全 文 ：多棘海盘车 AST抗氧化作用研究①
高玫梅　刘　燕　燕启江　许东晖＊　许实波＊
(广州医学院神经科学研究所　广州　510182　＊中山大学生命科学学院药学系　广州　510275)
【提　要】　目的　以兔和大鼠心肌及肝组织匀浆为材料 ,研究一种从多棘海盘车(Asterias amurensis)中提取得到的活
性物质经结构改造和修饰得到的丁二酸二-(3β-羟基雄甾 5-烯-17-酮)酯新化合物(代号 AST)抗脂质过氧化作
用.方法　在体外组织匀浆自发或 Cys+FeSO4激发脂质过氧化模型上 , 以丙二醛(MDA)产生作为过氧化程度指标.
结果　AST在体外能抑制正常大鼠和兔心肌及肝匀浆过氧化脂质生成 ,并能对抗半胱氨酸和硫酸亚铁所致过氧化脂
质生成增加.结论　AST对兔和大鼠的心肌及肝组织匀浆均有不同程度的抗氧化作用.
【关键词】　丁二酸二-(3β-羟基雄甾 5-烯-17-酮)酯　组织匀浆　脂质过氧化
[ 中图分类号] 　R-33　　　　　　　　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1008-634X(2001)01-0007-02
Study on Antioxidation of Succinic Di-(3β-hydroxyandrost-5-en-17-one)Ester　GAO Mei-mei ,
LIU Yan ,YAN Qi-jiang , et al .(Institute of Neuroscience Guangzhou Medical College , Guangzhou 510182 China　Department
of Pharmacy , Life Sciences of School , Zhongshan University , Guangzhou 510275 China)
【Abstract】　Objective　To study antioxidation of Di-(3β-hydroxyandrost-5-en-17-one)ester(AST), a new compound
which was structure derivated from active substance from Asterias amurensis.Methods　Samples of tissues homogenates were pre-
treated with AST , then , addition of FeSO4+Cysteine(Cys)or not , the generation of malondialdehyde(MDA)was examined.Results
The production of lipid peroxides in normal cardiac , liver homogenate of rat and rabbit , elevation of production of lipid peroxides in-
duced by and FeSO4+Cys in.homogenate Conclusions　AST have the effect of antilipid peroxidation on rats and rabbits cardiac
and liver tissue.
【Key Words】　Di-(3β-hydroxyandrost-5-en-17-one)ester;　Tissues homogenates;　Lipid peroxidation
　　本实验样品由中山大学药学系从多棘海盘车
(Asterias amurensis)中分离并经结构改造和修饰得到
的一种丁二酸二-(3β-羟基雄甾 5-烯-17-酮)酯
新结构化合物(代号 AST).对其进行药理学活性筛
选 ,发现其有明显的抗心律失常和抗心肌缺血作用
(资料待发表),分析其机制 ,发现该化合物有一定的
抗氧化作用.本文以兔和大鼠心肌及肝组织匀浆为
材料 ,研究AST 的抗氧化作用 ,对 AST 的抗心律失常
和抗心肌缺血作用机理进行阐述.
1　材料与方法
1.1　实验材料
丁二酸二-(3β -羟基雄甾 5-烯-17-酮)酯 ,
由中山大学药学系提供 ,使用时以 0.5%的羧甲基纤
维素钠配成相应浓度.硝苯地平(nifedipine , Nif),大
同市利群制药厂出品;三氯乙酸(trichloroacetic acid ,
TCA), 上海试剂三厂出品(AR);硫代巴比妥酸(thio-
barbituric acid , TBA), Sigma 公司出品;其他均为市售
分析纯.
1.2　实验方法
1.2.1　组织匀浆制备　新西兰大白兔 ,击头致昏;SD
系大鼠 ,断椎处死.迅速取出内脏 ,预冷生理盐水中
洗净残血 ,用滤纸吸干 ,剪碎 ,以预冷生理盐水作 5%
(W/V)组织匀浆[ 1] .
1.2.2　自发过氧化的测定 　取组织匀浆 0.1ml 于
5ml试管中 ,加 0.1ml各浓度的 AST 、0.5%CMC 和硝
苯地平 ,对照组用 0.1ml生理盐水加 0.1ml的硝苯地
平(因硝苯地平为黄色).37℃水浴孵育 90min , 以
10%三氯乙酸(Tricholoric acid , TCA)1ml 终止反应并
沉淀蛋白;加入 0.67%2-硫代巴比妥酸 (Thiobarbi-
turic acid , TBA)1ml作显色剂 ,沸水浴 15 min 显色 ,
3000rpm 10min离心 ,取上清液测 532nm波长的光吸收
(OD532nm)[ 2] .按下述算式计算OD532nm :
7现代临床医学生物工程学杂志　2001年第 7 卷第 1期
① 基金项目:国家“九五”重点科技攻关项目(编号:96-C02-04-01)
作者简介:高玫梅(1973-),女 ,河北省人 ,助教 ,硕士　研究方向:天然产物的药理研究
AST 组 ΔOD532nm=各组 OD532nm-CMC组OD532nm
硝苯地平组 ΔOD532nm =硝苯地平组 OD532nm-
CMC组OD532nm -对照组 OD532nm
1.2.3　激发脂质过氧化的测定　方法同 1.1.2 ,只是
在 37℃水浴孵育前各组均加入 FeSO4(终浓度为
5×10-5mol/L)和半胱氨酸 (Cysteine , Cys)(终浓度为
2.0×10-4mol/L)激发脂质过氧化.
1.3　统计学方法
所有数据以 x ±s表示 ,组间差异性分析用 t 检
验 ,计算 p 值.
2　结果
2.1　对兔和大鼠心肌组织匀浆自发过氧化的影响　
与对照组比 ,AST 对正常大鼠和新西兰大白兔心肌和
肝脏匀浆体外脂质过氧化(Lipid per-oxidation)有显
著的抑制作用 ,有一定的量效依赖性.对心肌的抑制
作用 尤 为 突 出 , 低 (3.2 × 10-5 mol/L)、 中
(1.1×10-4mol/L)、高(3.2 ×10-4mol/L)剂量组的
AST 对大鼠和兔心肌匀浆激发脂质过氧化均有非常
显著的抑制(p<0.001).提示 AST 有较强的抑制过
氧化物生成的作用.结果见表 1 .
表 1　AST对兔和大鼠组织匀浆脂质过氧化的影响
Tab.1　Effects of AST on lipid per-oxidation of rat and rabbit tissue
homogenate(OD532nm)group dose mol·L-1 rat rabbit
组别 剂量
mol·L-1
大鼠 兔
心肌匀浆 肝匀浆 心肌匀浆 肝匀浆
CMC 0.30±0.02 0.25±0.03 0.22±0.02 0.24±0.03
Nif 1.0×10-4 0.21±0.02＊＊＊ 0.20±0.03＊ 0.12±0.01＊＊＊0.20±0.02＊
AST 3.2×10-5 0.24±0.03＊＊＊ 0.23±0.02 0.19±0.05 0.23±0.02
AST 1.1×10-4 0.23±0.02＊＊＊ 0.21±0.03＊ 0.15±0.03＊＊ 0.21±0.02
AST 3.2×10-4 0.21±0.02＊＊＊ 0.20±0.03＊ 0.13±0.02＊＊＊0.20±0.03＊
　　与 CMC组比较:＊p<0.05 , ＊＊p<0.01 , ＊＊＊p<0.001
2.2　对兔和大鼠心肌组织匀浆激发脂质过氧化的影
响　Fe2+-Cys作为自由基发生系统激发组织匀浆的
脂质过氧化.实验结果见表 2 ,与对照组比较 ,AST 对
正常大鼠和新西兰大白兔心肌和肝脏匀浆 Fe2+-Cys
激发的体外脂质过氧化均有显著的抑制作用 ,量效关
系明显。 对心肌 的抗氧 化作用 尤为 突出 , 低
(3.2×10-5 mol/L)、中 (1.1 × 10-4 mol/L)、 高
(3.2×10-1mol/L)剂量组的 AST 对大鼠和兔心肌匀
浆激发脂质过氧化均有非常显著的抑制(p<0.001).
提示 AST 有较强的清除 Fe2+-Cys自由基发生系统
激发的氧自由基的作用.结果(见表 2).
表 2　AST 对兔和大鼠组织匀浆脂质过氧化的影响
Tab.2　Effects of AST on lipid per-oxidation actived by FeSO4-Cys
of rat and rabbit ti ssue homogenate(OD532nm)
Group
Dose
mol·L-1
Rat Rabbit
Cardiac tissue Liver tissue Cardiac tissue Liver tissue
CMC 0.57±0.02 0.42±0.03 0.69±0.03 0.81±0.05
Nif 1.0×10-4 0.43±0.03＊＊＊ 0.39±0.03＊ 0.53±0.03＊＊＊ 0.71±0.05＊＊
AST 3.2×10-5 0.51±0.01＊＊＊ 0.39±0.03 0.58±0.05＊＊＊ 0.79±0.03
AST 1.1×10-4 0.46±0.03＊＊＊ 0.37±0.03＊＊ 0.53±0.03＊＊＊ 0.72±0.05＊
AST 3.2×10-4 0.42±0.02＊＊＊ 0.36±0.04＊＊ 0.51±0.02＊＊＊ 0.70±0.03＊＊＊
　　　与CMC组比较:＊p<0.05 , ＊＊p<0.01 , ＊＊＊p<0.001
3　讨论
在对海洋新化合物丁二酸二-(3β -羟基雄甾 5
-烯-17-酮)酯进行药理学活性筛选 ,发现其有明
显的抗心律失常和抗心肌缺血作用 ,对心肌缺血-再
灌诱发的心律失常有明显的预防作用(资料待发表).
氧自由基(oxygen free radical , OFR)的产生 、细胞膜的
脂质过氧化目前认为是心肌缺血-再灌诱发的心律
失常的主要机制之一.心肌缺血 -再灌造成大量
OFR堆积 ,OFR可氧化含巯基的蛋白酶 ,影响多种酶
的活性;使 DNA 链断裂;损伤血管内皮细胞;造成细
胞代谢紊乱和细胞损伤 ,进而诱发心律失常[ 3 , 4] .结
合我们在动物体内模型上所得到的抗氧化结果 ,提示
抗氧化作用是 AST 保护心肌作用的机制之一.
参　考　文　献
1　许实波 ,唐孝礼 , 李瑞声 等.海蛾提取物抗氧化作用研究
[ J] .中草药 , 1991 , 22(6):264
2　Zhao JH , Xu SB.Protective actions of blumea flavanones on pri-
mary cultured hepatocytes and liver subcellular organelle against
per-oxidation[ J] .Chin Pharmaceu Sci , 1998 , 7(2):147
3　Herse DJ , Bolli R.Reperfusion induced injury , manifestation
mechanism and clinical relevance[ J] .Cardiovas Res , 1992 , 26:
101
4　Werns SW , Lucchesi BR.Free radicals and ischemic tissue injury
[ J] .TIPS , 1990 ,(11):161
(收稿:2001-11-16　修回:2000-12-27)
8 Journal of Modern Clinical Medical Bioengineering　2001 , Vol.7 , No.1