全 文 ：表 5　非共有峰占总峰面积的比值
Tab 5　Ra tio of non-to tal peak to to tal peak a rea
样品号 非共有峰峰面积 总峰面积 比例/ %
1 2.168 42.955 5.05
2 2.809 47.417 5.93
3 8.122 96.609 8.40
4 2.858 55.428 5.16
5 3.720 58.312 6.38
6 3.789 71.727 5.28
7 4.673 93.489 4.99
8 3.617 60.973 5.93
9 5.429 81.842 6.63
　　本研究所用血三七来自 9个不同产地 ,其指纹
图谱具有较高相似度 ,较好相对保留时间和相对峰
面积的比值范围 ,但也存在一些差异 ,从而为鉴别不
同产地血三七药材提供了一定依据 。
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[收稿日期] 2009-04-25
[ 基金项目] 湖北省卫生厅资助课题[ 编号:鄂卫发 2006(63)] 　[ 作者简介] 卢芙蓉 ,女 ,博士 ,讲师 ,主治医师 ,电话:027-85726395 , E-m ail:fu-
ronglulove@yahoo.com.cn　[ 通讯作者] 沈霖 ,电话:027-85726395 , E-mai l:shenlinhb@yahoo.com.cn
葫芦巴总皂苷对链脲佐霉素诱导的糖尿病大鼠血小板活化的调节作用
卢芙蓉 ,秦铀 ,沈霖 ,熊鹏程 ,朱闽 ,刘建国 ,范恒 ,唐庆　(华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科 ,湖北
武汉 430022)
[ 摘要] 　目的:观察葫芦巴总皂苷(TFGs)对链脲佐霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠血小板活化的调控作用。方法:将正常大鼠
和糖尿病大鼠随机分为未治疗对照组 、治疗对照组 、未治疗糖尿病组和治疗糖尿病组。两治疗组采用 TFGs 治疗 4 周。治疗
结束后 ,分别检测大鼠体质量 、血糖和胰岛素水平 ,采用流式细胞术检测各组大鼠血小板膜 P 选择素(CD62P)的表达 , 采用比
浊法检测各组大鼠血小板最大聚集率。结果:与正常大鼠相比 ,糖尿病大鼠血糖明显升高 , 体质量和胰岛素水平显著下降 ,糖
尿病大鼠经 TFGs 治疗后体质量明显增加 , 血糖下降 ,胰岛素水平升高;糖尿病大鼠血小板 CD62P表达和血小板聚集率明显
增高 ,经 TFGs 治疗后明显降低。结论:TFGs 具有明显抑制 STZ糖尿病大鼠血小板活化作用 , 是一种具有防治糖尿病血管病
变作用的降糖药物。
[ 关键词] 　葫芦巴;血小板活化;血小板聚集;P 选择素;链脲佐霉素
[中图分类号] R285　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2010)05-0369-04
Regulating effect of Trigonella f oenum-graecum L.saponin on platelet activation in streptozo-
tocin induced diabetic rats
LU Fu-rong , QIN You , SHEN Lin , XIONG Peng-cheng , ZHU M in , LIU Jian-guo , FAN Heng , TANG
Qing(Department of I nteg rated Chinese and Western Medicine , Union H ospital , Tongji Medica l Co llege , H uazhong Unive rsi-
ty of Science and Technolog y , Hubei Wuhan 430022 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To explore the regulating effect o f Trigonella f oenum-graecum L.saponin(TFGs)on platelet ac-
tivation in st repto zo tocin (STZ)induced diabe tic rats.METHODS　Bo th no rmal and diabetic ra ts we re randomized to untreated
gr oup and trea ted g roup.I n the tw o treated g roups , TFGs w ere given via g avage for 4 weeks.After the trea tment , the
weight , blo od gluco se and insulin were measured.Meanwhile , flow cytome try w as applied to determine P-selectin (CD62P)
and turbidity me thod w as adopted to test the platelet max imum agg regation ra te(M AR)in all g r oups.RESULTS　Compared
with no rmal rats , blood g luco se in diabetic rats w ere remarkably higher , w hile the w eight and level o f insulin we re notably low-
er.After the t reatment , weights and insulin lev el of diabetic ra ts w ere obviously increased , w ith blo od gluco se decreased.
Compa red w ith normal r ats , the expr ession of CD62P and MAR w ere significantly e leva ted and declined after the trea tment.
CONCLUSION　TFGs can effective ly inhibit platele t activa tion in STZ induced diabetic ra ts , indicating that it might be a po ten-
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tial drug for diabetic angiopathy.
KEY WORDS:Trigonella;platele t activation;platele t ag g regation;p-selectin;streptozo tocin
　　血管病变是糖尿病最常见的慢性并发症之一 ,
是糖尿病患者致残和死亡的主要原因[ 1] 。因此 ,明
确糖尿病血管病变的发生机制并有效防治 ,是目前
糖尿病治疗领域的重点 。研究报道 ,血小板活化在
糖尿病血管病变中发挥重要作用。我们前期研究也
发现 ,2型糖尿病早期即存在血小板活化 ,发生血管
并发症后 ,血小板活化更明显 ,且与血糖水平呈明显
正相关[ 2-3] 。因此 ,抑制血小板活化是防治糖尿病血
管病变的有效途径之一。
现代药理研究显示葫芦巴粗提物及其主要成分
有多种生物功效 。我们在一项随机 、双盲 、安慰剂对
照的临床研究中发现[ 4] ,中药葫芦巴种子提取物葫
芦巴总皂苷(trigonella foenum-graecum saponin ,
TFG s)联合磺脲类降糖药治疗继发性失效 2型糖尿
病患者 ,显示出较好的降糖作用和安全性 ,同时患者
的胰岛素抵抗水平明显下降 。李琳琳等[ 5] 报道 ,
TFG s对脑缺血大鼠具有明显的保护作用 ,同时在
该模型中发现 , TFGs还可以明显地抑制血小板聚
集。因此 ,本实验考虑具有降糖效应的 TFGs ,可能
在糖尿病中 ,同时具有抗血小板作用 ,有望成为具有
防治血管病变的新型降糖药物 。
为此 ,本实验采用链脲佐霉素(streptozotocin ,
S TZ)复制糖尿病模型 ,观察 TFG s对糖尿病大鼠血
小板活化及血小板聚集功能的调节作用 , 为后期
TFG s防治糖尿病血管病变的研究 ,奠定一定的前
期基础。
1　材料与方法
1.1　实验动物　Wistar 大鼠 , ♂,12 ～ 14周龄 ,体
质量 200 ～ 250 g ,购自华中科技大学同济医学院实
验动物中心。动物房温度控制在 20 ～ 22 ℃,光照时
间固定 ,每天昼夜各 12 h ,自由摄取水和食物。
1.2　药物与试剂　TFGs(四川中医药研究所 ,批号
050301);腺嘌呤核苷二磷酸钠(ADP ,美国 Sigma 公
司);大鼠胰岛素 ELISA 试剂盒(美国 R&D公司);
PE标记 P 选择素(CD62P)单克隆抗体(美国 BD公
司);S TZ(Sigma公司),STZ 在临用前 ,采用 50 mmol
·L-1 、pH 4.5的柠檬酸缓冲液溶解配制成 1%STZ 溶
液 ,以0.2μm滤膜过滤除菌 ,10 min内使用。
1.3　动物模型和实验分组:Wistar 大鼠适应性饲
养 1周后 ,随机分为 2组。第一组采用 STZ 60 mg·
kg-1腹腔注射 ,1周后剪尾取血用血糖仪检测血糖 ,
血糖超过>20 mmol·L-1 ,认定为造模成功 ,共获得
21只糖尿病大鼠 。同时 ,第 2组大鼠 20 只作为对
照 ,腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液 。造模完成后 ,随
机分出 11 只糖尿病大鼠和 10 只对照大鼠 , 给予
TFGs 80 mg·kg-1灌胃 ,余下大鼠采用生理盐水灌
胃 ,每天 1次 ,连续给药 4周 。
1.4　血标本采集　治疗完成后 ,大鼠采用苯巴比妥
钠(400 mg·kg-1)麻醉 ,采用含3.8%枸橼酸钠真空
采血管 ,开腹从下腔静脉采血。
1.5　胰岛素检测　方法参照文献[ 6] ,采用酶联免疫
吸附试验(ELISA)法 ,严格按照试剂盒说明书操作。
1.6　流式细胞术检测[ 7] 　采用全血法检测血小板
膜 CD62P。取 50 μL 全血 ,加入 PE 标记的单克隆
抗体 CD62P 室温避光孵育 30 min ,然后采用 1%多
聚甲醛 4 ℃固定 30 min。最后用 PBS 定容至 500
μL ,在 FACS420型流式细胞仪上检测 ,每个样本分
析 10 000 个血小板 , 结果以平均荧光强度(mean
f luo rescence intensity , MFI)表示。
1.7　血小板聚集功能检测[ 8] 　静脉血以 100 g 离心
15 min ,取上层液即为富血小板血浆(platelet rich
plasma , PRP),剩余部分以 500 g离心 15 min ,取上清
液即为贫血小板血浆(platelet poor plasma , PPP)。
用 PPP调零血小板聚集仪 ,在 PRP 中加入不同浓度
ADP(5 ,10 ,15 , 20 μmol·L-1)作为诱聚剂 ,在 SC-2000
血小板聚集仪上 ,采用比浊法检测血小板最大聚集率
(maximum aggregation rate , MAR)。
1.8　统计学处理　采用 SPSS 13.0软件进行统计分
析。计量资料用均数±标准差( x ±s)表示。组间比
较采用方差分析 ,组间两两比较采用 LSD法。所有
检验均采用双侧检验 ,P<0.05认为有统计学意义。
2　结果
2.1　体质量 、血糖和胰岛素水平的变化　由表 1可
见 ,与对照大鼠相比 ,糖尿病大鼠体质量明显减轻 ,
血糖水平明显升高 ,胰岛素水平明显降低(P 均<
0.001);在对照大鼠 ,治疗组和未治疗组体重 、血糖
和胰岛素均无明显差异(P 均>0.05);在糖尿病大
鼠 ,治疗组较未治疗组 ,体质量明显升高 ,血糖明显
下降 ,胰岛素水平明显上升(P 均<0.05)。
2.2　血小板膜 P-选择素的表达　由图 1 可见 ,未
治疗糖尿病大鼠血小板膜 CD62P 表达明显升高(P
均<0.05);对照大鼠经 TFGs治疗后 CD62P 表达
无明显变化(P >0.05);糖尿病大鼠经 TFGs 治疗
后 CD62P 表达明显降低(P<0.05)。
·370· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 5期 Chin H osp Ph arm J , 2010 Mar , Vol 30 , No.05
表 1　各组大鼠体质量 、血糖和胰岛素水平的变化( x±s)
Tab 1　Levels of weight , blo od g lucose and insulin in each
gr oup( x±s)
分组 N 体质量/ g
血糖
/mm ol·L-1
胰岛素
/Miu·L-1
对照组 未治疗 10 230±15 7.6±0.5 16.9±1.5
治疗 10 241±13 7.3±0.3 17.3±1.9
糖尿病组 未治疗 10 169±5a 29.1±2.3a 12.0±0.9a
治疗 11 206±11ac 18.3±2.1ac 14.8±2.5bc
注:与未治疗对照组相比 , a P<0.001;与未治疗对照组相比 , bP <
0.05;与未治疗糖尿病组相比 , cP <0.05
(注:与未治疗对照组相比 , a P <0.05;与未治疗对照组相比 , bP <
0.001;与未治疗糖尿病组相比 , cP <0.01)
图 1　各组大鼠血小板膜表面 CD62P 表达
Fig 1　Exp ression of p latelet mem brane CD62P in each group
2.3　血小板 MAR的变化　由图 2可见 ,糖尿病大
鼠血小板 MAR在各个浓度 ADP 刺激下 ,较对照大
鼠均显著升高;在对照大鼠 ,治疗组较未治疗组 ,血
小板 MAR有所下降;在糖尿病大鼠 ,治疗组较未治
疗组 ,血小板 MAR显著下降。
(注:与未治疗对照组相比 , ＊＊P <0.001;与未治疗对照组相比 , ＊P
<0.05;与未治疗糖尿病组相比 , #P <0.05)
图 2　各组大鼠血小板最大聚集率的变化
Fig 2　Platelet maximum aggregat ion rate in each group
3　讨论
中药葫芦巴系豆科植物葫芦巴 Trigonel la
f oenum-graecum 的干燥成熟种子 , 药典记载葫芦
巴种子有“温润阳 ,逐寒湿”的功效。现代药理研究
显示葫芦巴粗提物及其主要成分有多种生物功效 。
我们前期临床研究显示 TFGs联合磺脲类降糖药可
明显控制继发性失效 2 型糖尿病患者血糖水平 ,同
时可以改善胰岛素抵抗[ 9] 。本实验旨在观察 TFGs
对 STZ 诱导的糖尿病大鼠血小板活化的调节作用。
在 STZ 大鼠造模完成后发现 ,糖尿病大鼠血糖
升高 ,胰岛素水平和体质量明显下降 ,证实本实验造
模成功。在采用 TFGs 治疗后 ,能明显降低血糖。
同时研究中还发现 , TFGs可以升高 STZ 大鼠胰岛
素水平。有报道 ,葫芦巴活性成分 4-羟基异亮氨酸
具有促进胰岛素分泌的作用[ 1 0] 。TFGs 为混合物 ,
可能其中含有 4-羟基异亮氨酸 ,而产生胰岛素促分
泌作用。也可能是 TFG s其他成分 ,具有修复胰岛
细胞损伤和促进胰岛素分泌的作用。
STZ 大鼠存在血小板过度活化已经得到众多研
究证实[ 11] 。CD62P 表达在血小板膜表面 ,一旦血小
板活性 ,其表达明显升高 ,因此 CD62P 是血小板活化
标志之一[ 12] 。在本研究中观察到:STZ 大鼠 CD62P
水平明显升高 ,提示糖尿病大鼠体内血小板处于明显
活化状态。经 TFGs治疗后 ,CD62P 水平明显下降 ,
提示 TFGs具有抑制血小板活化的作用 。本实验中
血小板聚集实验进一步证实了上述发现 ,STZ 大鼠血
小板 MAR明显升高 ,而 TFGs可以显著抑制 STZ 大
鼠血小板聚集。同时 ,在正常大鼠中 ,TFGs对血小板
聚集也有一定的抑制作用 ,这与李琳琳等[ 5] 的报道一
致。但有报道葫芦巴对冠心病患者血小板聚集无明
显作用[ 13] ,该研究使用的药物为葫芦巴种子 ,研究对
象为冠心病患者 ,可能是与本研究结果不一致的主要
原因。TGFs抑制S TZ大鼠活化的机制考虑可能有:
一方面通过降低血糖 ,改善胰岛素抵抗 ,从而间接抑
制血小板活化;另一方面 ,本研究还显示 TFGs对正
常大鼠血小板聚集也有一定抑制作用 ,因此 TFGs对
血小板的直接作用也可能是其抑制 STZ 大鼠血小板
活化的重要途径之一。
本实验发现 TFGs可以明显抑制 STZ 大鼠血小
板聚集和血小板活化 ,同时可以降低血糖 ,升高胰岛
素水平 。考虑到糖尿病血管并发症与血小板活化之
间的密切关系 ,有理由相信 TFGs可能对防治糖尿病
血管并发症具有一定前景。但是 ,葫芦巴抑制 STZ
大鼠血小板活化的分子机制尚需进一步深入研究。
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[收稿日期] 2009-06-23
[ 基金项目] 湖北省科技攻关项目(编号:2007AA402A43)　[ 作者简介] 刘艳菊 ,女 ,博士 ,副教授 , 电话:027-62293390 , E-m ail:lyj1965954@
sohu.com
甘遂醋炙前后化学成分的变化
刘艳菊 ,夏艺 ,李水清 ,干国平　(湖北中医学院 ,湖北 武汉 430065)
[ 摘要] 　目的:比较甘遂不同极性部位在炮制前后整体化学成分的变化 , 初步探讨甘遂醋炙减毒的物质基础 。方法:将生甘
遂和醋甘遂醇提物经萃取得到不同极性部位 , 采用高效液相色谱法进行分析 ,比较其不同极性部位的 H PLC 图谱。结果:生
甘遂经醋炮制后 ,原有成分含量发生变化。以氯仿和乙酸乙酯部位含量变化尤为明显。结论:甘遂炮制后有新成分产生 ,也
有原成分消失 ,部分成分含量变化明显。
[ 关键词] 　生甘遂;醋甘遂;炮制;高效液相色谱法
[中图分类号] R283.3　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)05-0372-03
Study on chemical changes of constituents of the raw and processing Euphorbia Kansui root
LIU Yan-ju ,XIA Yi , LI Shui-qing ,GAN Guo-ping(Hubei Univer sity of Chinese Medicine , H ubei Wuhan 430065 , Chi-
na)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To com pare the chemical changes of w ho le constituents with different po lar par ts of the raw and
prepa red kansui roo t in o rder to discuss the mechanism of synerg ia and deto xication.METHODS　Differ ent po lar pa rts ex trac-
ted f rom the ethanol ex tracts o f the raw and vinegar-preparing kansui roo t and analy zed w ith H PLC re spectively , moreover ,
compa red the finge rprints.RESULTS　The raw kansui prepa red by vinegar caused the o rig inal constituents changed , especially
the par t of chlo rofo rm and ace tic ether have significantly changed.CONCLUSION　Some new constituents w ere produced by
prepa ring the r aw kansui , meanw hile , some constituents disappeared.
KEY WORDS:the raw Kansui ro ot;vinega r-preparing Kansui ro ot;processing;HPLC
　　甘遂属大戟科植物甘遂Euphorbia kansui TN .li-
ou ex TP .Wang的干燥块根[ 1] 。主产于陕西、河南 、山
西、宁夏 、甘肃。甘遂首载于《神农本草经 》 ,是一味传
统的峻下逐水药 ,被古医家誉为下水之圣药 ,具有泻水
饮 ,破积聚 ,通二便的疗效[ 2] 。从临床应用经验看 ,甘
遂泄水效果以生用为强 ,但其作用过于猛烈 ,刺激性和
毒性太大 ,安全性难以保证。醋炙能明显缓和其作用 ,
降低毒性。因此研究甘遂炮制前后化学成分的变化 ,
对于阐释其降毒机制有重要意义。
1　材料
戴安高效液相色谱仪 , Pump 680 LPG , Col-
umn TCC-100 ,Detecto r PDA-100 , 色谱柱:Ine rtsi l
ODS-3(250 mm×4.6 mm , 5 μm);甘遂药材(湖北
省中药材有限公司 ,经本院中药鉴定教研室陈科力
·372· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 5期 Chin H osp Ph arm J , 2010 Mar , Vol 30 , No.05