全 文 ：收稿日期:2015-02-10; 修订日期:2015-07-06
基金项目:广西自然科学基金(No． 2013GXNSFAA019112)
作者简介:曹思思(1987-) ，男(汉族) ，湖北大冶人，广西中医药大学硕士
研究生，主要从事中药药理研究工作．
* 通讯作者简介:郑作文(1957-) ，男(壮族) ，广西南宁人，广西中医药大
学教授，硕士学位，主要从事中药药理研究工作．
狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 和 D － DalN所致
急性肝损伤小鼠的保护作用
曹思思，郑作文*
(广西中医药大学，广西 南宁 530001)
摘要:目的 研究狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4和 D － DalN所致的两种急性肝损伤小鼠的保护作用。方法 给予各组小
鼠相应药物灌胃给药 10 d，分别用 CCl4和 D － DalN造成两种急性肝损伤小鼠模型，测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和
谷草转氨酶(AST)含量，取小鼠肝脏制作 HE染色病理切片观察肝脏病变程度。结果 狗蚁草乙酸乙酯提取物可以降低
CCl4和 D － DalN所致的两种急性肝损伤小鼠血清中 ALT和 AST的含量，并可减轻 CCl4和 D － DalN所致肝脏病变。结论
研究狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4和 D － DalN所致的两种急性肝损伤小鼠有保护作用。
关键词:狗蚁草; 四氯化碳; D －半乳糖胺; 急性肝损伤
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 10． 018
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)10-2356-02
狗蚁草为豆科植物链荚豆 Alysicarpus Vaginalis (L．)DC． 的
全草，别名山土豆、假花生、大叶青等。性凉，味甘、苦，具活血通
络、清热化湿、接骨消肿、去腐生肌功效［1］。狗蚁草为广西地产
药材，有丰富的资源，民间常用其单味药治疗慢性肝炎［2］，笔者
未见国内外有关于狗蚁草防治肝脏疾病的研究报道。本实验研
究狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4和 D － DalN所致的两种小鼠急
性肝损伤的保护作用。
1 材料与仪器
1． 1 动物 昆明种小鼠 120 只，雌雄各半，体重(20 ± 2)g，由广西
中医药大学实验动物中心提供，合格证号，桂医动字第 11004 号。
1． 2 试剂 联苯双酯滴丸(批号:A02140101 浙江万邦药业股份
有限公司) ;四氯化碳(批号:A02140101 广东西陇化工厂产品) ;
D －半乳糖胺盐酸盐(Batch No:080612 Sigma) ;甲醛溶液(批号
2013112201 成都市科龙化工试剂厂) ;谷丙转氨酶(ALT)测试盒
(96T微板法) (批号:20140410，南京建成试剂有限公司) ;草转氨
酶(AST)测试盒(96T微板法) (批号:20140303 南京建成试剂有
限公司)。
1． 3 仪器 Epoch全波长酶标仪(BIO － TEK公司) ;Sorval ST 16
离心机(Thermo Fisher公司) ;BP211D电子天平(Sartorius 公司) ;
明澈 － D 24 UV超纯水仪(Millipore 公司)。
2 方法
2． 1 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠的保
护作用 取昆明种小鼠 60 只，雌雄各半，随机分组，分别为空
白组、模型组、联苯双酯组(0． 2 g /kg)、狗蚁草乙酸乙酯提取
物高剂量组(40 g /kg)、中剂量组(20 g /kg)、低剂量组(10 g /
kg) ，每组 10 只。空白组和模型组给予纯水灌胃，其余各组给
予相应的药物灌胃，给药容积为 0． 2ml /10g，1 次 /d，连续 10
d，在第 9 天除空白组外其余各组腹腔注射 0． 15% CCl4 花生
油溶液0． 1 ml /10g［3］，禁食 12 h，自由饮水，末次给药 1 h后摘
眼球取血，取出小鼠肝脏。分离血清，按试剂盒说明书测定测
血清中 ALT、AST 含量;取小鼠肝脏右叶制作 HE 染色病理切
片观察肝脏病变情况［4］。
2． 2 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 D － DalN 所致小鼠急性肝损伤
的保护作用 取昆明种小鼠 60 只，雌雄各半，随机分组，分别为空
白组、模型组、联苯双脂组(0． 2 g /kg) ，狗蚁草乙酸乙酯提取物高
剂量组(40g /kg)、中剂量组(20g /kg)、低剂量组(10g /kg) ，每组
10 只。空白组和模型组给予纯水灌胃，其余各组给予相应药物
灌胃，0． 2 ml /10g，1 次 /d，连续 10d，在第 9 天除空白组外其余各
组腹腔注射 D － GalN·HCl 500 mg /kg［3］，末次给药 1h后摘眼球
取血(取血前禁食 12h，自由饮水) ，取出肝脏。分离血清，按试剂
盒说明书测定测血清中 ALT、AST 含量;取肝脏右叶制作 HE 染
色病理切片观察肝脏病变情况。
2． 3 统计学处理 采用 SPSS 13． 0 软件，数据均以 珋x ± s 表示，组
间比较采用单因素方差分析，P ＜ 0． 05 为有统计学意义。
3 结果
3． 1 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠血清
ALT、AST含量的影响 实验结果见表 1。模型组血清 AST、ALT
含量与空白组比较明显升高(P ＜ 0． 01)。与模型组比较狗蚁草
乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组能明显降低小鼠血清 ALT 含量
(P ＜ 0． 05) ;狗蚁草乙酸乙酯提取物高、中剂量组能显著降低小
鼠血清 AST含量(P ＜ 0． 01) ，低剂量组能明显降低小鼠血清 AST
含量(P ＜ 0． 05)。
3． 2 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠肝脏
损伤的影响 如图 1 所示:空白对照组显微镜下肝小叶结构清晰
完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，汇管区结构正常，没有
出现肝细胞变性、坏死和炎症细胞浸润;模型组肝小叶结构破坏
严重，看不到清晰的肝索肝窦结构，中央静脉和汇管区周围出现
严重肝细胞气球样变并伴有炎症细胞浸润;联苯双酯组阳性组肝
小叶和汇管区结构完整，界板区出现少量肝细胞气球样变;狗蚁
草乙酸乙酯部位高剂量组肝小叶汇管区结构完整，汇管区周围出
现少量肝细胞气球样变;中剂量组肝小叶结构轻度紊乱，少量界
板区肝细胞发生气球样变，病变程度明显比模型组轻;低剂量组
肝小叶结构紊乱，肝小叶边缘出现肝细胞气球样变，总体病变程
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10
度与模型相似。
表 1 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 所致
急性肝损伤小鼠血清 ALT、AST含量的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/g·kg － 1
ALT
/卡门氏单位
AST
/卡门氏单位
空白组 － 30． 9 ± 3． 6＊＊ 38． 6 ± 3． 8＊＊
模型组 － 591． 5 ± 63． 3 174． 7 ± 16． 0
联苯双酯组 0． 2 485． 0 ± 44． 2＊＊ 123． 8 ± 17． 1＊＊
狗蚁草高剂量组 40 523． 9 ± 50． 9* 141． 8 ± 14． 1＊＊
狗蚁草中剂量组 20 519． 6 ± 56． 0* 141． 9 ± 18． 8＊＊
狗蚁草低剂量组 10 533． 5 ± 50． 4* 152． 9 ± 17． 8*
与模型组比较，* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01;n =10
图 1 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4
所致急性肝损伤小鼠肝脏病理改变的影响
3． 3 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 D － GalN 所致急性肝损伤小鼠
血清 ALT、AST含量的影响 实验结果见表 2。模型组血清 AST、
ALT含量与空白组比较明显升高(P ＜ 0． 01)。与模型组比较狗
蚁草乙酸乙酯提取物高、中剂量组能显著降低小鼠血清 ALT 和
AST含量(P ＜ 0． 01) ，低剂量组能明显降低小鼠血清 AST、ALT
含量(P ＜ 0． 05)。
3． 4 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 D － GalN 所致急性肝损小鼠肝
脏病变的影响 如图 2 所示，空白对照组显微镜下肝小叶结构清
晰完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，汇管区结构正常，没
有出现肝细胞变性、坏死和炎症细胞浸润;模型组肝小叶结构被
严重破坏，肝细胞排列不规则，肝细胞出现弥漫水泡变性，并伴有
炎症细胞浸润，汇管区出现明显炎症细胞浸润;联苯双酯组阳性
组肝小叶、汇管区结构正常，个别区域出现点状炎症细胞浸润;狗
蚁草乙酸乙酯提取物高剂量组肝小叶结构尚清晰，肝细胞个别出
现轻度肿胀;中剂量组肝小叶结构基本正常，中心静脉和汇管区
出现点状炎症细胞浸润，肝细胞出现轻度肿胀;低剂量组肝小叶
结构遭破坏，肝细胞出现明显肿胀，排不规则，汇管区出现炎症细
胞浸润，总体病变程度较模型组轻。
表 2 狗蚁草乙酸乙酯得取物对 D － GalN所致
急性肝损伤小鼠血清 ALT、AST含量的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/g·kg － 1
ALT
/卡门氏单位
AST
/卡门氏单位
空白组 － 17． 8 ± 1． 5＊＊ 20． 3 ± 2． 3＊＊
模型组 － 258 ± 32． 9 131． 8 ± 17． 2
联苯双酯组 0． 2 99． 8 ± 12． 6＊＊ 91． 2 ± 9． 3＊＊
狗蚁草高剂量组 40 136． 7 ± 18． 4＊＊ 95． 5 ± 13． 3＊＊
狗蚁草中剂量组 20 134． 3 ± 17． 2＊＊ 93． 4 ± 12． 5＊＊
狗蚁草低剂量组 10 226． 6 ± 27． 4* 111． 6 ± 14． 2*
与模型组比较，* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01;n =10
图 2 狗蚁草乙酸乙酯提取物对 D － GalN所致
急性肝损伤小鼠肝脏病理改变的影响
4 讨论
CCl4 经肝脏细胞中的 P450 代谢成三氯甲基、氯自由基等物
质，这些物质可以与细胞内的生物大分子发生共价键结合，造成
酶失活和细胞膜脂质过氧化，进而使肝细胞损伤坏死［5］，用 CCl4
造成急性肝损伤是一种常用的经典造模方法［6］。D － GalN 使肝
脏中 VDP －葡萄糖胺聚集和尿嘧啶核苷酸缺乏，造成细胞膜损
伤，使钙离子内流增加，进一步引起代谢紊乱，最终导致肝细胞损
伤、死亡。D － GalN 肝损伤模型是研究病毒性肝炎较好的模
型［7］。本实验通过 CCl4 和 D － GalN两种代表性的急性肝损伤模
型研究狗蚁草乙酸乙酯提取物对急性肝损伤小鼠的保护作用，实
验结果表明狗蚁草乙酸乙酯提取物能降低 CCl4 和 D － GalN 所
致急性肝损伤小鼠血清 ALT、AST 含量，减轻肝脏细胞气球样变
和炎症细胞浸润，改善 CCl4 和 D － GalN所致的肝脏病变，提示狗
蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 和 D － GalN 所致急性肝损伤小鼠
有保护作用。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期
参考文献:
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草［M］．上海:上海
科学技术出版社，1999:326．
［2］ 广西壮族自治区革命委员会卫生局．广西本草选编，上册［M］． 南
宁:广西人民出版社，1974:496．
［3］ 魏 伟，吴希美，李元建．药理实验方法学，第 4 版［M］．北京:人民
卫生出版社，2006:1128，1129．
［4］ 周晓军，张丽华． 肝脏病理诊断学［M］． 南京:江苏科学技术出版
社，2005:14．
［5］ 姚光弼．肝脏损伤机制［J］．中华消化杂志，1998，18(4) :235．
［6］ Yasuda M，Okabe T，Itoh J，et al． Differentiation of necrotic cell death
with or without lysosomal acttivation:application of acute liver injury
models induced by carbon tetrachloride(CCL4)and dimethynitrosamine
(DMN) ［J］ ． J Histochem Cytochem，2000，48(10) :1331．
［7］ Keppler D，Lesch Ｒ，Ｒeutter W，et al． Experimental hepatitis induced
by D － galactosamine［J］． Exp Mol Path，1988，9(2) :279
收稿日期:2015-04-25; 修订日期:2015-08-10
基金项目:广西自然科学基金(No． 2014GXNSFAA118185)
作者简介:何冠兰(1989-) ，女(汉族) ，广西贺州人，广西医科大学药学院
在读硕士研究生，学士学位，主要从事药理学研究工作．
* 通讯作者简介:韦锦斌(1968-) ，男(壮族) ，广西上林人，广西医科大学
药学院教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中药与免疫、新药研究
与开发研究工作．
骨碎补醇提物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响
何冠兰1，卢春远1，吕淑娟1，潘宇政2，周马林3，韦锦斌1*
(1．广西医科大学药学院，广西 南宁 530021; 2．广西医科大学第一附属医院，广西 南宁 530021;
3．广西医科大学基础医学院，广西 南宁 530021)
摘要:目的 研究骨碎补乙醇提取物(Ｒhizoma Drynaria ethanol extract，ＲDEE)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响及其可能
的作用机制。方法 腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立免疫抑制小鼠模型，给药 20 天后，取血，处死小鼠，采集肝脏、脾、胸腺。
检测小鼠胸腺、脾脏指数;巨噬细胞吞噬功能;外周血白细胞(WBC)计数、红细胞(ＲBC)、血红蛋白(HGB)、淋巴细胞百分
率(LYNPH%)和 IL － 2、TNF － α、IFN － γ水平;比色法测定脾脏乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性。结果 与
模型组比较，ＲDEE各剂量组的胸腺指数、吞噬指数 α、WBC、ＲBC、HGB、LYNPH%、LDH和 ACP活性明显提高;中、高剂量
组的脾脏指数、IL － 2、IFN － γ含量明显提高;高剂量组的廓清指数 K和 TNF － α含量明显提高。结论 ＲDEE对环磷酰胺
导致的免疫抑制小鼠的免疫功能有调节作用，可能是通过保护吞噬细胞和体液因子的非特异性免疫功能而发挥作用。
关键词:骨碎补醇提物; 环磷酰胺; 免疫抑制; 免疫调节
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 10． 019
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)10-2358-03
骨碎补(Ｒhizoma Drynariae )是水龙骨科(Polypodiaceae)多
年生蕨类植物槲蕨的干燥根茎。始载于唐《本草拾遗》，为历代
常用药物，味苦，性温，归肝、肾经，具有疗伤止痛、补肾强骨之功
效，主治跌仆闪挫、筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨痿软、耳鸣耳聋、牙
齿松动［1］。骨碎补主要含有黄酮、三萜、酚酸及其苷类化合
物［2］。现代药理及临床研究表明，骨碎补具有良好的促进骨折
愈合、抗骨质疏松、抗炎、促进牙齿生长、防治中毒性耳聋、降血脂
等活性。前期研究发现，骨碎补水提物对重型颅脑损伤大鼠的细
胞免疫功能具有保护或增强作用［3］。环磷酰胺(Cyclophospha-
mide，CTX)是一种临床上常用的恶性肿瘤治疗药物，该种药物在
治疗过程中常常引起机体免疫功能的降低。本实验通过腹腔注
射 CTX 制备免疫抑制小鼠模型，来探讨 ＲDEE 对免疫抑制小鼠
免疫功能的影响及其可能的作用机制，为其研究开发用于免疫调
节提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 动物 健康昆明种小鼠，SPF级，18 ～ 22g，雌雄各半，由广西
医科大学实验动物中心提供，实验动物质量合格证:SCXK 桂
2014 － 0002。
1． 2 药物和试剂 骨碎补(广西万丰药业有限公司，批号
20130403) ;注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号
04131209 ) ;盐酸左旋咪唑片(桂林南药股份有限公司，批号
131105) ;印度墨水 (北京博奥拓达科技有限公司，批号
20130718) ;考马斯亮蓝(南京建成生物工程研究院，批号
20150128) ;乳酸脱氢酶试剂盒(南京建成生物工程研究院，批号
20150121) ;酸性磷酸酶试剂盒(南京建成生物工程研究院，批号
0150113) ;小鼠 IL － 2、TNF － α、IFN － γ ELISA 试剂盒(武汉华美
生物工程有限公司，批号 G05011727，I04012974，D13012975)等。
1． 3 仪器 酶标仪(Thermo Labsystems公司) ;721 型分光光度计
(上海精密科学仪器有限公司) ;TGL － 16B 台式高速冷冻离心机
(上海安亭科技仪器厂) ;PT － 200 高速分散匀质机(上海标本仪
器厂) ;XT － 2000i 型全自动血液分析仪(希森美康) ;DW －
86L628 型超低温冰箱(青岛海尔股份有限公司)。
1． 4 骨碎补乙醇提取物的制备 由广西医科大学药理实验室提
取，取骨碎补药材 500g，加 10 倍量 70% 的乙醇回流提取 3 次，每
次 1h，过滤，合并滤液，旋转蒸发仪减压回收乙醇，浓缩至 500ml，
每毫升相当于生药量 1g。保存于冰箱中，临用前用生理盐水配
制成所需浓度。
1． 5 实验动物分组及给药 SPF 级昆明小鼠 90 只随机分为 6
组，每组 15 只。正常对照组，模型组，阳性药左旋咪唑组(剂量为
0． 05 g·kg －1·d －1) ，ＲDEE高、中、低剂量组(剂量分别为 10g·
kg －1·d －1、5 g·kg －1·d －1、2． 5g·kg －1·d －1)。正常对照组和
模型组分别给予等体积的生理盐水。除正常对照组外，其余各组
小鼠于给药的第 11，12，13 天均按 0． 08g·kg －1·d －1腹腔注射
CTX造模，正常对照组腹腔注射等体积生理盐水。连续灌胃给药
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10