全 文 ：15.9Hz, H-7), 7.05(1H , d, J=1.7Hz, H-2), 6.98
(1H , dd, J =8.2, 1.7H z, H-6), 6.79(1H , d, J =
8.2Hz, H-5), 6.13(1H , d, J =15.9Hz, H-8), 5.00
(1H , dd , J=8.9, 5.3H z, H-11), 3.80(1H , dt, J=
8.9, 3.2hz, H-12), 3.55(1H , m , H-10), 3.17(3H , s,
M eO-16), 2.12(2H , m , H-15), 1.93(1H , dd, J =
13.4, 2.8H z, H-13a), 1.77(1H , dd, J=12.4, 9.6Hz,
H-13b)。13 C-NMR及 DEPT (DMSO)δ125.28(s, C-
1), 121.45(d, C-2), 145.46(s, C-3), 148.35(s, C-
4), 113.77(d, C-5), 114.35(d, C-6), 145.15(d, C-
7), 115.78(d, C-8), 165.43(s, C-9), 72.91(d, C-
10), 69.14(d, C-11), 66.69(d, C-12), 36.99(d, C-
13), 70.94(s, C-14), 34.92( t, C-15), 173.59(s, C-
16), 51.82(q, MeO)。根据以上数据 ,结合 HMBC
数据 ,鉴定为绿原酸甲酯。
化合物 13:黑褐色脂状物。1H-NMR(400MHz,
DMSO)δ8.29 (1H , s, A r-OH ), 7.39 (1H , d , J =
16.0Hz, H-7), 7.05(1H , d, J=1.7Hz, H-2), 6.98
(1H , dd, J =8.0, 1.7H z, H-6), 6.79(1H , d, J =
8.0Hz, H-5), 6.13(1H , d, J =16.0Hz, H-8), 5.00
(1H , m , H-11), 3.80(1H , m , H-12), 3.60(1H , m , H-
10), 2.12(2H , m , H-15), 1.93(1H , dd, J =13.4,
2.8Hz, H-13a), 1.77(1H , dd, J =12.4, 9.6Hz, H-
13b)。以上数据与绿原酸标准谱图一致。
参 考 文 献
[ 1] 白松林 ,吴德成 .中国大兴安岭植物志 .哈尔滨:黑龙
江科学技术出版社 , 1994:496-497.
[ 2] C asto la V, BigheU i A, Rezzi S, e t al. Com position and
chem ica l variability o f the triterpene fraction o f dich lo-
rome thane ex tracts o f Isertia hypoleuca Leaves. Industria l
C rops and P roducts, 2002, 15, 15-22.
[ 3] 赵晓亚 , 孙汉董 , 吴继洲 . 冷水七根茎的化学成分研
究 .中国中药杂志 , 2005, 30(8):584-585.
[ 4] M ahato S, Kundu A. 13C NMR spec tra o f pen tacyc lic trit-
e rpenoids-A com pila tion and some sa lient feature s. Phy to-
chem istry, 1994, 37(6):1517-1537.
[ 5] 刘美凤 , 韩芸 ,邢东明 , 等 .竹叶兰化学成分研究 .中国
中药杂志 , 2004, 29(2):147-148.
[ 6] Duan H, Taka ishi Y, M omo ta H , e t a l. Imm unosupp res-
sive constituents from Saussu rea m edusa. Phy to chem istry,
2002, 59:85-90.
[ 7] Baranyai M , M onlá r P, Szabo lcs J. De term ina tion o f the
geome tric configura tion o f the p lyene chain o fm ono-c is C40
ca ro tenoidsⅡ. Te trahed ron, 1981, 37:203-207.
[ 8] Pa rk J, Lee J, Cho i J. A flavone dig lycoside from Cirsium
japon icum va r. ussuriense. Phy to chem istry, 1995, 39(1):
261-262.
[ 9] Ko jim ah H , Nonko S, Ak iko H, e t al. S te ro l g luco side
from P runella vu lgaris. Phy tochem istry, 1990, 29(7):
1351-1353.
[ 10] M arina D, M aria F, Antonio F, e t a l. An tia lga l Com-
pounds from Zan tedesch ia ae thiopica. Phy to chem istry,
1998, 49(5):1299-1303.
[ 11] 霍长虹 ,赵玉英 , 梁鸿 , 等 . 老鼠筋化学成分的研究 .
中国中药杂志 , 2005, 30(10):763-765.
(2006 - 09 -12收稿)
基金项目:云南民族大学校内基金(MD05014);陕西省重大科技攻关项目(2006k z10-G5)作者简介:施润菊(1980-),女,云南大理人 ,云南民族大学化学与生物技术学院硕士研究生 ,主要从事药物分析方面的研究。电话:029-
88302686, 0871-5134843, Em ail:sh irum jv28@ sohu. com。*通讯作者:郑晓晖(1968-),男 ,陕西西安人 ,教授 ,博士生导师 ,西安交通大学-西北大学中草药现代化研究及工程中心主任 ,云南民族大学兼职教授 ,主要从事复方药物分析等方面的研究。电话:029-88302686,传真:029-88302686, E-m ail:zhengxh@nw u. edu. cn。
广枣水提物的 HPLC-ESI-MSn 分析
施润菊 1, 2 ,戴　云1 ,房敏峰 2 ,赵　欣 2 ,郑建斌2 ,郑晓晖 1, 2*
(1.云南民族大学化学与生物技术学院 ,云南昆明 650031;2.西安交通大学-西北大学中草药现代化研究及
工程中心 ,陕西西安 710069)
　　摘要　目的:建立广枣水提物的高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱(H PLC-ES I-M Sn)分析方法 ,分析水提物中的
主要化学成分。方法:采用加热回流法制取广枣中的水溶性总提物 , 通过 HPLC-ES I-M Sn的多步反应模式(MRM)
测定广枣水提物中没食子酸的含量 ,采用离子阱质谱的步进式碰撞功能获得多级碎片信息 , 分析总离子流图中各
个峰的化学结构。结果:共对 11种化合物进行了结构分析 , 其中 1种未见报道。结论:方法回收率高 , 专属性强 ,
可为蒙药广枣化学成分的进一步研究提供实验依据。
关键词　广枣;没食子酸;高效液相色谱;电喷雾;离子阱质谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)03-0294-04
294 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 3期 2007年 3月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牱牣牥牫牣牥牨牱
HPLC-ESI-MSn Analysis of theW ater So lub le Extracts of Fruc tus Choerospondiatis
SH I Run-ju1 , 2 , DAI Yun1 , FANG M in-feng2 , , ZHAO Xin2 , ZHENG Jian-bin2 , ZHENG Xiao-hui1 , 2*
(1. Co llege o f Chem istry and B iotechno logy, Yunnan Na tiona lities Universtiy, Kunm ing, Yunnan, 650031, Ch ina;2. Resea rch and
Eng ineering C en te r o f Modern ization o f Chinese He rbalM edic ine, Xi’ an Jiao tong University-Nor thw est University, X i’ an, Shanx i,
710069, China)
Abstrac t　Objective:To estab lish an HPLC-ES I-M Sn m e thod for ana lyzing the chem ica l ing redien ts in the wa te r so lub le ex tracts
o f F ructus Choe rospondiatis. M ethods:W ate r-solvab le ex trac ts o f F ructus Choe rospondiatis are ob tained by hea ting recirculation. Mu lti-
stage reaction mode(MRM) o f the HPLC-ESI-MSn w as used to de te rm ine the content of Ga llic ac id, the MSn techno logy w as used to
obta in the info rm a tion o f charac te ristic m ultistage fragment ions so as to identify the chem ica l struc ture o f peak s in the to ta l curren t
spec trum. Resu lt:E leven compounds w ere iden tified, and one o f them is a new unknown ingred ient. C onc lusion:The m ethod, which
has high re covery and specific ity, can offer the experim enta l evidences fo r the fu rther resea rch o f the chem ical ing redients extracted
from the F ruc tus Choerospondiatis.
K ey words　F ruc tus Choerospond ia tis;Ga llic ac id;HPLC-ESI-MSn
　　广枣为蒙医习用药材 , 是漆树科植物南酸枣
Choerospond ias axillaris (Roxb.)Burtt et H ill的干燥
成熟果实 ,其性味甘 、酸 、平 ,具有行气活血 ,养心 ,安
神的功效〔1〕;临床上用于气滞血瘀 ,胸痹作痛 ,心悸
气短 ,心神不安等心疾病症 〔2〕。广枣的主要化学成
分为黄酮类 、有机酸类 、甾醇类 、糖类 、酯类 、氨基酸
等 〔3-6〕。已有文献采用薄层扫描法 〔7〕测定醇提广枣
中没食子酸的含量 ,用比色法 〔8〕测定广枣中总黄酮
的含量 ,但方法专属性和灵敏度较差。高效液相色
谱-电喷雾-离子阱质谱法 (HPLC-ESI-MSn)是分离
分析复杂样品及对其成分进行结构鉴定的有效方法
之一 ,本文采用该方法测定了广枣水提物中没食子
酸的含量 ,并对水提物的化学成分进行了分析 。
1 　实验部分
1.1 　仪器和试剂
1.1.1　仪器:Ag ilent公司 1100系列高效液相色
谱-电喷雾-离子阱质谱联用仪 ,包括:在线脱气机 ,
二元梯度泵 ,柱温箱 ,二极管阵列 (DAD)检测器 ,电
喷雾电离源和 SL型离子阱质谱 (安捷伦公司 ,美
国),Maxima超纯水机 (基因公司 ,美国 );0.45 μm
微孔滤膜 (m ilipo re公司 ,美国)。
1.1.2 　试剂:广枣药材 (湖南产 ,西安市药品检验
所鉴定);没食子酸对照品 (中国药品生物制品检定
所 ,批号:1100831-200302);色谱级甲醇 、乙腈 (Fish-
e r公司 ,美国 ),超纯蒸馏水 (自制 ),其它试剂均为
分析纯。
1.2　分析条件 　色谱条件:A gilen t ZORBAX Ex-
tend-C18柱 (100 mm ×3.0 mm , 3.5 μm);流动相:A
为 0.3%的乙酸水溶液 , B为甲醇;梯度:2%B保持
8.0 m in;0.01 m in内转变为 50%B ,保持 7.0 m in;
0.01 m in内转变为 80%B ,保持 15.0 m in;0.01 m in
内转变为 2%B;流速为 0.3m l /m in;检测波长为 280
nm;柱温为 30℃。该分析条件下 , 广枣水提物的
HPLC色谱图见图 1。
图 1　广枣水提物的高效液相色谱图
　　质谱条件:离子源模式:0-8.0 m in为负离子模
式 , 8.0 m in以后为正离子模式 , 雾化气压力为 40
psi, 干燥气流速为 9.0 m l /m in, 干燥气温度为
350℃。毛细管电压为 4500V ,扫描范围为 50-1000
amu。该分析条件下 ,广枣水提物的总离子流图见
图 2。
295 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 3期 2007年 3月
图 2　广枣水提物的总离子流图
1.3 　样品制备
1.3.1　对照品溶液的制备:精密称取恒重的没食
子酸对照品 0.0017 g,用 5.0%(V /V)的乙腈水溶
液溶解于 5.0 m l容量瓶中 ,并稀释至刻度 ,配制成
浓度为 0.34mg /m l的对照品溶液 , 4℃冷藏备用 。
1.3.2　广枣药材供试品溶液的制备:取干燥恒重
的广枣药材适量 ,去除果核 ,取果肉 100.0 g,粉碎干
燥至恒重。取 10.0 g置于 500 m l圆底烧瓶中 ,加 8
倍量的纯水 ,加热回流 3次 ,每次 1.5 h,抽滤 ,合并
滤液 ,减压浓缩至相对密度为 1.10 ,真空干燥 ,研磨
成粉 ,取粉末 0.0065 g,加 5.0%的乙腈水溶液溶解
于 5.0m l容量瓶中 ,并稀释至刻度 , 4℃冷藏备用。
2 　结果
2.1 　方法学考察
2.1.1　线性关系试验:精密吸取 0.34 mg /m l的没
食子酸对照品溶液适量 ,用 5.0%的乙腈水溶液稀
释为系列对照品溶液 ,在拟定色谱条件下进样 ,以
m /z 168.8为母离子 、m /z 124.6为子离子 , 采用
MRM模式进行分析 ,记录提取离子流图中子离子的
峰面积 ,以峰面积 (y)对没食子酸的浓度 (x)作图 ,
进行线性回归 , 得回归方程和相关系数为:y =
3566.3x - 1.032, r=0.9995 ,结果表明:没食子酸在
0.96 ～ 80.0 ng /m l内线性关系良好。
2.1.2　精密度试验:取 1.3.2项下方法制备的样
品 ,在拟定色谱条件下 ,自动进样器连续进样 5次 ,
每次 10.0 μl,记录峰面积 ,计算 RSD为 2.26%。
2.1.3　稳定性试验:按 1.3.2项下方法制备样品 ,
在拟定色谱条件下 ,两天内自动进样器进样 6次 ,每
次 10.0μl,记录峰面积 ,计算 RSD为 2.18%。结果
表明:样品在 48 h内稳定性良好。
2.1.4　重现性试验:按 1.3.2项下方法平行制备 5
份样品 ,在拟定色谱条件下 ,自动进样器分别进样 ,
每份每次 10 μl,记录峰面积 ,计算 RSD为 2.12%。
2.1.5 　回收率试验:取 1.3.2项下的广枣果肉粉
末 10.0 g, 加入没食子酸对照品溶液 0.20 m l, 按
1.3.2项下方法制备供试溶液 ,在拟定色谱条件下 ,
自动进样器连续进样 5次 ,每次 10.0 μl,记录峰面
积 ,按下式计算回收率为 98.0%。
　　回收率 =测得含量 -原药材含量加入量 ×100%
2.1.6 　样品测定结果:按 1.3.2项下方法平行制
备 5份样品 ,在拟定色谱条件下进样分析 ,外标法计
算供试药材果肉中没食子酸的平均含量 ,结果为
7.06 mg /g浸膏 ,没食子酸的含量为 0.816 mg /g。
2.2　化学成分分析　取 1.3.2项下制备的样品 ,
进样 10.0 μl,在拟定色谱条件下进行检测 ,比较样
品的紫外色谱图和全扫描总离子流图 ,二者基本对
应 ,但总离子流图上有许多强度较大的峰 ,而相应的
紫外色谱图上却没有明显的吸收 ,推测广枣药材中
含有大量紫外吸收弱 ,含量低 ,易离子化的化合物。
另一方面 ,在紫外图中有个别吸收很大的峰 ,在相应
的总离子流图中却强度很弱 ,提示这些化合物在拟
定质谱条件下 ,很难被离子化。在获得样品供试品
溶液全扫描一级质谱的基础上 ,利用离子阱质谱的
步进式碰撞功能 ,通过改变电场梯度和能量梯度 ,获
得了总离子流图中的各个峰的多级碎片信息 ,结合
相关文献资料和对照品定性等方法 ,对总离子流图
中的各个峰进行归属(见表 1),定性分析了 11种化
合物 ,其中 1个为未知物 。
3　讨论
本文采用 HPLC-ESI-MSn 法对拟定色谱条件
下 ,广枣特定处理工艺的提取液中的没食子酸的含
量进行了测定 ,并对其化学成分进行了初步的定性
分析 ,对 11个成分进行了归属 ,其中 1个为未知化
合物 。可作为广枣药材的鉴别鉴定基础 ,但仅凭 tR ,
TIC , E IC等谱图和相关碎片信息对物质的定性仍有
296 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 3期 2007年 3月
　　表 1 　广枣药材供试品溶液的多级质谱分析结果
峰号 名称 一级质谱 二级质谱 三级质谱
1 柠檬酸 190. 6(M-1) 102.7(M-2COOH) 85.6(M-2COOH-OH)
2 未知 352. 9 308.8(M-COOH) 291. 6(M-COOH-OH)
3 邻苯二甲酸二异己酯 390. 7(M-1) 233.6(M-COOC8H17) 156. 8(M-COOC8H17-ph)
4 没食子酸 168. 8(M-1) 124.6(M-COOH) 107. 5(M-COOH-OH)
5 对苯二酚 108. 6(M +1) 91.6(M-OH) 74. 8(M-OH-OH)
6 柠檬酸乙酯 238. 8(M +H2O) 220.6(M) 147. 5(M-COOC2H5)
7 十八烷酸 284. 8(M +1) 269.6(M-CH3) 269. 7(M-CH3-CH2CH2)
8 柑桔素 273. 2(M +1) 211.3(M-2OCH3) 194. 2(M-2OCH3-OH)
9 柠檬酸甲酯 229. 3(M +Na) 206.1(M) 175. 2(M-OCH3)
10 槲皮素 302. 8(M +1) 285.6(M-OH) 268. 7(M-OH-OH)
11 鞣花酸 330. 9(M +1) 314.1(M-OH) 297. 2(M-OH-OH)
不足之处 ,因此 ,对没有标准品的物质和未知化合
物 ,需结合其它辅助手段如核磁共振谱等加以鉴定 。
参 考 文 献
[ 1] 卫生部国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 (一
部).北京:化学工业出版社 , 2005:29-30.
[ 2] 王凤华 ,杨玉梅 .蒙药广枣及其总黄酮的研究进展 .包
头医学院报 , 2004, 20(3):258-260.
[ 3] 连珠 ,张承忠 , 李冲 ,等 .蒙药广枣化学成分的研究 .中
药材 , 2003, 26(1):23-24.
[ 4] 赵玉英 .蒙药广枣中多糖的提取及无机元素的含量测
定 .西北民族学院学报 , 1999, 20(33):56-58.
[ 5] 樊海燕 , 赛音 ,宋一亭 .蒙药广枣的研究进展 .中草药 ,
2004, 35(3):253-255.
[ 6] 樊海燕 , 赛音 ,敖登高娃 , 等 .广枣中黄酮类化合物提取
工艺研究 . 内蒙古大学学报 (自然科学版), 2005, 36
(1):81-83.
[ 7] 刘莲英 , 杨瑞瑞 ,李维凤 , 等 .广枣中没食子酸的含量测
定 .西北药学杂志 , 2002, 17(5):204-205.
[ 8] 花仲卉 , 安雪梅 ,王伟内 , 等 .比色法测定广枣醇提物中
总黄酮的含量 .海峡药学 , 2003, 15(6):36-37.
(2006 - 09 -12收稿)
作者简介:谭晓梅(1963-),博士 ,硕导 ,研究员 ,从事中药新药研究。 TEL:(020)61648265。
萸黄连提取物中吴茱萸的鉴别与黄连总生物碱含量测定
谭晓梅 ,彭树灵
(南方医科大学中医药学院中药新药研究重点实验室 ,广东广州 510515)
　　摘要　目的:鉴别萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的成分 , 并对黄连总生物碱进行含量测定。方法:采用硅胶
薄层层析法 , 以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺(19∶5∶1∶1)为展开剂 , 以 10%硫酸乙醇溶液为显色剂 ,在 365 nm紫
外灯下观察 , 鉴别提取物中吴茱萸成分;用紫外分光光度法 ,在波长 349 nm处测定提取物中黄连总生物碱的含量。
结果:萸黄连供试液色谱在与吴茱萸对照溶液色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点 , 阴性对照溶液色谱无此斑
点;用紫外分光光度法测定黄连总生物碱 , 盐酸小檗碱的线性范围为 1.04 ～ 11.44μg /m l, r2 =0. 99999, 平均回收率
为 99.2%, RSD为 1.0%。结论:采用硅胶薄层层析法可简便而准确地鉴别出萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的
成分;采用紫外分光光度法测定黄连总生物碱方法简便 , 结果准确 ,在实际生产中可作为萸黄连提取物中黄连总生
物碱盐含量监测的有效手段。
关键词　萸黄连;吴茱萸;薄层鉴别;紫外分光度法;黄连总生物碱
中图分类号:R282.5 /R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)03-0297-03
297 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 3期 2007年 3月