全 文 ：【论著】
灰树花多糖免疫调节及抗辐射损伤作用研究
颜　燕 ,杨　非 ,姚文环 ,郭　婕
中图分类号:Q691　文献标识码:A　文章编号:1004-714X(2010)01-0006-02
　　【摘要】　目的　观察灰树花多糖对小鼠免疫功能和辐射损伤的影响。方法　将小鼠随机分为溶剂对照组和 3
个试验剂量组 , 剂量分别为 0.15g/kg、0.30g/kg、0.90g/kg, 每天灌胃給予 ,连续 30d后 ,检测 7项免疫指标。另取小鼠 ,
按体重随机分为辐射对照组和 3个试验剂量组 , 剂量设计和给药方式同上 , 30d后 , 各组均以 60Co-γ射线进行一次全
身照射 , 根据检测指标选择不同的照射剂量。辐照前 、辐照后第 3和 14天进行外周血白细胞计数;辐照后第 3天进行
骨髓细胞 DNA含量检测:辐照后第 7天进行血清超氧化物歧化酶(SOD)活力测定。结果　灰树花多糖能显著提高小
鼠的抗体生成细胞数和血清溶血素水平 , ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力和 NK细胞活性明显增强 , 碳廓清指数 、腹
腔巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组。灰树花多糖能显著提高受 60Co-γ射线照射小鼠的外周血白细胞数和骨髓细
胞 DNA含量 , 明显增强血清超氧化物歧化酶(SOD)活力。结论 　灰树花多糖能增强小鼠的细胞免疫和体液免疫功
能以及单核 -巨噬细胞吞噬功能 , 对辐射损伤具有一定的防护作用。
【关键词】　灰树花多糖;免疫;辐射损伤;SOD;60Co-γ射线
TheStudyontheImmunoregulationandAnti-radiatingDamageofMaitakePolysaccharideinMice.YANYan, YANG
Fei, YAOWen-huan, GUOJie, etal.ShandongCenterforDiseaseControlandPreventionJinan250014.
【Abstract】　Objective　ToinvestigatetheinfluencesforMaitakePolysaccharideontheImmunoregulationandanti-
radiatingdamage.Methods　Themiceweredividedintocontrolgroupandthreeexperimentgroups.Themiceofthreeexperi-
mentgroupswerefedMaitakePolysaccharideatdoseof0.15g/kg、0.30g/kg、0.90g/kgfor30 days.7indexeswereobserved
todetecttheeffectofMaitakePolysaccharideontheimmunoregulation.Theothermiceweredividedintoradiatingcontrol
groupandthreeexperimentgroups.Themiceofthreeexperimentgroupswerefedinthesameway.Thenalanimalswerera-
diatedby60Co-γ.Thenumberofwhitebloodcells(WBC)wascountedbeforeradiating, on3 and14 dayafterradiating.
TheDNAcontentofbonemarrowcellsweremeasuredon3 daysafterradiating.Theactivitiesofsuperoxidedismutase(SOD)
inserumweremeasuredon7daysafterradiating.Results　MaitakePolysaccharidecouldincreasetheamountofhemolytican-
tibodyinserum.TheproliferationofConA-inducedmitogenicresponseforspleenlymphocytewasalsoincreased.Maitake
PolysaccharidecouldenhancetheactivityofNKcelandtheabilityofphagocytosissignificantly.Comparedwiththeradiating
controlgroup, thenumberofWBCandtheDNAcontentofbonemarrowcells, andtheactivitiesofSODinserumincreased
significantly.Conclusion　MaitakePolysaccharidecanimprovecel-mediatedandhumoralimmunefunctionandnon-spe-
cificimmunefunction, andprotectthemicefromradiationinjuries.
【Keywords】　MaitakePolysaccharide;Immune;RadiatingDamage;SOD;60Co-γ
作者单位:山东省疾病预防控制中心 ,山东　济南　 250014
作者简介:颜燕(1965～ ),女 ,山东济南人 ,副主任医师,从事保健食品功能与毒理学评价工作。
　　放疗是临床上治疗恶性肿瘤的重要手段之一 , 在放疗过程
中患者易导致白细胞减少和机体抵抗力降低 ,进而影响放疗疗
效。利用天然植物中的有效活性成分 , 增强机体免疫力 , 防止
或减轻辐射对人体的损伤 ,是提高肿瘤治疗疗效的重要途径之
一 , 在辐射防护中显示出越来越重要的地位。多糖是天然植物
中的主要活性成分之一 , 具有抗感染 、抗肿瘤 、抗病毒 、增强免
疫等多方面的生理功能 [ 1] 。本试验以小鼠为试验对象 ,研究灰
树花多糖的免疫调节和辐射防护作用。
1　材料和方法
1.1　受试物　由山东某药业公司提供。
1.2　实验动物　SPF级 ICR小鼠 ,雌性 , 体重 18 ～ 22g,由北京
维通利华实验动物技术有限公司提供 , 许可证号为 SCXK(京)
2007-0001。饲养环境为屏障级动物室。
1.3　主要仪器与试剂　洁净工作台 、CO2培养箱 、SpectramaxPLUS型酶标仪 、电子天平 、显微镜 、数显游标卡尺(精密度 0.01
mm)等;SRBC、鸡红细胞 、YAC-1细胞 、补体 (豚鼠血清)、
Hanks液 、SA缓冲液 、Tris-HCl缓冲液 、LDH基质液 、PBS缓冲
液 、Giemsa染液 、RPMI1640细胞培养液 、琼脂糖 、印度墨汁 、都
氏试剂 、1%NP40、ConA、MTT、SOD试剂盒(南京建成生物工程
研究所)。
1.4　实验方法 [ 2]
1.4.1　动物分组与剂量选择　取 192只小鼠按体重随机分为
4个大组 , 每个大组 48只 , 内设 3个剂量组(0.15g/kg、0.30g/
kg、0.90g/kg)和 1个溶剂对照组。经口灌胃给予受试物 , 溶剂
对照组给予同体积蒸馏水 ,每日 1次 , 连续 30d后进行小鼠免
疫功能指标测定。另取 144只小鼠 , 按体重随机分为 3个大
组 ,每个大组 48只 ,内设 3个剂量组和 1个辐照模型对照组。
剂量设计和给药方式同上 ,进行抗辐射指标检测。
1.4.2　细胞免疫功能指标检测　①迟发型变态反应(DTH):小
鼠腹腔注射 2%(V/V)SRBC,致敏后 4d测量左后足跖厚度 ,然
后在测量部位皮下注射 20%(V/V)SRBC, 注射后 24h测量左后
足跖部厚度 ,同一部位测量三次 ,取均值。以攻击前后足跖厚度
差值(足跖肿胀度)来表示 DTH的程度。 ②ConA诱导的小鼠脾
淋巴细胞增殖能力(MTT法):无菌取脾 ,制成 3×106个 /ml脾细
胞悬液 ,分两孔加入 24孔培养板中 , 每孔 1 ml, 一孔加入 75μl
ConA液 ,另一孔作为对照 , 置 5%CO2 、37℃培养箱中培养 72h。
培养结束前 4h,每孔吸取上清液 0.7ml, 加入 0.7 ml不含小牛血
清的 RPMI1640完全培养液 ,同时加入 MTT50μl, 继续培养 4h。
培养结束后 ,每孔加入 1ml酸性异丙醇 , 吹打均匀使紫色结晶完
全溶解 ,在 570nm波长处测定 OD值 ,以加 ConA孔的 OD值减去
不加 ConA孔的 OD值表示淋巴细胞增殖能力。
1.4.3　体液免疫功能指标检测　①血清溶血素测定:小鼠腹
腔注射 SRBC免疫 5d后 ,取血清用 SA缓冲液稀释 200倍。将
稀释后的血清 1mL置试管内 , 依次加入 10%(V/V)SRBC0.5
·6· 中国辐射卫生 2010年 3月第 19卷第 1期　ChinJRadiolHealth, March2010, Vol19, No1　DOI :10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2010.01.046
mL、补体 1mL(用 SA液按 1∶8稀释)。另设不加血清的对照管
(以 SA液代替)。置 37℃恒温水浴中保温 20min后冰浴终止
反应 , 离心取上清液 1mL,加都氏试剂 3mL, 同时取 10%(V/V)
SRBC0.25mL加都氏试剂至 4mL,充分混匀 , 放置 10min后 , 于
540nm处测定光密度值。计算半数溶血值(HC50)。 ②抗体生
成细胞检测:SRBC免疫 5d后 , 取脾制成细胞悬液。将表层培
养基加热溶解后与等量双倍 Hanks液混合 , 分装小试管 , 每管
0.5ml, 再向管内加 50μl10% SRBC(V/V, 用 SA液配制)、20μl
脾细胞悬液 , 迅速混匀后 , 倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上 ,
待琼脂凝固后 , 将玻片水平扣放在玻片架上 , 放入 CO2培养箱
温育 1.5h, 然后用 SA液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽
内 , 继续温育 1.5h后 , 计数溶血空斑数。
1.4.4　单核 -巨噬细胞功能指标检测　①小鼠碳廓清指数:
小鼠尾静脉注射 1∶3稀释的印度墨汁 , 待墨汁注入立即计时 ,
注入墨汁后 2、10min, 分别从内眦静脉丛取血 20μl,并将其加
到 2mlNa2CO3溶液中 , 用紫外可见分光光度计在 600nm波长处
测光密度值。将小鼠处死 , 取肝和脾脏称重 , 计算廓清指数。
②小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数:小鼠腹腔注射 20%鸡红细胞悬
液 1ml,间隔 30min处死 ,固定于鼠板上 , 剪开腹壁皮肤 ,注射生
理盐水 2ml,转动鼠板 1min, 吸出腹腔洗液 1ml, 分滴于 2片玻
片上 , 37℃温育 30min,用生理盐水漂洗 ,晾干 ,以 1∶1丙酮甲醇
溶液固定 , Giemsa染液染色 10min, 漂洗晾干 ,镜检 , 计算吞噬率
和吞噬指数。
1.4.5　NK细胞活性测定　实验前 24h将 YAC-1细胞(靶细
胞)传代培养 , 用 RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为 4 ×
105个 /ml。无菌取脾 , 制备脾细胞悬液 ,用 Hanks液洗 2次 , 弃
上清 , 沉淀中加入 3mlNH4Cl裂解液裂解红细胞 , 10min后再加
入 7mlHanks液 , 离心 10min(1 000r/min),用 RPMI1640完全培
养液调整细胞浓度为 2 ×107 个 /ml。 取靶细胞和脾细胞各
100μl(效靶比 50∶1),加入 96孔培养板中 , 靶细胞自然释放孔
加靶细胞和培养液各 100μl,靶细胞最大释放孔加靶细胞和 1%
NP40各 100μl, 于 37℃、5% CO2培养箱中培养 4h, 离心 ,取上
清 100μl置 96孔酶标板中 , 加入 LDH基质液 100μl, 反应
6min,以 1mol/L的 HCl终止反应 , 在酶标仪 490nm处测光密度
值 , 计算 NK细胞活性。
1.4.6　抗辐射能力指标检测　①外周血白细胞计数:取小鼠
尾血计数白细胞总数 ,并依此为指标随机分为辐照模型对照组
和三个剂量组 , 在实验的第 30天各组均以 4Gy60Co-γ射线照
射一次 , 剂量率为 0.25Gy/min, 照射后第 3、 14天作白细胞计
数。②小鼠骨髓细胞 DNA含量检测:剂量组和辐照模型对照组
小鼠均以 4Gy60Co-γ射线照射一次 , 剂量率为 0.25Gy/min, 照
射后第 3天处死小鼠 , 取股骨 , 用注射器吸取 4mlHanks液 , 冲
出股骨中的全部骨髓细胞 , 在 260nm处测定光密度值(OD)。
③血清超氧化物歧化酶(SOD)活力检测:剂量组和辐照模型对
照组小鼠均以 6Gy60Co-γ射线照射一次 , 剂量率为 0.25Gy/
min,于照射后第 7天摘眼球采血 , 离心 , 取血清 , 按试剂盒说明
书测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活力 。
1.5　统计分析　采用 SPSS软件进行统计学处理和方差分析。
2　结果
2.1　灰树花多糖对小鼠细胞免疫功能的影响　见表 1。
表 1　灰树花多糖对小鼠足跖肿胀度及淋巴细胞增殖能力的影响
组别
(g/kg)
动物数
(只)
足跖肿胀度
(mm)
淋巴细胞增殖能力
(OD差值)
溶剂对照 12 0.29±0.059 0.423±0.099
0.15 12 0.30±0.084 0.391±0.168
0.30 12 0.32±0.082 0.439±0.169
0.90 12 0.36±0.086 0.717±0.2261)
注:1)与溶剂对照组比较 , P<0.01。
2.2　灰树花多糖对小鼠体液免疫功能的影响　见表 2。
表 2　灰树花多糖对小鼠抗体生成细胞及溶血素的影响
组别
(g/kg)
动物数
(只)
溶血空斑数
(×103 /全脾)
半数溶血值
(HC50)
溶剂对照 12 48.5±13.7 95.1±11.7
0.15 12 50.3±13.9 104.9±10.3　
0.30 12 70.9±15.81) 107.2±13.62)
0.90 12 63.1±11.82) 119.6±11.01)
注:与溶剂对照组比较 , 1)P<0.01;2)P<0.05, 。
2.3　灰树花多糖对小鼠单核 -巨噬细胞功能的影响　见表 3。
表 3　灰树花多糖对小鼠单核 -巨噬细胞功能的影响
组别
(g/kg)
动物数
(只)碳廓清指数
吞噬百分率
(%) 吞噬指数
溶剂对照 12 3.91±0.63 33.6±8.8 0.67±0.27
0.15 12 4.44±0.59 37.7±10.4 0.75±0.28
0.30 12 4.75±0.991) 48.0±13.12) 1.02±0.311)
0.90 12 5.04±0.932) 42.0±12.42) 1.07±0.272)
注:与溶剂对照组比较 , 1)P<0.05, 2)P<0.01。
2.4　灰树花多糖对小鼠 NK细胞活性的影响 见表 4。
表 4　灰树花多糖对小鼠 NK细胞活性的影响
组别
(g/kg)
动 物 数
(只)
NK细胞活性
(%)
溶剂对照 12 34.3±15.5
0.15 12 41.6±11.4
0.30 12 44.1±13.9
0.90 12 50.6±11.91)
注:1)与溶剂对照组比较 , P<0.05。
2.5　灰树花多糖对小鼠辐照前后外周血白细胞计数的影响　
见表 5。
由表 5可见 , 辐照前各组小鼠白细胞总数无显著性差异
(P>0.05), 辐照后第 3天辐照模型对照组白细胞总数与辐照
前相比 ,明显降低(P<0.01 ), 表明辐照模型成立。辐照后第 3
天 、第 14天 0.90g/kg组小鼠白细胞总数与模型对照组比较差
异均有统计学意义(P<0.01或 P<0.05)。
表 5　灰树花多糖对小鼠辐照前后外周血白细胞计数的影响
组别
(g/kg)
动物数
(只)
辐照前
(×109个 /L)
辐照后 3d
(×109个 /L)
辐照后 14d
(×109个 /L)
辐照模型 12 7.44±2.40 2.00±0.84 4.73±1.41
0.15 12 7.45±2.38 1.60±0.39 4.73±1.78
0.30 12 7.29±1.87 2.79±1.77 5.23±1.07
0.90 12 7.25±1.75 3.39±1.171) 6.48±1.792)
注:与辐照模型对照组比较 , 1)P<0.01;2)P<0.05。
2.6　灰树花多糖对小鼠骨髓细胞 DNA含量和血清超氧化物
歧化酶(SOD)活力的影响
表 6　灰树花多糖对小鼠骨髓细胞 DNA含量
和血清 SOD活力的影响
组别
(g/kg)
动 物 数
(只)
DNA含量
(OD值)
SOD活力
(U/mL)
辐照模型 12 0.732±0.180 129.6±14.2
0.15 12 0.752±0.112 130.8±12.7
0.30 12 0.790±0.163 135.8±11.7
0.90 12 1.067±0.1751) 151.3±12.01)
注:1)与溶剂对照组比较 , P<0.01。
3　讨论
电离辐射作用于人体后 ,可直接作用于 DNA、蛋白及酶类 ,
引起电离和化学键断裂 , 使分子变性和细胞结构破坏;也可作
用于机体内水分子使其发生电离和激发 ,产生大量的具有强氧
化性能的自由基 , 而间接使组织细胞变性 、坏死 、致使代谢紊
乱 ,引起免疫 、神经和内分泌系统的调节功能障碍 [ 3] 。
·7·　中国辐射卫生 2010年 3月第 19卷第 1期　ChinJRadiolHealth, March2010, Vol19, No1
【论著】
高本底辐射对居民机体外周血 SOD和 MDA的影响
耿继武 ,邹剑明 ,苏世标 ,陈建雄 ,徐海娟 ,黎丽春 ,杨　敏
中图分类号:X591　文献标识码:A　文章编号:1004-714X(2010)01-0008-02
　　【摘要】　目的　探讨小剂量慢性长期连续照射人群的抗氧化水平的改变。方法　选择我国阳江天然放射性高
本底辐射地区(HBRA)出生并长大的 53名 50 ～ 59岁男性居民作为研究对象 , 另选择恩平市横坡镇(CA)年龄相仿的
男性居民作为对照人群。分别抽取他们外周血 5ml,并测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力 、丙二醛(MDA)含量。
结果　在 HBRA和 CA人群血清中 , SOD活力为(65.9±38.5)μ/ml、 (50.2±26.2)μ/ml, MDA含量为(4.5±2.0)
nmol/ml、(6.5±2.6)nmol/ml。与 CA组相比 , HBRA组人群 SOD活力较高 、MDA含量较低 ,差异均有统计学意义(P
<0.05)。结论　天然放射性高本底辐射(简称高本底辐射)可能对机体的抗氧化指标 SOD和 MDA有影响。
【关键词】　高本底辐射;外周血;超氧化物歧化酶;丙二醛
EffectofNaturalHighBackgroundRadiationonSODandMDAinthePeripheralBloodofInhabitants.GENGJi-wu,
ZOUJian-ming, SUShi-biao, etal.GuangdongPreventionandTreatmentCenterforOccupationalDisease, Guangzhou
510300China.
【Abstract】　Objective　 Tostudythechangeofantioxygenlevelofthosewhoarecontinuouslyexposedtolightand
chronicradiation.Methods　53 maleinhabitantsagedfrom50-59yearsareselectedastheobjectofstudy, whoarebornand
bredinYangjianghighnaturalbackgroundradiationarea.Additionalmaleinhabitantsofsimilaragesinthetownof
Hengpi, Enpingarechosenasthecontrastgroup.5mlofperipheralbloodisseparatelydrawntodeterminetheactivity
ofsuperoxidedismutaseandthecontentofmalondialdehydeintheserum.Results　IntheserumofHBRA
andCAgroups, theactivityofSODis<65.9 ±38.5 >and(50.2 ±26.2)μ/mlrespectively, andthecontentofMDAis
(4.5±2.0)nmol/mland(6.5±2.6)nmol/mlrespectively.ComparedwithCAgroup, theactivityofHBRAgroupishigh.
butitscontentofMDAislow.Thesedifferencesarestatisticalysignificant(P<0.05).Conclusion　Naturalhighbackground
radiationcouldhaveanefectontheantioxidationindexessuchasSODandMDA.
【Keywords】　HighBackgroundRadiation;PeripheralBlood;SOD;MDA
　　随着核能的发展和辐射源在各行业中的广泛应用 ,在放射
防护的实践中 , 时常遇到低剂量电离辐射对人群健康影响评价
的问题 , 此问题正逐渐引起各国政府及公众的普遍关注。当
前 , 科学界对低剂量的电离辐射的健康影响存在两种不同的理
论 , 一是随机性效应的线性无阈理论 , 二是在低剂量范围内有
阈的适应性反应(AR)理论 [ 1] 。近年来 , 研究发现小剂量电离
辐射对人体作用可能存在与传统线性无阈理论不同的适应性
基金项目:广东省医学科研基金立项课题(A2007057);苏州大学高校
省级重点实验室开放课题 (KJS0718);广东省职业病防治院课题(B200602)
作者单位:广东省职业病防治院 ,广东　广州　 510300
作者简介:耿继武(1977～ ), 男 ,主管医师 , 主要从事放射卫生评价工作。
通讯作者:邹剑明 ,主任医师(E-mail:zoujianming@gmail.com)
反应 , 但研究结果大多在动物实验条件下取得 , 而来自人类机
体观察的证据较少。因此 , 本研究以阳江高本底地区居民作为
暴露对象 , 恩平地区居民作为对照 , 用化学比色法检测两组人
群外周血 SOD活力和 MDA的含量 , 验证和探讨小剂量辐射对
居民外周适应性反应的影响。
1　对象和方法
1.1　对象　选择阳江高本底地区(HBRA)的 53名 50 ～ 59岁
男性居民(要求阳江市阳西县塘口镇出生并长大 , 近三年在其
他地方居住过 6个月或 6个月以上的除外)作为研究对象 , 另
选择恩平市横坡镇(CA)出生并长大的年龄相仿的男性居民作
为对照人群。两组人群经济水平 、文化水平相当 , 饮食习惯相
同 , 有肿瘤家族史 、慢性病 、阳光过敏者 、最近 1个月内有服药
　　造血组织是辐射高度敏感的组织 ,造血功能障碍是辐射损
伤的主要表现之一。本研究表明 , 小鼠接受 4Gy60Co-γ射线
一次性全身照射后 , 辐照模型对照组小鼠外周血 WBC计数严
重降低 , 骨髓细胞 DNA含量下降 , 呈现出明显的辐射损伤效
应。而灰树花多糖高剂量组动物外周血 WBC总数 、骨髓细胞
DNA含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)活力明显高于辐照模
型对照组 , 表明灰树花多糖具有一定的辐射损伤保护作用。
近年来研究的中药防治辐射损伤的机理主要是:①多糖成
分通过增加骨髓祖细胞和骨髓有核细胞数量 ,抑制造血细胞凋
亡 , 促进骨髓基质细胞分泌基质改善造血微环境 , 来预防和治
疗辐射导致的造血功能障碍 [ 4];②多糖类物质是一种天然的
非特异性免疫增强剂 ,通过作用于网状内皮系统 、巨噬细胞 、淋
巴细胞 、白细胞参与调节蛋白质的合成 、抗体的生成 、补体的生
成以及对各种细胞因子表达功能 , 增强机体免疫力 [ 5];③通过
抗氧化作用 , 加大清除自由基的能力 , 发挥辐射保护效应 [ 6 , 7] 。
本研究中的 6项免疫指标和抗氧化酶(SOD)活力的显著增强
也提示:灰树花多糖可能通过提高机体的免疫功能和抗氧化能
力而起到辐射保护作用。
参考文献:
[ 1] 李德远 , 汤坚 ,刘建峰 , 等.枸杞抗辐射效应研究 [ J] .食品
科学 , 2003, 24(3):131-135.
[ 2] 卫生部.保健食品检验与评价技术规范 [ S] .2003-02-
14.
[ 3] 张春生 , 彭珊茁.抗氧化物质在辐射防护中的作用 [ J] .中
国工业医学杂志 , 2003, 16:222-224.
[ 4] 席亚明 , 席亚荣 ,孙延庆 , 等.梁金菇多糖对辐射损伤小鼠
造血功能的影响 [ J] .中华放射医学与防护杂志 , 2002, 22:
291-293.
[ 5] 季修庆 , 吴士良.中药多糖辐射防护分子机制 [ J] .江苏大
学学报 , 2004, 14(1):83-84.
[ 6] 葛明珠 , 张勇 , 任少林.南沙参多糖的辐射防护作用 [ J] .
中华放射医学与防护杂志 , 1996, 16(2):123-125.
[ 7] 苗明三.怀山药多糖抗氧化作研究 [ J] .中国医药学报 ,
1997, 12(2):22-23.
(收稿日期:2009-09-10)
·8· 中国辐射卫生 2010年 3月第 19卷第 1期　ChinJRadiolHealth, March2010, Vol19, No1