全 文 ：收稿日期:2005-03-15。
基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目(黔科合中药专字 [ 2003] 45号)。
作者简介:毛堂芬(1970～ ),女 ,助理研究员;主要从事植物细胞和组织培养研究工作。
环草石斛试管苗壮苗培养的研究
毛堂芬 1　刘作易 2, 3　金家兴 4　朱国胜 1, 2　李 飞 　吴明开 1, 2
(1.贵州省农科院生物技术研究所　贵阳　550006;　2.贵州省农业生物技术重点实验室　贵阳　550006;
3.贵州省农业科学院　贵阳　550006　4.兴义市吉仁堂药业公司　贵州兴义　562400)
摘要:本文讨论了不同基本培养基(MS、KC、B5、1/2MS), 不同培养基添加物(马铃薯提取液 、香蕉汁)及浓度 、植物激素
(NAA、IAA、IBA)及浓度和培养基的 pH值等对环草石斛试管苗壮苗的影响。试验结果表明:壮苗阶段以 KC或 B5、
1/2MS为基本培养基较佳 , 添加 20%香蕉和 2.0mg/LNAA较好 ,培养基 pH5.5偏酸性环境适合于生长。
关键词　环草石斛　培养基　有机添加物　植物激素　pH值
StudiesontheSeedlingGrowthofDendrobiumloddigesiRolfeinVitro
MaoTangfen1 , LiuZuoyi2, 3 , JinJiaxing4 , ZhuGuosheng1, 2 , LiFei1 , WuMingkai1 , 2
(1.BiotechnologyInstitute, GuizhouAcademyofAgriculturalSciences, Guiyang, 550006;
2.TheKeyLaboratoryforAgri.BiotechnologyofGuizhou, Guiyang550006;
3.GuizhouAcademyofAgriculturalScience, Guiyang550006;
4.JiRenTangPharmaceuticalCo.Xingyi, Guizhou562400)
Abstract:Theefectsofdiferentbasicmedia(MS, B5, KCand1/2MS), diferentorganiccompounds(Po-
tatoextractandBananajuice)andconcentration, diferentplantgrowthregulatorsandconcentrationanddif-
ferentpHvaluesonthegrowthofDendrobiumloddigesiRolfeweredescribed.Experimentalresultsshowed
thattheKC, B5, 1/2MSmediumsweresuitabletothegrowth.20% bananajuiceincombinationwith2.0
mg/LNAAaddedapparentlypromotedrootformationandplantletgrowth.ThepHvalueof5.5 wasoptimal
forthegrowthofseedling.
Keywords　DendrobiumloddigesiRolfe　Culturemedium　Organiccompounds
Plantgrowthregulator　pH
环草石斛(DendrobiumloddigesiiRolfe)属兰科石斛属多年生草本植物 ,为贵州地道药材[ 1 ～ 3] ,是我国传统名
贵中药 。具有生津益胃 、清热养阴 、止咳润肺和抗血小板聚集之功效。我省兴义 、安龙等地是环草石斛野生资源
较多的产区 。由于药用石斛的开发逐渐深入和广泛利用 ,需求量日益增多。长期乱采滥挖 ,加之人类活动的增
加 ,环境污染和大量采伐树木 ,石斛赖以生存的特异环境遭到破坏 ,导致环草石斛资源日趋枯竭 ,被国家列为三级
濒危保护药用植物。环草石斛生长缓慢 ,自然繁殖率低 。为了解决人工栽培的种苗问题 ,利用组培快繁技术繁殖
药用石斛种苗的研究也有很多报道 [ 4 ～ 6] ,但对环草石斛的研究较少[ 7] 。为保护和综合开发利用该资源 ,我院同兴
义市吉仁堂药业公司合作进行了组培成苗研究 。近两年来 ,我们对环草石斛组培快繁的研究结果表明 ,利用茎段
培养成苗快 ,苗壮 ,但繁殖系数低;种子无菌培养比茎段培养获得的试管苗至少多数万倍 ,但生长周期长 ,苗弱。
为实现工厂化生产提供大量生长整齐 、健壮的优质组培苗 ,以提高移栽成活率。为此 ,我们探讨了培养基 、植物激
素 、天然添加物及培养基 pH值等与环草石斛壮苗的关系。
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第 24卷第 6期　　2005年 6月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　Vol.24No.6　Jun.　2005
DOI :10.16590/j.cnki.1001-4705.2005.06.042
表 1　不同基本培养基对试管苗生长的影响
基本
培养基
苗高
(cm)
茎粗
(cm)
叶数
(片)
根数
(条)
根长
(cm) 叶色
1/2MS 1.75 0.21 5.94 4.22 5.25 绿色
MS 1.29 0.19 6.40 5.45 2.84 黄绿
B5 1.55 0.19 6.20 4.95 5.41 浓绿
KC 2.01 0.20 6.40 5.65 5.96 浓绿
表 2　不同生长激素及浓度对试管苗生长的影响
生长素 浓度(mg/L)
苗高
(cm)
茎粗
(cm)
叶数
(片)
根数
(条)
根长
(cm) 叶色
ck 0 1.24 0.19 5.45 4.75 4.69 绿
NAA 0.5 1.24 0.19 5.10 4.05 5.21 绿
1.0 1.17 0.20 5.20 4.75 4.92 绿
2.0 1.81 0.27 6.55 5.55 6.03 浓绿
4.0 1.79 0.23 7.10 7.50 5.13 绿
IBA 0.5 1.34 0.21 5.36 4.64 5.48 绿
1.0 1.35 0.24 5.55 4.05 5.70 绿
2.0 1.35 0.22 4.80 4.50 5.95 绿
4.0 1.19 0.22 5.35 4.45 5.51 绿
IAA 0.5 0.95 0.22 4.95 4.00 4.93 绿
1.0 1.39 0.24 5.30 5.05 6.01 绿
2.0 1.08 0.23 4.95 4.35 6.00 绿
4.0 1.28 0.22 5.35 4.95 5.55 绿
表 3　不同天然添加物及浓度对试管苗生长的影响
添加物 浓度(mg/L)
苗高
(cm)
茎粗
(cm)
叶数
(片)
根数
(条)
根长
(cm) 分枝 叶色
ck 0 0.99 0.19 3.45 3.65 2.28 1.45 绿
香蕉 10% 1.06 0.20 3.75 4.80 4.64 1.75 绿
20% 1.64 0.26 8.20 8.80 3.18 3.35 浓绿
30% 1.43 0.26 9.15 9.20 2.72 3.40 绿
马铃薯 10% 0.91 0.17 4.25 4.05 6.32 1.50 绿
提取液 20% 1.29 0.20 5.30 4.70 5.44 1.50 绿
30% 1.14 0.20 5.20 4.60 5.15 1.45 绿
1　材料与方法
1.1　材料
环草石斛野生植株与蒴果采自贵州省安
龙县德卧自然保护区 。摘取成熟的蒴果经表
面消毒后 ,在无菌操作条件下切开果皮 ,取少
许种子撒播在 1/2MS培养基表面 ,待种子萌
发成幼苗。选择苗高约 0.5cm, 2片真叶 ,
0 ～ 2条短根的幼苗 ,作为供试材料。
1.2　方法
1.2.1　基本培养基试验:采用 1/2MS、MS、
B5、KC等 4种为基本培养基。分别添加
NAA0.5mg/L、20%马铃薯提取液 、2%蔗糖
和 0.7%琼脂粉 , pH5.8。
1.2.2　不同生长素及浓度试验:分别添加
IAA、IBA、NAA等 3种生长素 , 浓度分别为
0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L,以不加为对照。
1.2.3　天然添加物及浓度试验:马铃薯提取
液 10%、 20%、30%;香蕉 10%、20%、30%。
以不加为对照。
1.2.4　培养基酸碱度试验:pH分别为 4.5、
5.0、5.5、6.0共 4个处理。
上述试验的基本培养基为 1 /2MS+
NAA0.5mg/L+20%马铃薯提取液 +2%蔗
糖 +0.7%琼脂粉 , pH5.8。除特别指出外。
培养温度(25±2)℃,每天光照 12h,光照强
度 1 500 ～ 2 000lx。培养 110d后 ,各处理随
机抽取 5瓶对试管苗进行生长状况的测定 。
2　结果与分析
2.1　不同基本培养基对试管苗生长的影响
幼苗在 4种培养基上生长情况见表 1。在 KC培养基上幼苗生长良好 ,苗高 ,叶色浓绿 ,根系发达 ,且长度较
均匀;其次为 B5和 1/2MS培养基。在 MS培养基上植株长势最差 ,产生斑状病叶和死亡 ,根系较短细弱 。
2.2　不同生长激素及浓度对试管苗生长的影响
适宜的生长素及浓度有利于试管苗的生长(表 2)。添加 NAA和 IBA的培养基 ,试管苗长势均比不加生长素
的较好 ,其中添加 NAA2.0mg/L的培养基 ,苗高大 ,茎粗 ,叶色浓绿 ,根系发达且长度较均匀 ,试管苗的综合素质
好;其它处理的则根细 ,长短不整齐。当处理浓度达到 NAA4.0mg/L时 ,根生长不正常 ,变黑。
表 4　pH值对试管苗生长的影响
pH 苗高(cm)
茎粗
(cm)
叶数
(片)
根数
(条)
根长
(cm) 叶色
4.5 1.13 0.18 5.25 4.75 5.08 绿
5.0 1.18 0.20 5.45 4.60 5.89 绿
5.5 1.35 0.20 5.35 4.60 5.73 浓绿
6.0 1.28 0.22 5.55 4.10 5.91 绿
2.3　不同天然添加物及浓度对试管苗生长的影响
试验结果表明(见表 3),添加香蕉和马铃薯提取液对
试管苗均有促进作用 。香蕉比马铃薯提取液更有利于培养
优质的试管苗 ,如添加 20%和 30%香蕉的培养基上 ,苗较
高 ,茎粗 ,叶色浓绿 ,分枝多 ,根系发达且根上发生侧根 ,长
度较整齐 ,试管苗长势明显优于其它处理 。从植株的综合
长势及降低成本考虑 ,以添加 20%香蕉较好 。(下转第 44页)
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3.4　化感物质所产生的自毒作用可能干扰了生长素类物质的合成 ,使根 、茎细胞的伸长受到抑制 ,但关于化感物
质影响激素代谢的作用机制 ,目前尚无明确结论;或者是化感物质抑制了对营养物质的吸收和利用 。POD是细
胞保护系统的主要酶之一 ,对多种逆境都比较敏感 ,被认为在植物抵抗病原菌侵入中起重要作用 [ 9] 。本试验 “重
茬 ”幼苗呈显著下降趋势与前人研究结果有所不同 [ 10] ,其原因有待进一步研究 。 “重茬”幼苗电导率的增加意味
着根系将养分离子向土壤中渗漏显著增加 ,土壤中的化感物质 、病原物质更容易进入根细胞 ,危害根系;“重茬 ”
幼苗 TTC活力的降低标志根系的生长和代谢受到明显抑制 ,从而影响根系对养分的吸收。
3.5　为了避免有毒物质的积累 ,防止自毒作用 ,可以通过调整耕作制度 ,采用轮作 ,避免单一作物的连年种植。
只要时间足够 ,残留于土壤中的有毒物质可以挥发 、分解或被土壤吸附固定 ,而使浓度降低到临界浓度之下 ,降低
有毒物质对作物产生毒害作用 。
参考文献
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9　许勇 ,王永建.枯萎病菌诱导的结构抗性核相关酶活性的变化与西瓜枯萎病抗性的关系.果树科学 , 2000, 17, (2):123～ 127.
10　吴凤芝 , 黄彩红.酚酸类物质对黄瓜幼苗生长及保护酶活性的影响.中国农业科学 , 2002, 35, (7):821 ～ 825.
(上接第 22页)
2.4　pH值对试管苗生长的影响
培养基的酸碱度在 pH值为 5.0 ～ 6.0对试管苗的生长影响不大(表 4)。但在 pH值为 5.5 ～ 6.0时 ,试管苗
的根系较粗壮 ,且长有较多假根毛;pH值为 5.5时 ,苗较高 ,叶色浓绿 。
3　小结
环草石斛的果实为蒴果 ,每个蒴果有几万粒种子 ,但种子极小 ,呈黄色粉末状 ,仅有种胚 ,无胚乳 ,在自然条件
下很难萌发成苗 。通常以分株繁殖 ,但繁殖系数低 。我们利用成熟的种子无菌播种在适宜的培养基上 ,并在一定
的温 、光条件下培养 ,种子萌发率达 90%以上 ,再用种子萌发产生的原球茎增殖 、分化成苗 ,繁殖系数可以提高若
干倍 ,但种子萌发成苗的生长期较长 ,苗较细弱 ,要把试管繁殖用于实际生产 ,培育试管壮苗是保证移栽成活率的
重要因素。本项研究结果表明 ,应用于实际生产时 ,可以采用 KC或 1/2MS或 B5做基本培养基 ,另外添加
2mg/LNAA和 20%香蕉 ,培养基的 pH值调整为 5.5左右时有利于培养健壮 、高大的优质组培苗 。
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