全 文 ：第 12卷
9 9 5 1
.
1
第 1期
总 6 2期
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Jo u rna l o fS hen ya n g Pha rm a e e、 , t i e a l U n iv e r s i t y
V o l
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1 2 N o
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1 9 9 5
1 P
.
2 1
S u m 6 2
广金钱草粗提物中多糖的含量测定
李惠芝 姚崇舜 陈济民 马正 霞` ,
沈 阳药科大学基础部 沈 阳 1 10 0 1 5
摘 要 应用分光光度法对广金钱草粗多糖中多糖的含量进行测定 , 测定波长为 5 2 0n m , 测
得多糖的含量为 27 . 72 % .
关键词 广金钱草 ; 多糖 ;分光光度法
分类号 R 9 3 2 . 1 2
广金钱草是中医用于治疗泌尿系统结石的传统中药 , 具有清热利湿 、 化砂石 、 利小便 、 理气
通淋 的作用 ,它的药用部分是全草 ,金钱草的煎剂 内服主治肾结石 , 还可治疗黄疽病 ,乳腺炎
等 . 中国药典 ( 1 9 90 年一部版 ) 已收载金钱草用水煎醇沉后 ,除去沉淀的滤液部分 , 浓缩干燥成
干浸膏 , 加适量辅料制成的石淋通片 , 具有治疗尿路结石 , 胆囊炎的作用 . 但金钱草治疗尿路结
石的进一步研究实验表明 , 水提醇沉得到的醇不溶物中的多糖部分对一水草酸钙 晶体生长抑
制作用最好 ,而且其抑制作用随多糖的浓度的增加而增强 〔, 〕 .
本实验对广金钱草多糖进行提取 ,并对其进行含量测定 ,这对于提高疗效 ,控制质量标准
具有很重要的意义 .
据 文献报道 , 多糖的含量 测定 方法有 酚 一硫酸 法 、 硫 酸一蕙酮法 、 3 , 5一二 硝基 水 杨酸 法
等 〔 , · 3〕 . 本实验选用 3 , 5一二硝基水杨酸法 (简称 D N S 法 ) 测定广金钱草粗多糖中多糖的含量 .
1 材料与仪器
广金钱草 D e s m o d i u m s t y r a e i f o l i u m ( O s b . ) M e r r ,葡萄糖 ( A R ) , 苯酚 ( A R ) , 3 , 5一二硝基水
杨酸 ( C P ) , 酒石酸钾钠 ( A R ) ,石油醚 , 9 5% 乙醇 ( A R ) ,氯仿 ( A R ) .
w F Z
一
8 0 0
一
D
Z 型紫外一可见分光光度计 .
2 广金钱草粗多糖的提取 分离
广金钱草 60 9
粗粉
石油醚 60 ~ 90 ℃ 回流 2 石
收稿 日期 : 1 9 9 3一 1 1一 0 9 第一作者 : 4 9 岁 , 女 , 副教授 1 )本校中药系 5 期学生
DOI : 10. 14066 /j . cnki . cn21 -1349 /r . 1995. 01. 007
沈 阳 药 科 大 学 学 报 1 2 卷
药渣 石油醚
除去溶剂
8 0 % 乙醇 回流提取 Zh
药渣
l
醇液
药渣弃去 水煎液
浓缩至 1 。 。 mL
浓缩液
C H C I
。 萃取
水层 C H C】3液
加乙醇至含醇量为80 %
静置过夜 , 过滤
沉淀 滤液
丙酮 , 无水乙醇交替洗至无 鞋质反应 , 60 ℃干燥
粗多糖 1 . 6 7 9
3 粗多糖中多糖的含量测定
3
.
1 D N S 试剂的配制
溶 解 结 晶 酚 6 . 9 9 于 2 . s m o l · L 一 ` N a O H 溶 液 1 5 . Zm L , 加 水 稀 释 至 6 9m L , 加
6
.
g g N a H SO
。 , 使其 溶解 , 得 到 甲液 , 称取酒石酸钾 钠 2 5 9 , 加到 2 . sm ol · L 一 ` N a O H 溶液
30 o m L 中 , 再加 1%的 3 , 5 一二硝基水杨酸 8 80 m L ,稍加热 ,使其完全溶解得到 乙液 . 甲液和 乙
液混合得到桔黄色试剂 , 置棕色瓶 中 ,室温下放置 7一 10 夭 , 备用 .
3
.
2 测定波长的选择
D N S 法测葡萄糖的最大吸收波长为 48 0 n m ,广金钱草多糖的最大吸收波 长为 4 76 n m . 本
1期 李惠芝等 :广金钱草粗提物中多糖的含量测定
实验对其显色稳定性进行考察 , 结果表 明 , D N S 法在最大吸收波长处酚酞显色不稳定 ,而在
5 2 0 n m 处 ,酚酞显色 4 h 内吸收值稳定 ,故测定波长选用 5 20 n m .
3
.
3 回归方程的建立
精密称定于 1 05 ℃干燥至恒重的葡萄糖 1 0 0 . 0 m g , 置 1 0 m L 容量瓶中 ,溶解并稀释至刻
度 ,混匀得标准溶液 . 依次精密量取 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6 , 。 . 8 , 1 . 0 , 1 . 2 , 1 . 4 m L 标准溶液 ,分别置 25
m L 容量瓶中 ,加水使各量瓶的总体积为 2 m L ,各精密加入 1 . 5 m L D N S 试剂 ,混匀 , 于沸水浴
中煮沸 5 m in ,取 出立即冷却 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 . 另以 。 . 2 m L 蒸馏水同样操作 ,做空白对
照 , 按分光光度法在 5 20 n m 处测 定吸收度 . 绘制标准 曲线 , 求出回归 方程 A - 一 0 . 0 5 8 7 +
0
.
7 7 0 4 C
, r = 0
.
9 9 9 6
.
3
.
4 广金钱草多糖水解条件的考察
精密称取广金钱草粗 多糖适量 , 于小烧杯中溶解 ,完全转移至 1 0 m L 容量瓶中 , 定容 ,滤
过 . 弃初滤液 , 精密吸取续滤液 s m L ,各加入一组 25 m L 的容量瓶 中 , 加 6 m ol · L 一 ` H 1C 5
m L
, 同时放入沸水浴 中 , 每隔 10 m in 取出一只量瓶 , 冷却 ,加酚酞指示剂 1滴 , 用氢氧化钠溶
液调至红色 . 加水稀释至刻度 ,滤过 , 精密吸取滤液 2 m L , 按回归方程项下方法 , 自 “ 各精密加
入 D N S 试液 1 . 5 m L ” 起 , 依法操作测定吸收度 , 结果见表 1 .
表 1 水解时间考察
水解时间 ( m i n )
吸收度 0 . 12 9 0 . 1 6 5 0 . 18 2 0 . 1 8 0 0 . 18 1 0 . 1 8 2
结果表明广金钱草多糖 30 m in 可水解完全 .
3
.
5 广金钱草粗多糖含最测定
3
.
5
.
1 供试品溶液的制备
精密称定金钱草粗多糖适量 , 置小烧杯 中加水溶解 (可稍加热 ) , 使完全转移至 1 0 0 m L 容
量瓶 中 , 并加水稀释至刻度 , 混匀 , 经脱脂棉滤过 , 弃初滤液 ,取续滤液为供试品溶液 .
3
.
5
.
2 汉.1试液的制备
精密量取供试品溶液 5 m L , 置 25 m L 容量瓶中 , 加 s m L 6 m ol · L 一 `的 H CI ,置沸水浴中
煮沸水解 30 m in ,取 出放冷 , 加酚酞指示剂 1滴 , 用氢氧化钠溶液调至红色放至室温 , 加水稀
释至刻度 ,摇匀 ,滤过 , 弃初滤液 , 续滤液即为测试液 .
3
.
5
.
3 校正液的制备
精密吸取供试品溶液 5 m L 于 25 m L 容量瓶中 ,加酚酞指示剂 1滴 ,用氢氧化钠溶液调至
红色 , 放至室温 ,加水稀释至刻度即得 .
3
.
5
.
4 测定方法
精密量取测试液 、 校正液各 2 m L , 分别置 25 m L 容量瓶中 ,各加 D N S 试剂 1 . 5 m L 混匀 ,
置沸水浴中煮沸 5 m in ,取出迅速冷却至室温 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 . 按分光光度法在 5 20 n m
处分别测定吸收度 . 以测试液的吸收度减去校正液的吸收度代入 回归方程进行计算 ,结果见表
2
.
沈 阳 药 科 大 学 学 报 1 2卷
表 2 粗多糖中多糖的含量
序号 △ A C ( m g )
0 2 6 7 1
0
.
3 9 8 2
0
.
4 4 90
G ( m g )
0
.
9 8 0 8
1
.
4 3 4 8
1
.
5 9 4 2
含量 (% ) 平均 %
0
.
1 7 3
0
。
2 7 7
0
.
3 1 8
0
.
0 25
0 02 8
0
.
() 3 0
0
。
1 4 8
0
.
2 4 9
0
。
2 8 8
2 7
.
2 4
2 7
.
7 5
2 8
.
2 6
2 7
.
7 2
A l
: 测试液吸收度 ; A: : 校正液 吸收度 ; A : A , 一 A : ; G : 加人粗多糖重量 . C : 测 出相 当于 葡萄糖的重 量 , 含量 一 c / G x
1 0 0呱
4 加样 回收率测定
将广金钱草粗 多糖加辅料适量制成胶囊后 , 取胶囊二粒 , 倾出内容物 ,混 匀 , 精密称取适
量 . 另加人精密称取 已知含量的粗多糖适量 ,加水溶解制成供试液 ,按测定方法测定 ,计算回收
率 , 结果见表 .3
表 3 加样 回收率测定结果
样品号 加人量 (m g ) 测定量 ( m g ) 回收率 ( % ) 平均值 ( % ) 变异系数 %
0
.
2 9 1 2
0
.
2 9 1 2
0
.
2 9 1 2
0
.
2 9 1 2
0
.
2 8 7 9
0
.
2 8 9 2
0
.
2 9 17
0
.
2 8 6 6
9 8
.
88
9 9
.
32
1 0 1
.
5
9 9
.
4 2
9 9
。
7 8 1
.
1 7
5 讨论
a
. 广金钱草粗多糖是带有色素的多糖 , 活性炭难以脱去其颜色 , 为了避免其带来的结果
偏高 ,本实验中测定校正液的吸收度 , 可简便有效地消除色素等干扰而带来的误差 .
b
. 本实验测定结果是以多糖的水解产物单糖来表示多糖的含量 .
参 考 文 献
1 李惠芝 , 袁志豪 ,魏永爆 . 广金钱草和川金钱草抑制一水草酸钙结 晶生长有效 部分研究 . 沈阳药学院学报 , 19 8 8 , 5 (3 ) : 2 ()8
任天池 ,赵盼英 ,康玉珍 . 复方多糖注射液的研 究 . 中草药 , 1 9 9 1 , 6 : 2 58
董文 慧 , 肖春娥 ,沙英威等 . 分光光度法测定云芝肝 泰中云芝 多糖的含量 . 中国药科大学学报 , 19 8 9 , 2 0 ( 3 ) : 1 75
(下转第 28 页 )
2 8沈 阳 药 科 大 学 学 报 1 2卷
D
一葡萄糖贰 .
化合物 习 为白色针晶 ,熔点 1 68 ~ 169 ℃ ( 甲醇 ) ,与标准品甘露醇共薄层 ,刀 , 值一致 ,红外
光谱一致 ,故鉴定化合物 xI 为甘露醇 .
致 谢 IR 光谱 由沈阳药科大学测试中心代测 ; ’ H 一 N M R 和 ” C 一N M R 由日本静圆具立大学药学部宫漱
敏男博士代测 ;药材由周荣汉教授鉴定 , 在此一并表示感谢 .
参 考 文 献
K T a k a h a s h i
,
M T a k a n i
.
S t u d i
e s o n t h e e o n
s t i t u e n t s o f t h e m e d i e i n a I p l a n t s X X I e o n
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: 2 6 8 9
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: 2 0 2 3
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.
N
e w r r i r e r p e n e s a即 n i n s f r o m l e x p u b e s e e n s . C h e m P h a rm B u l l , 1 98 7 , 3 5 ( 2 ) : 5 24
中国科学院上海药物研究所植物化学研究室 . 黄酮体 化合物鉴定手册 . 上海 : 科学 出版社 , 1 9 81 : 4 35
王军宪 ,侯桂宁 . 女贞花 化学成分研究 . 中国中药杂 志 , 1 9 90 , 15 ( 3 ) : 40
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A S T U D Y O N T H E C H EM I C A L C O N S T I T U E N T S O F
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I n a d d i t i o n t o t h o s e i n t h e p r i o r r e p o r t
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t h e a u t h o r s i s o l a t e d f o u r m o r e e o m p o u n d s f r o m
L ig u s t r u m l u e id u m A i t
.
C o m p o u n d 讥 15 1 9 a 一 h y d r o x y 一 3一 a e e t y l u r s o l i e a e i d , e o m P o u n d XI i s P -
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一各D 一 g l u e o s id e , e o m p o u n d X 15 e o s m o s s i n , a n d e o m p o u n d xl 15 m a n n it o l .
A m o n g t h e m e o m P o u n d Vl 15 a n e w l y d is e o v e r e d n a t r u a l p r o d u e t
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.
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3
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