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红芪和黄芪水提物对小鼠免疫功能影响的差异*
胡燕 程卫东# 刘欣 王学习
胡燕，女，博士
# 通信作者:程卫东，男，博士，教授，博士生导师，研究方向:中西医结合治疗常见病，E-mail:chengweidong888@ sina． com
* 甘肃省重点中医药科研立项项目(No． GZK-2008-7)
(兰州大学中西医结合研究所 甘肃 730000)
摘要:目的 探讨红芪和黄芪水提物对小鼠免疫功能影响的差异，进一步指导临床用药。方法 清洁
级昆明种小鼠 120只，随机分为 5 组，黄芪组(20 g /kg 黄芪)，红芪低、中、高剂量组(10、20、40 g /kg
红芪)和空白组(0. 02 mL /g生理盐水)。所有动物灌胃给药，1 次 /d，连续15 d，检测脾脏和胸腺指数、
巨噬细胞吞噬功能、迟发性变态反应、T淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性和细胞因子 IL-2 和 IL-
4。结果 与空白组比较，红芪和黄芪水提物均能提高巨噬细胞吞噬功能、脾 T淋巴细胞增殖能力和
NK细胞杀伤活性，促进细胞因子 IL-2和 IL-4的分泌(P ＜0. 05，P ＜0. 01)。与黄芪组比较，红芪中、高
剂量组的 T淋巴细胞增殖力、NK细胞活性和促进细胞因子 IL-2 和 IL-4 的分泌能力高于黄芪组(P ＜
0． 05，P ＜0． 01)。结论 红芪水提物对小鼠某些免疫功能的调节作用优于黄芪。
关键词:红芪;黄芪;自然杀伤细胞;白细胞介素-2;白细胞介素-4;小鼠
中图分类号:R285. 5
Difference between aqueous extracts of Hongqi (Radix Hedysari)and
Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari)in influence on immune function
in mice*
HU Yan，CHENG Wei-dong#，LIU Xin，WANG Xue-xi
(Institute of Integrated Chinese and Western Medicine，Lanzhou University，Gansu 730000)
Abstract:Objective To study the difference between aqueous extracts of Hongqi (Radix Hedysari)and
Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) in influence on immune function in mice，and provide a
guideline for their clinical application． Methods Clear Kunming mice (n = 120)were randomly divided
into the Huangqi group (20 g /kg of Huangqi) ，low-dose，mid-dose and high-dose Hongqi groups
(10 g /kg，20 g /kg and 40 g /kg of Hongqi)and blank group (0. 02 mL /g of normal saline solution)．
All mice were given relevant medicinal intragastrically once a day for 15 day． The indexes of spleen and
thymus，phagocytosis of macrophages，delayed allergy，proliferation of T cells，activity of natural killer
(NK)cells，and the levels of interleukin-2 (IL-2)and interleukin-4 (IL-4)were detected． Results
Compared with the blank group，aqueous extracts of Hongqi and Huangqi promoted the phagocytosis of
macrophages，proliferation of T cells，activity of NK cells，and secretion of IL-2 and IL-4 (P ＜ 0. 05，P
＜ 0. 01)． Compared with the Huangqi group，the proliferation of T cells，activity of NK cells and
secretion of IL-2 and IL-4 were higher in the mid-dose and high-dose Hongqi group (P ＜ 0. 05，P ＜
0. 01)． Conclusion The aqueous extract of Hongqi has a better regulation effect on the immune
function in mice than that of Huangqi．
Key words:Hongqi (Radix Hedysari) ;Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) ;natural killer cells;
interleukin-2;interleukin-4;mice
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第 34 卷第 9 期 2011 年 9 月
Vol． 34 No． 9 Sep． 2011
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
红芪为豆科植物多序岩黄芪(Hedysarum poly-
botrys Hand-Mazz)的干燥根，其原植物与黄芪同科
不同属，属于甘肃的道地药材。中医用药常两者不
分，均具有益气、补血等功效，常用于治疗气虚乏力、
食少便溏、中气下陷等虚证，现代研究中多用于治疗
相关免疫功能低下的疾病。1977 年版中国药典仅
将红芪列入黄芪项下，作为黄芪种类来源收载。自
1985 年版中国药典开始，才将红芪单列为一种中
药。红芪与黄芪药典标准区别在于:显微鉴别方面，
红芪粉末为黄棕色，薄壁细胞含草酸钙方晶，而黄芪
粉末为黄白色，薄壁细胞含淀粉粒;在薄层鉴别方
面，黄芪含有黄芪甲苷，而红芪未含有。日本学者久
保道德从红芪中分离出黄芪中不存在的抗菌成分
1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷，为黄芪和红芪进一步鉴
别奠定了基础［1］。已有文献报道，红芪和黄芪对机
体免疫系统、神经系统、内分泌系统均有广泛的作
用，但他们对免疫功能影响的差异未见相关报道。
这里探讨红芪和黄芪对小鼠免疫功能调节作用的差
异，为进一步指导临床合理用药奠定基础。
1 材料
1． 1 动物
清洁级昆明种小鼠 120 只，雌雄各半，体重(18
±2)g，甘肃中医学院实验动物中心提供，动物合格
证号:SCXK (甘)2004-0006-0000183。
1． 2 药品与试剂
红芪和黄芪，均采自甘肃省陇西县首阳镇，经甘
肃农业大学蔺海明教授鉴定分别为红芪、黄芪药材。
MTT，Sigma公司产品;RPMI l640 培养基，华美公司
产品;DMSO，碧云天生物技术公司产品;小牛血清，
杭州四季青公司产品;小鼠白细胞介素-2(IL-2)、白
细胞介素-4(IL-4)ELISA 试剂盒，武汉博士德生物
工程有限公司。其他试剂为市售分析纯。
1． 3 主要仪器
超净工作台(中国苏州安泰空气技术有限公
司) ，二氧化碳培养箱(日本 SANYO 公司) ，倒置相
差显微镜(德国 Olympus 公司) ，iMark 全自动酶标
仪(美国 BOI-RAD 公司) ，细胞培养板及血球计数
板，TGL-16G-A 冷冻离心机(中国上海安亭科学仪
器厂) ，BP-221S电子天平(德国赛多利斯公司)。
2 方法
2． 1 药液制备方法
红芪水煎液的制备:称取 400 g 红芪，加水，浸
泡，微火煮沸 60 min，提取滤液后再将残渣加水，微
火煮沸 30 min，合并 2 次滤液，制成浓度分别为
0. 5、1. 0、2. 0 g /mL的药液，在 4 ℃冰箱冷藏，备用。
黄芪水煎液的制备:称取 200 g 黄芪，煎煮方法同
上，制成 1 g /mL药液，在 4 ℃冰箱冷藏，备用。
2． 2 分组与给药
60 只小鼠随机分为 5 组，12 只 /组，分别为:黄
芪组(20 g /kg黄芪) ，红芪低、中、高剂量组(10、20、
40 g /kg 红芪) ，空白对照组(0. 02 mL /g 生理盐
水)。所有动物 0. 02 mL /g 等体积灌胃给药，1 次 /
d，连续 15 d。
2． 3 小鼠脾脏指数和胸腺指数检测
停药次日处死动物，剖取脾脏和胸腺称重，计算
脾脏和胸腺指数:脏器指数 =脏器重量 /体重
2． 4 小鼠巨噬细胞吞噬功能检测
处死动物前 3 d，腹腔注射 6 %的无菌淀粉肉汤
1 mL /只，1 h 后眼眶静脉丛采血，中性红法检测腹
腔巨噬细胞吞噬功能，以 OD540 nm作为评价指标
［2］。
2． 5 T淋巴细胞增殖反应测定(MTT法)
处死动物后无菌取脾，置于盛有不含小牛血清
的 RPMI-1640 不完全培养液的平皿中，洗去血迹，
剪去筋膜组织，研压过滤，收集细胞悬液注入无菌离
心管中，破坏红细胞，不完全 RPMI-1640 液洗 2 次，
重新悬浮，调细胞数为 1 × 107 mL －1，取细胞悬液
100 μL加入 96 孔细胞培养板内，每样本设 8 个平
行孔。其中 4 孔加入含 ConA 的完全培养液(终浓
度为 5 mg /L)100 μL /孔，4 孔则只加完全培养液
100 μL /孔，于 37 ℃ 5% CO2 饱和湿度条件下培养
68 h，加 MTT(5 g /L)10 μL /孔，在振荡器上振荡混
匀，继续培养 4 h。细胞培养终止后，加 SDS 100
μL /孔，振荡混匀，静置数分钟，测 OD492 nm值。
2． 6 自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性测定
制备脾细胞悬液作为效应细胞，靶细胞采用体
外传代的白血病细胞株 K562(1 × 105 mL －1) ，将小
鼠脾细胞和靶细胞各 0. 1 mL(E /T = 100∶ 1)加入 96
孔细胞培养板中，每份标本设 3 复孔;另将小鼠脾细
胞及完全 RPMI-1640 各 0. 1 mL加入 96 孔细胞培养
板中，每份标本设 3 复孔;同时加靶细胞 K562 及完
全 RPMI-1640 各 0. 1 mL于 96 孔细胞培养板中;并
设空白孔只加完全 RPMI-1640 0. 2 mL。振荡混匀，
放 37 ℃ 5% CO2 培养箱中培养 4 h，吸取各孔上清
0. 1 mL加于另一 96 孔细胞培养板中，加入 MTT(5
g /L)10 μL /孔，在振荡器上振荡混匀，37 ℃ 5%
CO2 培养箱中继续培养 4 h，细胞培养终止后，加
SDS 100 μL /孔，振荡混匀，静置数分钟，检测
OD570 nm值，计算 NK细胞杀伤活性。
426 北京中医药大学学报 第 34 卷
NK细胞
杀伤活性
(%)=实验孔OD值－效应细胞孔OD值
靶细胞孔OD值
×100%
2． 7 细胞因子 IL-2 和 IL-4 的测定
制备脾细胞悬液，破坏红细胞，以 RPMI-1640
液离心洗涤 2 次，用含 10% FCS的 RPMI-1640 完全
培养液调节细胞浓度 5 × 106 mL －1，加入 ConA 使最
终浓度为 10 mg /L，于 37 ℃ 5% CO2 饱和湿度条件
下分别培养 24 h(含有 IL-4)、48 h(含有 IL-2) ，收获
上清，冻存于 － 20 ℃备用。ELISA 法测定 IL-2 和
IL-4 含量。
2． 8 足跖增厚法检测迟发性变态反应
另取清洁级昆明种小鼠 60 只，分组方法同上。
末次给药后所有动物腹腔注射 0. 2 mL 5% SRBC致
敏，4 d后测量小鼠左后足跖厚度。测量部位足跖
再次注射 0. 2 mL 20% SRBC二次致敏，24 h后测量
足跖厚度，计算 2 次厚度差值，以足跖厚度增加值表
示迟发性变态反应能力。
2． 9 统计方法
结果用 SPSS 软件进行分析，数据以 珋x ± s 表示，
采用单因素方差分析进行方差齐性检验，多重比较
采用 LSD检验。
3 结果
3． 1 红芪和黄芪对小鼠脏器指数的影响
脾脏指数和胸腺指数是反映机体免疫功能的指
标。红芪组和黄芪组小鼠脾脏指数和胸腺指数均有
增加趋势，但无统计学意义，结果见表 1。
3． 2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的变化
红芪高剂量组和黄芪组使小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬功能增强，与空白组比较，具有统计学差异(P ＜
0. 05) ;红芪各剂量组与黄芪组结果相似，无统计学
差异。结果见表 1。
表 1 红芪和黄芪对小鼠脏器系数和巨噬细胞功能的影响(珋x ± s;n = 12)
Table 1 Influences of Hongqi and Huangqi on organ indexes and function of macrophages in mice(珋x ± s;n = 12)
组别
Groups
剂量
Dose
(g /kg)
胸腺指数
Thymus index
(mg /g)
脾脏指数
Spleen index
(mg /g)
巨噬细胞功能 OD540
The function of
macrophages
空白组 Blank group － 2． 385 ± 0． 445 2． 925 ± 0． 445 0． 398 ± 0． 040
黄芪组 Huangqi group 20 2． 565 ± 0． 345 3． 285 ± 0． 480 0． 437 ± 0． 041*
红芪低剂量组 Low-dose Hongqi group 10 2． 515 ± 0． 320 3． 135 ± 0． 485 0． 404 ± 0． 039
红芪中剂量组 Mid-dose Hongqi group 20 2． 685 ± 0． 390 3． 245 ± 0． 460 0． 425 ± 0． 041
红芪高剂量组 High-dose Hongqi group 40 2． 745 ± 0． 410 3． 320 ± 0． 510 0． 436 ± 0． 041*
F 1． 637 1． 346 2． 407
P 0． 178 0． 265 0． 060
注:与空白组比较* P ＜ 0． 05。
Note:* P ＜ 0． 05 compared with blank group．
3． 3 红芪和黄芪对迟发性变态反应、脾 T 淋巴细胞
增殖能力的影响
红芪各剂量组和黄芪组小鼠足跖肿胀程度有所
增加，与空白组比较，具有统计学差异(P ＜ 0． 05，P
＜ 0． 01) ;红芪各剂量组与黄芪组结果相似，无统计
学差异。红芪各剂量组和黄芪组使小鼠 T 淋巴细
胞增殖能力提高，与空白组比较，具有统计学差异
(P ＜ 0． 01)。同时，红芪中、高剂量组小鼠 T淋巴细
胞增殖能力高于黄芪组，与黄芪组比较，具有统计学
差异(P ＜ 0． 05)。结果见表 2。
表 2 红芪和黄芪对小鼠 T淋巴细胞增殖能力和足跖厚度的影响(珋x ± s;n = 12)
Table 2 Influences of Hongqi and Huangqi on volar thickness and proliferation of T cells in mice (珋x ± s;n = 12)
组别
Groups
剂量
Dose(g /kg)
淋巴细胞增殖力
Proliferation of T cells (OD492)
足跖肿胀度
Volar swelling(mm)
空白组 Blank group － 0． 544 ± 0． 062 0． 31 ± 0． 12
黄芪组 Huangqi group 20 0． 641 ± 0． 061＊＊ 0． 51 ± 0． 15＊＊
红芪低剂量组 Low-dose Hongqi group 10 0． 636 ± 0． 064＊＊ 0． 42 ± 0． 13*
红芪中剂量组 Mid-dose Hongqi group 20 0． 693 ± 0． 060＊＊△ 0． 52 ± 0． 16＊＊
红芪高剂量组 High-dose Hongqi group 40 0． 698 ± 0． 062＊＊△ 0． 54 ± 0． 15＊＊
F 5． 388 12． 073
P 0． 001 0． 000
注:与空白组比较* P ＜ 0． 05 ＊＊P ＜ 0． 01;与黄芪组比较△P ＜ 0． 05。
Note:* P ＜ 0． 05 ＊＊P ＜ 0． 01 compared with blank group;△P ＜ 0． 05 compared with Huangqi group．
526第 9 期 胡燕等 红芪和黄芪水提物对小鼠免疫功能影响的差异
3． 4 NK细胞杀伤活性、IL-2、IL-4 变化
红芪中、高剂量组和黄芪组 NK细胞活性增加，
与空白组比较，均有统计学差异(P ＜ 0. 01) ;与黄芪
组比较，红芪中、高剂量组 NK细胞活性具有统计学
意义(P ＜ 0. 05)。黄芪组和红芪各剂量组 IL-2 和
IL-4 水平均升高，与空白组比较，均有统计学差异
(P ＜ 0. 01) ;与黄芪组比较，红芪中、高剂量组 IL-2
和 IL-4 水平高于黄芪组，具有统计学意义(P ＜
0. 05，P ＜ 0. 01)。结果见表 3。
表 3 红芪和黄芪对小鼠 NK细胞杀伤活性和 IL-2 和 IL-4 水平的影响(珋x ± s;n = 12)
Table 3 Influences of Hongqi and Huangqi on activity of NK cells，and levels of IL-2 and IL-4 in mice(珋x ± s;n = 12)
组别
Groups
剂量
Dose(g /kg)
NK细胞杀伤活性
Activity of NK cells(%)
IL-2(ng /L) IL-4(ng /L)
空白组 Blank group － 23． 87 ± 4． 23 17． 17 ± 2． 01 31． 37 ± 4． 26
黄芪组 Huangqi group 20 25． 46 ± 3． 95 22． 34 ± 2． 24＊＊ 44． 59 ± 4． 02＊＊
红芪低剂量组 Low-dose Hongqi group 10 26． 24 ± 4． 22 22． 08 ± 2． 21＊＊ 43． 38 ± 4． 16＊＊
红芪中剂量组 Mid-dose Hongqi group 20 28． 79 ± 3． 93＊＊△ 24． 89 ± 2． 36＊＊△ 48． 18 ± 4． 14＊＊△
红芪高剂量组 High-dose Hongqi group 40 29． 89 ± 4． 08＊＊△ 25． 42 ± 2． 58＊＊△ 52． 74 ± 4． 86＊＊△△
F 4． 351 24． 521 41． 262
P 0． 004 0． 000 0． 000
注:与空白组比较＊＊P ＜ 0． 01;与黄芪组比较△P ＜ 0． 05 △△P ＜ 0． 01。
Note:＊＊P ＜ 0． 01 compared with blank group;△P ＜ 0． 05 △△P ＜ 0． 01 compared with Huangqi group．
4 讨论
据文献报道，红芪［3］、黄芪［4］及其有效提取物
均可以通过调节机体体液免疫、细胞免疫，来达到增
强机体免疫功能的能力。为了更好区别红芪和黄芪
药理作用，实验从免疫系统相关指标着手，综合比较
红芪和黄芪水提物对小鼠免疫功能的影响。实验主
要考察机体重要免疫器官胸腺和脾脏的脏器指数、
巨噬细胞吞噬能力、迟发性变态反应、T淋巴细胞增
殖反应和 NK细胞杀伤活性及相关重要细胞分泌因
子(IL-2、IL-4)的测定。结果表明红芪和黄芪均能
够通过增加小鼠胸腺和脾脏指数、促进巨噬细胞吞
噬功能、脾 T淋巴细胞增殖能力和 NK 细胞杀伤活
性、促进细胞因子 IL-2 和 IL-4 的分泌，来提高机体
的特异性和非特异性免疫功能，这些指标变化与相
关文献报道相符［3 － 4］。
IL-2 是机体免疫调节网络中的核心物质［5］，IL-
4 是引导前体细胞向辅助性 T细胞分化的直接刺激
因子，对其测定可以了解机体辅助性 T 细胞应答模
式［6 － 7］，二者均介导机体的特异性免疫。NK细胞是
机体重要的免疫细胞，主要介导机体的非特异性免
疫，与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在
某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发
生。实验结果显示，与黄芪组比较，红芪中、高剂量
组在 T淋巴细胞增殖力、NK 细胞活性和促进细胞
因子 IL-2 和 IL-4 的分泌方面优于黄芪，这些结果提
示红芪在提高机体特异性免疫和非特异性免疫方面
均高于黄芪。
综上所述，红芪与黄芪同科异属，其药理作用相
似，均常用于治疗免疫低下的相关疾病。红芪和黄
芪对免疫系统均有不同程度调整作用，尤以红芪作
用为甚，具体指标变化在 T 淋巴细胞增殖力、NK 细
胞活性和细胞因子 IL-2、IL-4 分泌等方面。据此，红
芪在调节机体免疫功能方面优于黄芪，在治疗临床
免疫相关疾病时可以优选红芪。实验在比较红芪和
黄芪差别的基础上，为红芪临床合理应用提供了实
验依据，也为红芪药材的开发提供了理论依据。
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626 北京中医药大学学报 第 34 卷