晓晖
摘　要:目的:研究广枣酚酸溶液中没食子酸(GA)在正常和气滞血瘀家兔体内的药代动力学差异。方法:采用寒冷加注射
肾上腺素法制作家兔气滞血瘀模型 , RP-HPLC 法分别测定广枣酚酸溶液灌胃后正常和模型家兔的没食子酸血药浓度 ,
DAS2.0 药动学软件拟合房室模型 ,计算药动学参数 , 比较没食子酸在正常和模型家兔体内的药代动力学差异。结果:没食
子酸在正常和模型家兔体内药时曲线均呈二室开放模型 , 模型组的 Cmax 、AUC(0-t)、AUC(0-∞)比正常组显著增加。结论:广枣
酚酸溶液灌胃后其主要成分没食子酸在病理动物体内吸收入血快 , 血药浓度增加 ,对心血管疾病有较好的疗效。
关键词:没食子酸;广枣;药代动力学;气滞血瘀
中图分类号:R291.2　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2007)06-0048-02
　　蒙药广枣是漆树科南酸枣属植物南酸枣(Choerospondi-
as axillaries(Rox.)Burtt etHill.)的干燥成熟果实 ,具有行气活
血 、养心安神的功效 , 临床上用于气滞血瘀 , 心悸气短等心
疾病症〔1〕。现代药理研究表明 ,广枣中的没食子酸(GA)具
有明显的抗氧化 、清除自由基抑制血小板聚集作用等活性 ,
对气滞血瘀病症应有一定的疗效〔2-3〕。
目前 ,广枣中没食于子酸在正常家兔体内的药代动力
学已有报道〔4〕 , 而其在病理状态下的药代动力学过程尚未
见报道。本试验采用寒冷加注射肾上腺素致肝气郁结和寒
凝型血瘀家兔模型〔5〕 , 采用 RP-HPLC 法测定模型家兔血
浆中没食子酸的浓度 ,研究广枣中没食子酸在病理状态下
的药代动力学 ,分析其在正常家兔体内的药代动力学差异 ,
可为广枣在体内作用的物质基础研究提供一定的理论依
据。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂:广枣药材(产地:湖南 ,购于陕西省药材
公司 ,由陕西省药品检验所进行鉴定);没食子酸对照品(中
国药品生物制品检定所 ,批号:1100831-200302):盐酸肾上
腺素注射液(天津金耀氨基酸有限公司 , 批号:0607061):肝
素钠注射液(江苏万邦生化医药股份有限公司 , 批号:
0511101);色谱纯甲醇(美国 Fisher公司);实验用水为超纯
蒸馏水(自制);其他试剂均为分析纯。
1.2　仪器与设备:Agilent 1100 系列高效液相色谱仪 ,包括
在线脱气机 、四元梯度泵 、自动进样器 、柱温箱和二极管阵
列检测器(美国安捷伦公司);TGL-16G 高速离心机(上海
安宁科学仪器公司);BF2000 氮气吹干仪;SK-1 型快速混
匀器;Maxima超纯水机(基因公司 ,美国)。
1.3　动物:新西兰大白兔(由西安交通大学实验动物中心
提供 ,批号:医动字第 08-018 号), ♂♀兼用 ,体重 1.9～ 2.
2kg。
1.4　药材提取:取广枣药材粉末(过 20～ 40 目筛)100.0g
置于 2000ml圆底烧瓶中 ,加 8 倍量水 , 加热回流 3 次 , 每次
2.0h , 抽滤 , 合并滤液 , 减压浓缩至 100ml。加 30ml水饱和
正丁醇萃取数次至正丁醇层接近无色 , 合并正丁醇层 ,减压
浓缩至无醇味。残渣置于蒸发皿中 , 在-0.09MPa、70℃条
件下真空干燥 48h 后 , 加水定容于 100.0ml的棕色容量瓶
中 ,作为广枣酚酸溶液 , 4℃冷藏备用。
1.5　动物实验设计:取健康新西兰家兔 12 只 , 体重 1.9 ～
2.2kg , 随机分为正常组和模型组 , 每组 6 只。模型组按 1.
5mL·kg-1的剂量注射盐酸肾上腺素 , 注射 2h 后 , 将其浸入
冰水中冷刺激 6.0min , 4h 后 , 再次注射等剂量的盐酸肾上
腺素。处置后 ,禁食不禁水 , 得到气滞血瘀模型 , 以血球压
积 、血沉 、K 值 、高 、低切变率下的全血比黏度及还原黏度 、
血浆比黏度 、红细胞电泳时间等为检测指标5。 造模 18h
后 ,正常组和模型组分别给药 ,均按 5g·kg-1的剂量灌胃广
枣药材酚酸水溶液 , 给药后 0 , 10 , 30 , 45 , 60 , 75 , 90 , 120 , 180 ,
300 , 480 , 720min 于耳缘静脉取血 1.0ml ,置于肝素化离心管
中 , 8000r·min-1离心 10.0min ,分离血浆 , 于-20℃冻存。
1.6　血药浓度的测定
1.6.1　色谱条件:色谱柱:U1ti mateTM XB-C18(4.6mm×
250mm , 5μm);流动相:A 为 0.2%的甲酸水溶液 , B 为 0.2%
的甲酸甲醇溶液 , A:B=92:8(V:V):流速为 0.8ml·min-1;
检测波长为 270nm;柱温为 30℃:进样量为 50μl。 结果表
明 ,在此检测条件下 ,空白血浆 、空白血浆加标及含药血浆
的 HPLC图如图 1。
1.6.2　对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品 2.
2mg ,加甲醇定容于 10.0ml棕色容量瓶中 , 摇匀 , 配制成浓
度为 0.22mg·ml-1储备溶液。
48　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2007 年 6月第 6 期
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2007.06.035
1.6.3　样品处理:取 1.5 项下血浆 0.5ml , 加 1.5ml 1.5%
(V V)的磷酸乙腈溶液沉淀蛋白 , 旋涡1.0min , 离心 10.0min
(8000r·min-1), 取上清液于离心管中 ,氮气吹干 , 残渣加 0.
5ml流动相溶解 , 0.45μm 微孔水系膜滤过 , 备用。
图 1　A 为空白血浆的HPLC图;B为空白血浆加标的 HPLC图;
C为含药血浆的HPLC图;1为没食子酸
2　结　果
2.1　方法学考察:以没食子酸的浓度(X , μg·ml-1)为横坐
标 ,色谱峰峰面积为纵坐标(Y , A)进行线性回归 , 所得回归
方程及相关系数分别为:y=219.1x+1.7156 , r=0.9998(n=
6), 线性范围为 0.0019 ～ 1.52μg·ml -1 。在本色谱条件下 ,
高 、中和低 3个浓度的日内和日间精密度(RSD)分别为 3.
29%, 3.67%, 1.34%(n=6)和 4.88%, 4.27%, 1.30%(n=
6),方法回收率为 95.13%, 98.59%和 98.71%, 方法专属性
良好 ,检出限为 0.0019μg·ml-1 。
2.2　血药浓度的测定:取 1.6.3 下血浆样品 50μl , 在拟定
色谱条件下进样分析 , 没食子酸保留时间为 11.5min ,测定
没食子酸血药浓度 ,在正常和模型家兔体内的药-时曲线
见图 2。
图 2　没食子酸在家兔体内的药-时曲线
2.3　药代动力学参数:DAS2.0 药代动力学处理软件对所
得数据进行统计分析 ,所得正常组和模型组的主要药代动
力学参数见表 1。
表 1　没食子酸在正常和气滞血瘀
家兔体内的主要药代动力学参数
药物动力学参数
(单位)
测定结果(X±SD)
正常组 模型组
Kα(min-1) 0.025±0.028 0.029±0.016
t1 2(Ka)(min) 50.169±27.599 33.275±24.797
t 1 2α(min) 69.315±1.867 69.315±0.614
t 1 2β(min) 69.315±2.418 69.315±1.251
tmax(min) 78.0±24.648 120±0.032
Ctmax(ng·ml-1) 136.224+7.324 203.493+35.691
AUC0-t(ng ml·min) 28549.349+248.143 59698.389+401.527
AUC0-∞(ng ml·min) 67439.028+640.532 115223.509+758.276
CL F(L min kg) 492.992+69.056 228.957+38.972
3　讨　论
广枣酚酸溶液中的没食子酸在正常和气滞血瘀家兔体
内的药-时曲线均符合二室开放模型。实验结果表明模型
组中的 Cmax 、AUC(0-t 、AUC0-∞均明显增大 , 这提示没食子酸
在病理动物体内吸收入血快 , 血药浓度增加 ,对心血管疾病
有较好的疗效。没食子酸在正常组体内 t1 2(Ka)为 50.169±
27.599min , tmax为 78.0±24.648min , 面 模型组体内是 33.275
±24.797min和 120±0.032min ,这可能是由于气滞血瘀家兔
体内血流不畅,而使吸收半衰期和血药浓度达峰时间滞后。
本试验研究了广枣中的酚酸类成分没食子酸在病理状
态下的药代动力学 ,与其在正常家兔体内的药代动力学存
在明显的差异性 ,可为广枣在体内作用的物质基础研究提
供一定的理论依据。
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2007年 2 月 10 日收稿
492007年 6 月第 6期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志