全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2011，26(6)∶580 ～ 582
作者简介:于波涛，男，博士，主任药师，从事新型给药系统与新技术研究工作。Email:yu － bo － tao@ sohu． com
正交试验法研究赶黄草中没食子酸的提取工艺
于波涛1，吴雪钗1，廖 钦2
(1．成都军区总医院，四川 成都 610083;2．泸州医学院，四川 泸州 646000)
摘要:目的 研究赶黄草中没食子酸的最佳提取条件。方法 采用水浴、超声水浴、渗漉、煎煮等方法提取，正交试验优选，用
HPLC法测定没食子酸。结果 赶黄草的最佳提取条件为:在 50%乙醇、1∶15 的固液体积比条件下，以 3 秒 1 滴的速度渗漉。
结论 所建工艺稳定、可行。
关键词:正交试验;赶黄草;没食子酸;提取工艺;高效液相色谱法
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2011)06 － 0580 － 03
Study on the extraction technology of gallic acid from Penthorum chinense by orthogonal － test
method
YU Bo － tao1，WU Xue － chai1，LIAO Qin2
(1． Chengdu Comand General Hospital，Chengdu，Sichuan，610083 P． R． China;2． Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan，
610083 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To optimize the extraction technology of gallic acid from Penthorum chinense． METHODS The
orthogonal － test method was adopted to research the effects of 4 methods，including the water bath ，ultrasonic wave water bath，leakage
and decoction，on the yielding rate of gallic acid from Penthorum chinense． The content of gallic acid was deteminated by HPLC．
RESULTS The optimum technology of extracting gallic acid from Penthorum chinense was leakage using 50% alcohol with a volume
ratio of 1∶15(solid∶solvent)． CONCLUSION The extraction process is suitable for practical use．
Key words:Orthogonal － test;Penthorum chinense;Gallic acid ;Extraction technology ;HPLC
CLC number:R284 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2011)06 － 0580 － 03
赶黄草为虎耳草科扯根菜属植物扯根菜
Penthorum chinense Pursh 的干燥地上部分。收载于
《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十
三册》附录中，性平、味苦、微辛，为苗族民间草药。
具有清热、利湿、解毒、活血、平肝、健脾等作用，广泛
用于治疗各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等［1 － 3］。其主要
成分之一没食子酸的含量最高，没食子酸是可水解
鞣质的单体，具有抗病毒的作用［4］。对扯根菜的研
究较少，尚未见有关没食子酸的含量测定方法的报
道。现采用水浴、超声水浴、渗漉、煎煮提取方法，用
正交法优选了提取条件，HPLC 法测定没食子酸的
含量，并对不同方法、不同因素的提取效果进行比
较，为赶黄草的工业化提取提供依据［5 － 6］。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
HP －1100 型高效液相色谱仪(美国惠普)。没
食子酸对照品(中国药品生物制品检验所，批号:
0831 － 9055) ;赶黄草药材(市售) ;甲醇和乙腈为色
谱纯;其余试剂为分析纯;水为重蒸馏水。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 赶黄草中没食子酸的提取 按正交实验表
L9(3
4)安排 3 因素 2 水平的正交实验。据预试结
果，选定乙醇浓度(A，60%、70%、80%依次为水平
1、2、3，下同)、溶剂量(B，225、275、325 mL)、浸渍时
间(C，2、3、4 h)3 因素。按实验设计方案的要求，分
别精密称取 15 g赶黄草药粉，置 500 mL 锥形瓶中，
用80 ℃水浴加热，分别按表 1 的条件进行提取，将
提取液稀释定容至 400 mL，得水浴法供试液，冷藏。
据预试结果，选定乙醇浓度(A，60%、70%、80%依
次为水平 1、2、3，下同)、固液体积比(B，1∶15、1∶
20、1∶25)、浸渍时间(C，20、30、40 min)3 因素。按
设计要求，分别精密称取 15 g 赶黄草药粉，置 500
mL锥形瓶中，分别按表 1 的条件进行提取，提取液
稀释定容至 400 mL，得超声水浴法供试液，冷藏。
据预试结果，选定乙醇浓度(A，50%、70%、90%依
次为水平 1、2、3，下同)、溶剂量(B，225、275、325
mL)、渗漉速度(C，每 3 秒 1、2、3 滴)3 因素。按设
计要求，分别精密称取 15 g 赶黄草药粉，置 500 mL
渗漉筒中，分别按表 1 的条件进行提取，将提取液稀
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2011.06.019
释定容至 400 mL，得渗漉法供试液，冷藏。据预试
结果，选定乙醇浓度(A，50%、70%、90%依次为水
平 1、2、3，下同)、溶剂量(B，225、275、325 mL)、浸
渍时间(C，1、2、3 h)3 因素。按设计要求，分别称取
15 g 赶黄草药粉，置 500 mL 圆底烧瓶中进行提取
(100 ℃水浴锅加热) ，分别按表 1 的条件进行提取。
将提取液稀释至 400 mL，得煎煮法供试液，冷藏。
表 1 因素水平表(以渗漉法为例)
Table1 Factors and levels
水平 乙醇浓度(A)/% 固液体积比(B) 渗漉速度(C)/每 3秒滴数
1 50 1∶15 1
2 70 1∶20 2
3 90 1∶25 3
1． 2． 2 色谱条件 采用 Diamonsil C18色谱柱(250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈 －甲醇 － 0． 2%
磷酸(6∶5∶89) ，检测波长 260 nm，柱温 35 ℃，流
速 1 mL·min －1。
1． 2． 3 标准曲线的制备 精密称取 6 mg没食子酸
对照品，置 50 mL量瓶中，用流动相溶解并定容。精
密移取 1 mL该液于 10 mL 量瓶中，用流动相定容，
作为 0． 012 mg·mL －1的对照品溶液。按“1． 2． 2”项
色谱条件，分别进样 1、8、12、20、52、70、80 μL 对照
品溶液，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标回归，
得回归方程为:Y = 18． 509X － 18． 044(r = 0. 9999)。
结果表明:没食子酸峰面积与进样量有良好的线性
关系，线性范围为 1 ～ 100 μg·mL －1。
1． 2． 4 精密度试验 连续进样供试品溶液 8 次，每
次 10 μL，按“1． 2． 2”项色谱条件测定，没食子酸的
RSD = 2． 78%。
1． 2． 5 稳定性实验 进样 100 μL 对照品溶液，每
隔 0． 5 h测定 1 次，连续 6 h，RSD = 3. 30%，没食子
酸在 6 h内很稳定。
1． 2． 6 回收率的测定 取已知含量的供试品粉末，
加入适量没食子酸对照品，按“1． 2． 2”项色谱条件
测定，平均回收率为 98． 1%，RSD = 1． 63%。
1． 2． 7 样品的测定 取适量各种提取方法所得的
提取液，用微孔滤膜过滤，进样 10 μL，在“1． 2． 2”项
色谱条件下，没食子酸得到良好分离(图 1) ，由峰面
积计算得其溶液中的浓度(表 2)。
图 1 对照品(A)和供试品(B)溶液的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of control solution(A)and sample
solution(B)
表 2 L9(34)正交试验设计及结果分析(以渗漉法为例)
Table 2 Arrangement and results of L9(34)orthogonal － test
试验号
因素
A B C 空白 没食子酸含量 /μg·g － 1
1 1 1 1 1 2． 438 × 103
2 1 2 2 2 2． 046 × 103
3 1 3 3 3 1． 436 × 103
4 2 1 2 3 342． 67
5 2 2 3 1 300． 31
6 2 3 1 2 232． 02
7 3 1 3 2 289． 07
8 3 2 1 3 130． 59
9 3 3 2 1 83． 63
K1 5． 920 × 103 3． 070 × 103 2． 800 × 103 2． 822 × 103
K2 875． 00 2． 477 × 103 2． 472 × 103 2． 567 × 103
K3 503． 29 1． 752 × 103 2． 025 × 103 1． 909 × 103
K1 /3 1． 973 × 103 1． 023 × 103 933． 47 940． 57
K2 /3 291． 67 825． 60 824． 07 855． 67
K3 /3 167． 76 583． 90 675． 14 636． 43
R 1． 202 × 107 6． 208 × 106 6． 019 × 106 6． 066 × 106
Q =(K1 2 + K2 2 + K3 2)/3 6． 103 × 106 2． 904 × 105 1． 009 × 105 1． 478 × 105
S = Q － CT 1． 202 × 107 6． 208 × 106 6． 019 × 106 6． 066 × 106
185第 6 期 于波涛，等。正交试验法研究赶黄草中没食子酸的提取工艺
2 讨论
由表 2 可知:水浴提取法的极差(R)B 最大，为
主要因素，C次之，A最小，为次要因素;最优方案是
A1B1C3。即称取 15 g 赶黄草药粉，用 60%乙醇于
225 mL溶剂中提取 4 h，所得的没食子酸含量最高。
方差分析:由于 SA和 SC 小于 SE，表明由因素 A和
C引起的变差很小，为了提高分析的精度，可将其合
并，相应的自由度也合并，一起用来估计试验的均
方。B因素 P ＞ 25%，故 B因素影响不显著，C、A因
素次之。超声法的极差 A 最大，为主要因素，C 次
之，B最小，为次要因素;最优方案是 A1B2C3。即称
取 15 g赶黄草药粉，用 60%乙醇于 300 mL 溶剂中
提取 40 min，所得的没食子酸含量最高。方差分析:
由于 SB小于 SE，表明由因素 B引起的变差很小，为
了提高分析的精度，可将其合并，相应的自由度也合
并，一起用来估计试验的均方，影响因素的大小顺序
为 A ＞ C，A 因素 P ＜ 5%，C 因素P ＜ 25%。故 A 因
素具有极显著影响，C 因素有显著影响。B 因素影
响不显著。渗漉法的极差 A最大，为主要因素，B次
之，C 最小，为次要因素;最优方案是 A1B1C1，即称
取 15 g赶黄草药粉，用 50%乙醇于 225 mL溶剂，以
每 3 秒 1 滴的速度渗漉，所得没食子酸的含量最高。
方差分析:由于 SC小于 SE，表明由因素 C 引起的变
差很小，为提高分析的精度，可将其合并后一起用来
估计试验的均方。影响因素的大小顺序为 A ＞ B，A
因素 P ＜ 5%，B因素 P ＞ 25%。故 A因素具有极显
著影响，B、C因素影响不显著。煎煮法的极差 A 最
大，为主要因素，C 次之，B 最小，为次要因素;最优
方案是:A1B2C3。即 50%乙醇于 375 mL溶剂提取 3
h，所得没食子酸的含量最高。方差分析:由于 SB
小于 SE，表明由因素 B 引起的变差很小，为提高分
析的精度，可将其合并后一起用来估计试验的均方。
A因素 P ＜ 1%，C 因素 P ＜ 5%。故 A 因素具有极
显著影响，C因素次之，B因素影响不显著。
综上所述，渗漉的提取效果最佳、煎煮次之、水
浴再次、超声水浴效果较差，因此，选取渗漉法作为
表 3 方差分析表
Table 3 Analyisis of variance
离差来源 A B C D
离差平方和 6． 103 × 106 2． 904 × 105 － 2． 486 × 105
自由度 2 2 － 4
均方 3． 051 × 106 1． 452 × 105 － 6． 216 × 104
F 49． 09 2． 34 － －
P ＜ 5% ＞25% － －
赶黄草中没食子酸提取的优化方法。分析含量差别
原因:没食子酸为可水解鞣质的结构单元，所测含量
为样品所含游离没食子酸和水解没食子酸含量的总
和，但不包含在放置条件下不易水解的可水解鞣质
中的没食子酸。没食子酸的含量随提取条件不同差
异较大，超声波提取法时间短，提取的主要为游离没
食子酸，含量较低。加热提取会使赶黄草中所含大
量的可水解鞣质被水解破坏，所以，煎煮会破坏掉很
大一部分没食子酸。超声时间短，可能大部分没食
子酸还未及提取。最终确定赶黄草中没食子酸提取
的优化方法是:称取 15 g 赶黄草药粉，用 50%乙醇
于 225 mL溶剂中以每 3 秒 1 滴的速度渗漉。验证
试验结果表明:上述条件下没食子酸的提取率达到
91. 2%，所用方法简便、实用、经济，符合工业化大生
产的要求。
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收稿日期:2010 － 12 － 09
285 华 西 药 学 杂 志 第 26 卷