全 文 ：　实验研究　
广枣总黄酮抗氧化作用的研究■
内蒙古蒙医学院中心实验室(028041)
张昕原　孙丽燕＊　巴根那　孙福祥　王志民　乌日娜　李宝山
提　要　　广枣总黄酮(TFFC)呈剂量依赖性地抗 O -2 ·、·OH 对血红蛋白的氧化及对绿色素的生成。在 VB2
-Met-NBT 体系中 , TFFC 对 O-2 ·清除和抑制的 IC50=3.76mg/ L;SC50=3.60mg/L 在 Vit.c-CuSO 4-Cy t.
c 体系中 , TFFC 清除和抑制·OH 的 IC50=49.4mg.L , SC50=74.3cm/ L在 Vit.c-Fe2-DR体系中 TFFC 可抑
制 MDA的生成。
关键词　广枣总黄酮　氧自由基　羟自由基　丙二醛
　　广枣为漆树植物南酸枣(Chorsponias axillaris
(roxb)Buttet Hill)的干燥成熟果实。 蒙古名为居日
很·芍沙。内服蒙成药中广枣约占 10%〔1〕 ,已被中华
人民共和国药典收载〔2〕。蒙医认为 , 广枣具有行气
活血 、养心安神功能。 用于治疗气滞血瘀 , 胸痹作
痛 ,心悸气短 , 心神不安等症〔3〕。 现代药理学研究证
实 ,广枣所含黄酮类主要是槲皮素 、柑桔素和山萘酚
-0-7 葡萄糖 ,能明显降低鼠耗氧速度和耗氧量 ,提
高耐缺氧能力 ,扩张冠状动脉 ,改善血液流变学各项
指标 ,清除自由基 , 提高心脏组织中 SOD 的活性〔4〕。
因此我们提取 、分离广枣总黄酮 ,并对其抗自由基作
用进行了研究。
1　材料及方法
1.1 　试剂:细胞色素 c(Cy t.c)、硫代巴比妥酸
(TBA)、四乙基丙烷(TEP), 均为 Sigma 公司产品。
核黄素(VB2)、蛋氨酸(Met)、本氮唑蓝(NBT)、超氧
化物歧化酶(SOD)等 ,均为国产生化试剂。
1.2　广枣总黄酮的提取〔5〕:取广枣 20 目粉末 50g ,
用75%乙醇回流提取 2 次 , 每次 2 小时。回收乙醇
后的水溶液在聚酰胺层析柱上分离 , 先用水洗脱弃
去 ,继用甲醇洗脱至洗脱液无色为止。甲醇收回得
黄色结晶 ,用甲醇溶解制成 0.3mg/ml供试液。以槲
皮素 、芦丁标准品为对照 , 在日立 557 型分光光度计
上作波长扫描 , 在 300nm 处有最大吸收峰 , 定名为广
枣总黄酮(Total Flavnoids of F rouctus Choero sponditis
TFFC)。
1.3　阴离子氧(O-2 ·)生成体系 、羟自由基(·OH)生
成体系 、丙二醛(MDA)生成体系均参考作者前期工
作〔6〕。绿色素生成及 O2 对血红蛋白影响参考冯立
明报告〔7〕。
2　结　果
2.1　TFFC 对·OH 引起溶血的抑制作用:在 Vit.c
-Cu-Cy t.c体系随着 TFFC 量的增加(30μg 、60μg、
120μg 、240μg)溶血度下降 81.5 、72.4、58.3、42.2%,
说明 TFFC 有抗·OH 引起的红细胞氧化溶血。
2.2　TFFC 抑制 O -2 ·对血红蛋白的氧化及绿色素
的生成:图 1 显示 ,不加 TFFC 的氧合血红蛋白减少
(540 和 575nm), 高铁血红蛋白(63nm)明显增加
(B)。加入 TFFCR一 OXYHb吸收峰明显增加 , MetHb
峰下降 , 并呈剂量依赖性。说明 TFFC 有效地抗 O-2
·对血红蛋白损伤。红细胞受 O-2 ·攻击后产生绿色
素。这可能是绿色高铁血色原和膜结合后形成的复
合物。 该复合物在 415nm 处有吸收峰〔7〕。图 2 显
示 , 当加入 TFFC 时 , 绿色素生成减少。说明 TFFC
可抑制绿色素的生成。
■　本课题受内蒙古教育厅资助
＊ 　内蒙古哲盟防疫站(028000)
112　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　1999年 12 月(第 5 卷)增刊
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.1999.s1.109
　　　　图 1　TFFC对磷苯三酚氧化血红蛋白的抑制
　　　　A.Hb　B.Pyr+Hb　C.Pyr+Hb+β-胡萝卡素
　　　　D.Pyr+Hb+SOD　E.Py r+Hb+TFFC(3.6 、15 、30 、
45μg)
图 2　TFFC对绿色素生成的影响
A.RBC　B.RBC+Py r　C.RBC+Py r+β-胡萝卡素
D.Py r+Hb+SOD　E.Py r+Hb+TFFC(3.6 、15、30 、45μg)
2.3　TFFC 对 O-2 ·、·OH 的清除和抑制作用:在
VB2-Met-NBT 和 Vit.c-Cu-Cy t.c 体系中 , TF-
FC 可有效的清除和抑制 O-2 ·、·OH 生成。表 1。
表 1　　TFFC 对O -2 ·、·OH 的清除和抑制作用
VB2-Met-NBT 体系 Vit.c-Cu-Cyt.c体系
浓度(mg/ L) I% S% 浓度(mg/ L) I% S%
0.77 5.36 9.24 15.10 24.96 13.76
2.33 31.30 33.52 30.20 48.82 25.76
3.88 64.30 58.96 60.30 65.79 57.58
5.42 78.57 76.88 120.42 94.34 78.79
7.73 79.11 79.19 180.16 — 89.39
　　对 O -·的 IC50=3.76mg/ L , SC50=3.06mg/ L
　　对·OH 的 IC50=49.39mg/ L ,SC50=74.30mg/ l
3　讨　　论
本研究的目的试图通过广枣总黄酮抗自由基作
用 ,为广枣治疗心血管病药理作用提供信息。 结果
表明 , TFFC有抗 O-2 ·引起 RBC 溶血作用。 当 RBC
受O -2 ·攻击后 , 血红蛋白被氧化 , 氧合血红蛋白减
少 ,高铁血红蛋白增加。 在上述体系中加入 TFFC
后随着浓度的增加 ,氧合血红蛋白增多 , 而高铁血红
蛋白下降。表明 TFFC 可保护 Hb 不被氧化 , 减少变
性和 Hb 与 RBC 的结合 ,因而绿色素生成相应减少。
这可能与广枣显著降低小鼠耗氧量 、耗氧速度 , 提高
耐缺氧能力有关。
在 VB2-Met-NBT 体系中 , TFFC 对 O-2 ·生成
的 IC50=3.76mg/ L , SC50 =3.60mg/ L , 并能有效的
清除和抑制 Vit.c-Cu-Cyt.c 体系所产生的·OH ,
IC50=49.4mg/ L , SC50 =74.3mg/ L。按照 Fenton
Reaction 原理 , 用 Fe2+/H2O2 诱导血浆脂质过氧化
物的生成 , TFFC 对此反应所产生的丙二醛也有抑制
作用 , 当加至 0.45mg 时 , 可能是其药理作用的一部
分 , 值得进一步研究。
　　参考文献
1.内蒙古卫生厅.内蒙古蒙药材标准.赤峰:内
蒙古科技出版社 , 1987;364
2.中华人民共和国卫生部.中华人民共和国药
典.北京:人民卫生出版社 , 1990;30
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况.中国民族医药杂志 , 1995;1(1);47
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(3)增刊:172
7.冯立明 , 潘华珍 , 张之南.麦芽醇对红细胞自
氧化损伤的保护作用.中国药理学报 , 1990;6(1):26
1999年 5月 14 日收稿
1131999 年 12 月(第 5卷)增刊　　　　　　　中国民族医药杂志