全 文 ：　　　　　　　　　　　实验与技术
EXPERIMEN T &TECHNOLOGY
海洋科学/2009年/第 33卷/第 4 期
扁玉螺 、罗氏海盘车中牛磺酸的 HPLC测定
张　晾 ,耿　越 ,涂文利 ,张静静
(山东师范大学 生命科学学院 ,山东省动物抗性生物学重点实验室 ,山东 济南 250014)
摘要:利用高效液相色谱 OPA 柱前衍生法测定扁玉螺(Nevertia d idyma (Roding))肝脏 、腹足 , 罗氏海盘车
(Asterias rollestoni Bell)内脏 、体壁中牛磺酸的含量。实验结果表明 , 100 g(湿质量)样品中牛磺酸含量分别
为 535.2 、1 298.7、60.4 、31.7 mg。
关键词:牛磺酸;扁玉螺(Nevertia did yma (Roding));罗氏海盘车(Asterias rollestoni Bell);高效液相色谱
中图分类号:Q178.53;Q517　　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1000-3096(2009)04-0006-03
　　牛磺酸(β-氨基乙磺酸)又名牛胆碱 、牛胆素 ,是
一种非蛋白质游离氨基酸 ,是婴幼儿生长发育过程
中的必需氨基酸。它具有多种生理活性 ,如保肝利
胆 、降血压 、抗惊厥 、抗心率失常 、调节渗透压 、调节
内分泌等 ,更重要的是它对婴幼儿大脑发育 、神经传
导 、视觉能力的完善以及促进对钙 、脂肪的吸收具有
十分重要的作用 。我国有关部门所规划的食品添加
剂发展重点中把牛磺酸列为氨基酸类营养添加剂 ,
确定为应该采取措施鼓励发展的一个重要品种。
牛磺酸主要存在于人乳及海洋鱼类及贝类动物
中 ,其中海洋贝类动物中尤甚。已有的资料表明 ,马
氏珠母贝 、牡蛎 、翡翠贻贝等海洋生物中含量均较
高[ 1 ～ 3] ,而且研究显示在不同的组织中牛磺酸的含量
有差异[ 4] 。
扁玉螺(Nevert ia didyma (Roding))隶属软体
动物门 、前鳃亚纲 、玉螺科 ,是我国沿海的重要经济
贝类 ,其个体大 、肉味鲜美 、食后口感清香 ,广为沿海
居民喜爱 。国内外的研究主要集中在其形态结构 、
分布以及生理方面的研究 ,郑怀平等[ 5] 对其蛋白质
和脂肪进行过研究 ,然而其牛磺酸含量却未见报道 。
海盘车是广泛分布于浅海的一种肉食性棘皮动
物 ,国内有学者分别对多棘海盘车生殖腺 、体壁[ 6] ,
罗氏海盘车(Asterias rol lestoni Bell)生殖腺 、体壁的
营养成分进行过分析[ 7 , 8] ,但罗氏海盘车内脏和棘皮
中牛磺酸的含量尚未见报道。
本文用高效液相色谱柱前衍生法测定扁玉螺肝
脏 、腹足 ,罗氏海盘车内脏和体壁中的牛磺酸含量 ,为
进一步合理开发利用这两种海洋生物提供科学依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料与仪器
材料:罗氏海盘车 、扁玉螺均采集于山东省烟台
市牟平区 ,冷冻于-20℃冰箱中保存 。
试剂:邻苯二甲醛(OPA)(CP),牛磺酸(sigma
产品)、磺基水杨酸(中国医药集团上海化学试剂公
司 ,AR)、甲醇(天津市福晨化学试剂厂色谱纯)、四
氢呋喃(天津市大茂化学试剂厂 , AR)、2-巯基乙醇
(BBI 产品),冰乙酸 、无水乙酸钠 、硼酸 、四硼酸钠均
为国产分析纯 ,所用的水均为双蒸水 。
仪器:Agilent1100高效液相色谱仪 、二极管阵列
检测器 ,北京普析 TU-1810PC紫外可见分光光度计。
1.2　试验方法
样品预处理:将扁玉螺肝脏与腹足分离 ,罗氏海
盘车内脏与体壁分离 ,分别称取各部分组织 10 g ,剪
碎 ,加液氮研钵研磨 ,置玻璃匀浆器中匀浆 ,加少许水
加热煮沸 ,8 000 r/min离心 ,取上清液定容至 25 mL。
取 1 mL 样品溶液 ,加入 0.5 mL18%磺基水杨酸溶
液 , 10 000 r/min 离心 10 min沉淀蛋白质 ,取上清
液 1 mL 加入 0.5 mL 1 mo l/L 氢氧化钠溶液 ,混
匀 ,备用 。
衍生试剂:取 OPA 50 mg 溶解于 2 mL 甲醇 ,
加 8 mL 硼酸盐缓冲液(pH9.0)和 50 μL 2-巯基乙
醇 ,摇匀 ,避光放置 。
标准溶液的配制:精确称取 50 mg 牛磺酸 ,双
蒸水溶解后定容至 50 mL ,4℃保存 ,用时稀释成为
25 、50 、75 、100 、125 、150 mg/ L。
检测波长的确定:由于牛磺酸本身没有光吸
收 ,牛磺酸在碱性条件下与衍生试剂反应 ,生成的
收稿日期:2007-02-10;修回日期:2007-06-10
基金项目:山东省优秀中青年科学家奖励基金项目(109034)
作者简介:张晾(1979-),男 ,山东潍坊人 ,硕士研究生 , 从事海洋天然
产物研究;耿越 ,通信作者 ,电话:0531-86180196 , E-mail:gengy@sd-
nu.edu.cn
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EXPERIMENT &TECHNO LOGY
Marine Sciences/ Vol.33 , No.4/ 2009
衍生物具有光吸收。经测定 ,牛磺酸与衍生试剂的
衍生物在 330 nm 处有强吸收 ,因此采用 330 nm 作
为色谱的检测波长(图 1)。
衍生反应:吸取样液 100 μL 于 1.5 mL 离心管
中 ,加入衍生试剂 100 μL 混和均匀 ,衍生 1 m in ,立
即上样进行分析 。整个过程严格控制时间。
色谱柱:Eclipse Zorbax-C18(4.6×250 mm);流
动相为甲醇∶0.05 mo l/L 醋酸钠缓冲液(pH 5.8)∶
四氢呋喃=29∶70∶1;流速:1.3 mL/min;进样量:20
μL;检测波长:330 nm;室温。
图 1　衍生试剂 1 和牛磺酸衍生物 2波长扫描图谱
Fig.1 　Full spectrum chromato gr am of deriv ative rea-
gent 1 and Tau-OPA 2
2　实验结果
2.1　线性关系与回收率测定
线性关系:取不同浓度的牛磺酸标准溶液各
100 μL ,加入 100μL 衍生试剂衍生 ,进样 20μL ,在相
同的色谱条件下 25 ～ 150 mg/ L浓度范围内得峰面积
(Y)与进样浓度(X)的直线回归方程:Y =12.662X -
92.573 ,R2 =0.998 4。牛磺酸在该浓度范围内呈很好
的线性关系 。牛磺酸标准色谱图见图 2。
图 2　牛磺酸标准色谱图
Fig.2　Standard chroma tog ram of taurine
回收率测定:同一样品分别加入不同量的牛磺
酸 ,测定回收率 。该方法回收率为 98%～ 103%。
2.2　精密度测定
同一样品重复进样 5次 ,峰面积重复性较好 ,变
异系数(CV)为 1.96%。
2.3　样品中牛磺酸含量
根据前述色谱条件 ,对扁玉螺肝脏 、腹足和罗氏
海盘车内脏 、体壁中牛磺酸含量进行 HPLC 分析 ,色
谱图见图 3 ～ 6。将峰面积值(Y)代入直线回归方
程 ,计算得样品中牛磺酸含量 ,结果见表 1。
图 3　扁玉螺肝脏色谱图(稀释 5 倍)
F ig.3　Ch romato gr am of liver in Nevertia d idyma (Ro-
ding)(diluted 5 times)
图 4　扁玉螺腹足色谱图(稀释 50 倍)
F ig.4 　Chromatog ram of abdominal foo t in Nevertia
didyma (Roding)(diluted 50 times)
图 5　罗氏海盘车内脏色谱图
Fig.5　Chroma to g ram of visce ra in Asterias rollestoni Bell
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海洋科学/2009年/第 33卷/第 4 期
图 6　罗氏海盘车体壁色谱图
Fig.6　Chroma to g ram of body w all in Asterias rollestoni Bell
表 1　扁玉螺 、罗氏海盘车不同部位牛磺酸质量比
Tab.1　The contents of taurine in different parts of Nevertia
didyma (Roding)and Asterias rollestoni Bel1
样品 部位 质量比(mg/ g)
扁玉螺
肝脏 5.352
腹足 12.987
罗氏海盘车
内脏 0.604
体壁 0.317
3　讨论
流动相的极性以及流速对各成分的分离影响明
显 ,对流动相的极性以及流速进行了多次试验 ,最终
确定为甲醇∶0.05 mo l/L 醋酸钠缓冲液(pH5.8)∶
四氢呋喃=29∶70∶1;流速:1.3 mL/min ,在该色
谱条件下 25 min内能够将牛磺酸与其他成分很好
地分离 ,从而消除了其他成分的干扰 。该方法样品
处理简单 ,避免了梯度洗脱的繁琐 ,较短时间就能够
实现牛磺酸的定量测定。
扁玉螺作为广为人们喜爱的沿海重要的食用贝
类 ,其味道鲜美 ,实验结果显示 ,其腹足中牛磺酸含
量极高为 12.987 mg/g ,与牡蛎中含量相当 ,因此其
营养价值和药用价值值得进一步研究 ,可以作为一
种重要的海洋贝类进行开发 ,而其肝脏中含量却低
得多(5.352 mg/g),说明牛磺酸在扁玉螺中分布有
明显的组织差异 。
罗氏海盘车是海洋贝类动物的天敌 ,其大量繁
殖影响了贝类的养殖 ,造成不少的经济损失 。近几
年国内外科学家对其进行了广泛的研究 ,发现其体
内具有皂甙类成分及抗氧化 、抗心率失常成
分[ 9 , 10] ,显示出其重要的开发价值。本实验中测得
罗氏海盘车内脏中牛磺酸含量为 0.604 mg/g ,较
已报道的多棘海盘车生殖腺 0.75 mg/g 偏低[ 11] ,
可能与种属差异 、生活环境 、生长季节及提取方法
等原因有关 。总之 , 我国海星类动物资源十分丰
富 ,体内的牛磺酸含量相对丰富 ,这对于海盘车的
进一步开发提供了重要依据 ,其作为药物 、食品 、饲
料开发前景极为乐观 。
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08.
The local polynomials fitting methods on geospatial data mer-
ging:An application to the multi-resources marine sediment
thickness data
WANG Jun , GAO Jin-yao , WU Zhao-cai , ZHANG Tao
(The Second Insti tute of Oceanography , S tate Oceanic Administrat ion , Hangzhou 310012 ,China)
Received:Sep., 3 , 2008
Key words:lo cal po lynomials interpolation method;geo spatial data me rging;multi-resources data;the model o f ma rine sedimen-
ta ry thickness
Abstract:This paper presents an inconsistent problem on multi-resources data merging.T he theo ry of the
local polynomials inte rpolation me thod w as int roduced.The successful application on const ructing the model
of marine sedimentary thickness w as discribed.Experiences for data collecting and merging we re provided.
(本文编辑:刘珊珊)
　
(上接第 8页)
Determination of taurine in Nevertia didyma (Roding)and
Asterias rollestoni Bell by HPLC
ZHANG Liang , GENG Yue , TU Wen-li , ZHANG Jing-jing
(Key Labo rato ry of Animal Resistant Bio logy , College o f Life Science , Shandong No rmal Universi ty , Jinan
250014 , China)
Received:Feb., 10 , 2007
Key words:taurine;Nevertia did yma (Roding);Asterias rollestoni Bel1;HPLC
Abstract:The contents of taurine in live r and abdominal foo t o f Nevert ia didyma (Roding)and in visce ra
and body w all of Asterias rol lestoni Bell were analyzed by high-performance liquid chromatography (HPLC).The
analysis w as based on the HPLC separation o f the opthaldialdehyde de riva tive of taurine.The results
show ed that the taurine contents of liver and abdominal foo t of N .d id yma(Roding), viscera and body w all
of A.rol lestoni Bel1 were determined to be 535.2 , 1 298.7 , 60.4 and 0.317 mg/g w et w eight sample , re-
spectively.
(本文编辑:张培新)
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