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虎掌南星药材的质量标准研究
陆 丹1， 池玉梅2* ， 赵懿清1， 吴 皓2
(1． 无锡市第三人民医院，江苏 无锡 214000;2． 南京中医药大学，江苏 南京 210046)
收稿日期:2012-11-19
基金项目:南京中医药大学中药学一级学科开放课题资助 (2011ZYX2-007) ;国家十一五支撑计划 (2006BAI09B06-10) ;国家自然科
学基金 (30973939)
作者简介:陆 丹 (1985—) ，男，中药师，硕士，主要从事中药质量标准控制研究。E-mail:ldempty@ 163． com
* 通信作者:池玉梅，教授，主要从事色谱及相关技术的应用、中药质控标准。E-mail:ymchii@ njutcm. edu. cn
摘要:目的 建立虎掌南星药材快速定性与定量的分析方法。方法 对 13 批虎掌南星药材的水分、灰分、浸出物进
行检查，以腺嘌呤和尿苷为指标成分，采用 TLC 法对药材进行定性鉴别，采用 HPLC 法进行含有量测定。结果 13
批虎掌南星药材的各检查项平均值分别为水分 12. 93%、总灰分 3. 92%、酸不溶性灰分 0. 13%、醇溶性浸出物
11. 57%。TLC斑点清晰，各成分得到良好分离，13 批药材显示基本相同的暗斑。药材中腺嘌呤和尿苷分别在 1. 6 ～
50. 2 mg /L (r = 0. 999 9)和 1. 6 ～ 51. 5 mg /L (r = 0. 999 9)线性良好，平均回收率分别为 99. 44% (RSD为 2. 34%)和
100. 55% (RSD为 2. 45%)。结论 本法简捷、结果准确可靠、重复性好，可用于虎掌南星药材的质量控制。
关键词:虎掌南星;腺嘌呤;尿苷;质量标准
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)06-1274-05
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 06． 039
Quality standard for Pinelliae pedatisectae Rhizoma
LU Dan1， CHI Yu-mei2* ， ZHAO Yi-qing1， WU Hao2
(1． Wuxi No. 3 Peoples Hospital，Wuxi 214000，China 2． Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，China)
KEY WORDS:Pinelliae pedatisectae Rhizoma;adenine;uridine;quality standard
虎掌南星 (掌叶半夏) ，为天南星科半夏属植
物掌叶半夏 Pinellia pedatisecta Schott 的干燥块
茎［1］，尚未被《中国药典》收载，含有生物碱类、
苷类、二肽类、氨基酸、凝集素、甾醇类、脂肪
酸、糖、微量元素、核苷等成分［2］，因其具有祛
风定惊、降逆止呕、燥湿化痰、消痞散结的功
效［3］，临床上常代用天南星、半夏或混用，迄今
有关天南星科植物的毒性及炮制机制研究较
多［4-11］，而虎掌南星系统的质量标准研究报道尚
少。前期测试结果表明，天南星富含黄酮类成分，
半夏富含有机酸类成分，虎掌南星富含核苷类成
分，且核苷类成分大多具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤
的活性［12］，因此选择核苷类成分作为研究对象，
兼顾各批次药材核苷类成分的含有情况，最终选择
腺嘌呤和尿苷作为指标成分，本实验对购自各地的
虎掌南星药材进行性状鉴定、显微鉴别，对药材的
水分、灰分、浸出物进行测定，并对指标成分腺嘌
呤、尿苷进行薄层鉴别和定量测定，为虎掌南星药
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材质量标准的建立奠定基础。
1 仪器、试剂与材料
OlympusDX60 多功能显微镜 (Olympus 公司) ，
Waters 2695 高效液相色谱仪，配 Waters 2996 二极
管阵列检测器 (美国 Waters公司)。
AB-8 型大孔树脂 (天津农药股份有限公司树
脂分公司) ，硅胶 GF254预制薄层板 (青岛海洋化
工集团公司) ，乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯
(MERCK公司) ，水为 Millipore 纯水器制得的超纯
水，其他试剂为分析纯;
腺嘌呤、尿苷 (纯度均大于 99%，美国 Sigma
公司)。13 批虎掌南星，购自各产地，经南京中医
药大学谈献和教授鉴定为天南星科半夏属植物掌叶
半夏 Pinellia pedatisecta Schott的干燥块茎，见表 1。
2 方法与结果
2. 1 性状 块茎呈不规则的扁球形，直径 2 ～ 5
cm，有主块茎及多数附着的小块茎组成，形如虎
的脚掌。表面淡黄色或淡棕色，主块茎顶端有凹陷
的茎痕，周围有点状根痕。质坚实而重，断面不平
坦，色白，富粉性。气微，味辛辣，有麻舌感。
2. 2 鉴别
2. 2. 1 显微鉴别 以水装片观察药材所含的淀粉
粒，以水合氯醛透化装片观察药材所含的草酸钙
针晶和导管。本品为类白色或淡黄色粉末，淀粉
粒单粒呈类圆形、椭圆形或圆多角形，直径 2 ～
30 μm，脐点裂缝状、圆点状、 “人”字状或星
状;复粒较多，由 2 ～ 10 分粒组成。草酸钙针晶
束存在于黏液细胞中或散在，长 20 ～ 65 μm，黏
液细胞直径 60 ～ 130 μm。螺纹导管直径 12 ～
27 μm。
2. 2. 2 薄层鉴别［13］ 取虎掌南星药材 5 g (60
目)于 100 mL具塞锥形瓶中，加 50%乙醇 50 mL，
密塞，超声 (工作频率 40 kHz，功率 250 W)提
取 60 min，过滤，滤液挥除乙醇，通过 AB-8 大孔
吸附树脂柱 (内径 1 cm，长 15 cm) ，以水 100 mL
洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣以 1 mL乙醇复溶，
离心，取上清液作为供试品溶液。另取腺嘌呤和尿
苷对照品，加纯水制成 1 mg /mL 的混合对照品溶
液。照薄层色谱法 (2010 年版 《中国药典》一部
附录 VI B)试验，吸取对照品溶液 2 μL 和供试品
溶液 8 μL，分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以
三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-氨水 (8 ∶ 2 ∶ 6 ∶
0. 6 ∶ 0. 2)为展开剂，饱和 30 min，上行展开 10
cm，取出，晾干，紫外灯 (254 nm)下检视，供
试品色谱中 (顺序见表 1) ，在与对照品色谱相应
的位置上，显相同暗斑，见图 1。
1. 腺嘌呤 2. 尿苷 3-15. 样品
1. adenine 2. uridine 3-15. samples
图 1 虎掌南星薄层鉴别色谱图
Fig. 1 TLC chromatograms of Pinelliae pedatisectae
Rhizoma
2. 3 水分、灰分及浸出物检查［13］ 13 批次药材
按照 2010 年版 《中国药典》一部附录 IX H 水分
测定法项下 “烘干法”进行水分测定，附录 IX K
灰分测定法项下 “总灰分测定法”及 “酸不溶性
灰分测定”进行灰分测定，附录 X A 浸出物测定
法项下“醇浸出物测定法 (热浸法)”，以 50%乙
醇为溶剂进行浸出物测定，结果见表 1。
测定结果表明，13 批虎掌南星药材各项检查
结果差异较大，各批次平均含水量为 12. 93%，总
灰分和酸不溶性灰分分别为 3. 92%和 0. 13%，醇
溶性浸出物为 11. 57%。参照国家药典委要求，平
均含有量的 80%和 120%分别设置为下限和上限，
故建议水分不得超过 15. 0%，总灰分不得超过
5. 0%，酸不溶性灰分不得超过 0. 5%，醇溶性浸
出物不得少于 9. 0%。
2. 4 腺嘌呤和尿苷测定［14-16］
2. 4. 1 对照品贮备液的配制 精密称取腺嘌呤和
尿苷对照品各 10 mg，分别加水定容至 10 mL 量瓶
中，制成 1 mg /mL的相应对照品贮备液。
2. 4. 2 供试品溶液的制备 取虎掌南星药材粗粉
(60 目)0. 6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加
入水 10 mL，称定质量，超声 (频率 40 kHz，功率
250 W)45 min，取出，放冷，用水补足减失的质
量，摇匀，取适量溶液离心 5 min (15 000 r /min) ，
取上清液，即得。
2. 4. 3 色谱条件及系统适应性 选用 Lichrospher
C18色谱柱 (4. 6 mm × 150 mm;5 μm) ，流动相为
乙腈 (A)-水 (B)体系 (含 0. 1%甲酸) ，梯度
洗脱，0→6 min (0% A) ，25 min (10% A) ，29
min (25% A) ;采用 254 nm 作为检测波长，体积
流量为 1. 0 mL /min，柱温 30 ℃;进样量 20 μL。
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表 1 虎掌南星检查项测定结果 (%，n =3)
Tab. 1 Results of the inspection items of Pinelliae pedatisecta Rhizoma (%，n =3)
来源 批号 水分 RSD
灰分
总灰分 RSD 酸不溶性灰分 RSD
50%乙醇
浸出率
RSD
安徽 080508 11. 52 0. 20 4. 04 0. 28 0. 10 12. 76 9. 58 0. 99
河南 080802 12. 38 0. 26 3. 69 0. 06 0. 07 3. 14 7. 90 1. 86
四川 080810 11. 82 0. 30 4. 09 0. 66 0. 15 16. 95 10. 92 0. 41
山东 080812 13. 51 0. 12 3. 16 0. 33 0. 06 11. 58 11. 68 0. 15
河北 080812 12. 32 0. 26 4. 28 1. 53 0. 17 14. 72 11. 42 0. 76
陕西 080814 12. 98 0. 18 3. 32 0. 82 0. 08 5. 50 8. 22 1. 51
河北 081006 12. 23 0. 43 4. 09 0. 13 0. 05 9. 13 14. 20 1. 79
河北 081006 14. 20 0. 24 4. 24 0. 75 0. 10 5. 07 14. 31 1. 12
河北 081006 14. 91 0. 22 4. 83 0. 96 0. 40 11. 19 14. 63 0. 89
河北 081006 14. 12 0. 36 3. 88 1. 14 0. 16 11. 53 16. 24 0. 88
吉林 080820 12. 87 0. 34 3. 74 0. 94 0. 15 0. 13 9. 61 0. 96
四川 080906 11. 79 0. 40 3. 54 0. 11 0. 05 5. 12 10. 22 0. 41
安徽 081028 13. 45 0. 13 4. 10 0. 42 0. 14 10. 37 11. 43 1. 70
平均 － 12. 93 － 3. 92 － 0. 13 － 11. 57 －
RSD － 8. 13 － 11. 24 － 71. 30 － 22. 38 －
结果显示，腺嘌呤和尿苷的保留时间分别为
2. 8 min和 6. 4 min，与其相邻的色谱峰的分离度均
大于 1. 5，理论塔板数按腺嘌呤峰和尿苷峰计均大
于 3 000，对照品与供试品色谱图见图 2。
1. 腺嘌呤 2. 尿苷
1. adenine 2. uridine
图 2 对照品 (A)与样品 (B)高效液相色谱图
Fig. 2 HPLC chromatograms of reference substances
(A)and samples (B)
2. 4. 4 线性关系考察 精密移取各贮备液适量，
置 10 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，得对照
品混合溶液，含腺嘌呤和尿苷质量浓度分别为
50. 23 mg /L和 51. 50 mg /L，采用二倍稀释法连续
稀释 5 次，得 1、2、3、4、5、6 号对照品溶液。
上述各溶液按 2. 4. 3 项下条件分析，以峰面积
为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标作标准曲线，
得腺嘌呤回归方程 Y1 = 96 660X1 － 2 121. 6 (r =
0. 999 9) ，尿苷回归方程 Y2 =42 017X2 －1 639. 8 (r =
0. 999 9) ，结果表明腺嘌呤和尿苷分别在 1. 6 ～ 50. 2
mg /L和 1. 6 ～51. 5 mg /L呈现良好线性关系。
2. 4. 5 精密度试验 取 2. 4. 4 项下 4 号对照品溶
液，连续进样 6 次分析，腺嘌呤和尿苷对应的色谱
峰峰面积 RSD 分别为 1. 0%、0. 9%，说明仪器精
密度良好。
2. 4. 6 重复性试验 以 2. 4. 2 项下方法平行处理
同一份药材 (批号 080812，60 目)6 份，分别进
样分析，计算腺嘌呤和尿苷的峰面积 RSD 分别为
2. 2%、1. 6%，说明方法重复性好。
2. 4. 7 稳定性试验 同一份重复性试验样品分别
于 0、2、4、8、12、24 h 进样分析，计算腺嘌呤
和尿苷的峰面积 RSD 分别为 0. 8%、1. 2%，表明
供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 4. 8 加样回收率试验 分别精密吸取 2. 4. 1 项
下腺嘌呤和尿苷对照品贮备液 0. 72、0. 77 mL 置
100 mL量瓶中，用水定容，摇匀，得混合对照品
溶液。取已知含有量的药材 (批号 080812，60
目)0. 3 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 10
mL上述溶液，余下操作步骤同 2. 4. 2 项下供试品
溶液制备方法，平行 6 份，进样分析，采用外标
法，腺嘌呤和尿苷分别以各自回归方程计算，统计
RSD，结果显示回收率分别为 99. 44%、100. 55%，
RSD均小于 3. 0%，符合定量测定要求，见表 2。
2. 4. 9 样品测定 以建立的方法测定 13 批虎掌南
星药材供试品中腺嘌呤和尿苷的量，统计各批次平
行样品间以及各产地两种核苷量的 RSD，见表 3。
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表 2 腺嘌呤和尿苷加样回收实验结果 (n =6)
Tab. 2 Results of recovery tests for adenine and uridine
(n =6)
组分
取样量 /
g
测得值 /
μg
原有量 /
μg
加入量 /
μg
平均回收
率 /%
RSD /
%
腺嘌呤 0. 301 6 140. 76 69. 92 69. 55 99. 44 2. 34
0. 301 0 137. 97 69. 77 69. 55
0. 300 5 140. 50 69. 66 69. 55
0. 300 9 137. 23 69. 75 69. 55
0. 301 8 135. 41 69. 96 69. 55
0. 301 5 132. 83 69. 89 69. 55
尿苷 0. 301 6 164. 57 83. 29 79. 31 100. 55 2. 45
0. 301 0 164. 45 83. 12 79. 31
0. 300 5 163. 21 82. 98 79. 31
0. 300 9 160. 51 83. 10 79. 31
0. 301 8 164. 43 83. 34 79. 31
0. 301 5 160. 42 83. 26 79. 31
表 3 样品中腺嘌呤、尿苷的测定 (n =3)
Tab. 3 Determination of adenine and uridine in samples
(n =3)
来源 批号
腺嘌呤 /
(mg·g －1)
RSD /
%
尿苷 /
(mg·g －1)
RSD /
%
总量 /
(mg·g － 1)
安徽 080508 0. 13 1. 66 0. 14 1. 40 0. 27
河南 080802 0. 22 1. 23 0. 28 0. 62 0. 50
四川 080810 0. 18 0. 09 0. 23 1. 08 0. 41
山东 080812 0. 23 0. 96 0. 37 1. 53 0. 60
河北 080812 0. 23 0. 93 0. 28 1. 09 0. 51
陕西 080814 0. 20 1. 82 0. 32 0. 81 0. 52
河北 081006 0. 35 0. 58 0. 55 0. 78 0. 90
河北 081006 0. 11 1. 50 0. 34 1. 64 0. 45
河北 081006 0. 09 1. 46 0. 38 1. 90 0. 47
河北 081006 0. 11 1. 37 0. 24 1. 68 0. 35
吉林 080820 0. 12 0. 15 0. 54 1. 17 0. 66
四川 080906 0. 25 1. 06 0. 26 0. 89 0. 51
安徽 081028 0. 20 1. 50 0. 45 1. 63 0. 65
平均 － 0. 19 － 0. 34 － 0. 52
RSD /% － 39. 45 － 35. 81 － 30. 16
结果显示，不同产地两种核苷的总量具有一定差
异，最低有 0. 27 mg /g，最高可达 0. 90 mg /g，平
均含有量为 0. 05%，综合考虑，建议虎掌南星药
材中腺嘌呤和尿苷的总量不得低于 0. 04%。
3 讨论
实验中发现虎掌南星酸不溶性灰分含有量较
低，该检查项各批次平行样品间、各产地间相对标
准偏差较大，应该与此有关。由于药材中淀粉量较
大，且前期试验表明药材所含挥发性成分极少，因
而直接选择乙醇作为溶剂进行浸出率实验，根据其
化学成分的溶解性特点，选择热浸法实验，以药材
的浸出率为指标，试验了不同乙醇体积分数，最终
确定采用 50%乙醇作为提取试剂。
大量的糖类成分使虎掌南星药材在提取浓缩
后，点板不易展开，加之鉴别对象在药材中含有量
较低，用 AB-8 型大孔树脂吸附，水洗脱，乙醇复
溶可达到去糖、纯化、富集的目的，满足了薄层展
开要求。薄层色谱结果表明，采用薄层色谱法可以
检出 13 批样品均含有腺嘌呤和尿苷，且斑点清晰，
方法简捷、可行，故此方法可作为虎掌南星药材的
定性鉴别依据。
本实验以腺嘌呤和尿苷的量作为虎掌南星药材
质量控制的定量标准，含有量测定实验中考察了甲
醇-水和乙腈-水体系作为流动相，结果显示乙腈-水
体系较佳。为改善峰形，考察了流动相中分别加入
甲酸、醋酸和磷酸，结果显示加入甲酸效果较好，
经过试验最终确定加入量为 0. 1%。以峰形和分离
度为指标，分别考察体积流量和柱温，最终确定体
积流量为 1. 0 mL /min，柱温为 30 ℃。由于药材中
含大量淀粉，不宜用回流法提取，直接选用超声法
提取。试验分别用水和不同体积分数的乙醇提取，
最终选择提取效率最高的水作为提取溶剂。考察料
液比为 1 ∶ 10、1 ∶ 25、1 ∶ 50 时的提取效果，结果
显示，1 ∶ 10 的料液比已可基本提取完全，综合考
虑易操作性及色谱峰面积的适宜性等因素，采用
0. 6 g药材使用 10 mL 提取溶剂的方法。考察超声
时长为 30、45、60 min 的提取效果，结果显示 45
min已可基本提取完全，确定 45 min 为超声时长。
上述条件可满足含有量测定的要求，该方法简捷，
结果准确可靠，重复性好，可用于虎掌南星药材的
质量控制。
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June 2013
Vol． 35 No． 6
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壮药金边蚂蟥质量标准研究
陆峥琳1， 黄瑞松1* ， 潘红平2， 苏 青1， 周维海3
(1． 广西民族医药研究院，广西 南宁 530001;2． 广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005;3． 南
宁市科康生物科技有限责任公司，广西 南宁 530007)
收稿日期:2012-10-24
基金项目:广西壮药质量标准研究项目 (MZY2010074) ;广西医疗卫生重点科研课题 (重 2011027)
作者简介:陆峥琳 (1985—) ，女 (壮族) ，药师，从事民族药化学成分研究。Tel: (0771)3130064，E-mail:luzhenglin512@ 163. com
* 通信作者:黄瑞松 (1958—) ，主任药师，教授，从事中草药化学分析和新药研究。Tel: (0771)3130064，E-mail:hrs. 3130064
@ 163. com
摘要:目的 建立壮药金边蚂蟥质量标准，为控制该药材质量提供技术支撑。方法 采用理化和定量测定的方法，对
该药材进行性状、薄层鉴别 (TLC)、水分、总灰分、酸不溶性灰分、酸碱度和醇溶性浸出物和抗凝血酶活性的测定。
结果 制订了金边蚂蟥药材性状和 TLC鉴别方法，10 批样品水分平均为 10. 2%，总灰分平均为 2. 5%，酸不溶性灰分
平均为 0. 2%，酸碱度平均为 6. 7，醇溶性浸出物平均为 16. 0%，抗凝血酶活性平均为 267. 2 U /g。根据试验结果建立
了金边蚂蟥药材质量标准。结论 所制定的金边蚂蟥药材质量标准可用于评价该药材的质量。
关键词:金边蚂蟥;质量标准;TLC;抗凝血酶活性
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)06-1278-05
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 06． 040
Quality standards for Poecilobdella manillensis Lesson
LU Zheng-lin1， HUANG Rui-song1* ， PAN Hong-ping2， SU Qing1， ZHOU Wei-hai3
(1． Guangxi Academy of Minority Nationality Medicine and Pharmacology，Nanning 530001，China;2． College of Animal Science and Technology，
Guangxi University，Nanning 530005，China;3． Nanning Kekang Biotechnology Co．，Ltd，Nanning 530007，China)
KEY WORDS:Poecilobdella manillensis Lesson;quality standard;TLC;antithrombin activity
金边蚂蟥系医蛭科动物菲牛蛭 Poecilobdella
manillensis Lesson 的干燥全体。原动物在我国主
要分布于福建、台湾、广东、广西、海南和香
港［1］，广西全区各地均有分布，现广西已有人
工养殖［2-4］。金边蚂蟥为广西壮医使用的药材，
俗名蚂蟥、水蛭、肉钻子、马鳖、水麻贴等。
壮医认为，其可调龙路，散瘀肿，用于京瑟
(闭经)、呗农 (疮痈)、麻邦 (中风)、扭像
(扭挫伤)等症［5］。文献记载，本品为吸血类牛
蛭，主要含天然水蛭素和类组织胺合物［6-8］，其
中水蛭素具有抗凝、纤溶、抑制血小板聚集、
降低全血黏度、降血脂、抗血栓等作用［9-13］。目
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2013 年 6 月
第 35 卷 第 6 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
June 2013
Vol． 35 No． 6