全 文 ：北 京 医 科 大 学 学 报
JO U R N A L O F B E I J I N G M E D I C A L U N I V E R S I T Y V o l
.
1 9 N o 4 1 9 8 7
石楠藤 P A F 受体拮抗剂活性成分
的分离和鉴定 ( I )
北京医科大学药学院 韩桂秋 黄 葵 举 魏丽华 嘴 李长玲
〔提要 ] 自草药石楠藤 P ; p e r w a l l i e h i i ( M i q . ) I { a n d一 M a z z首次分离出新木脂素海风藤酮 ( I ) ,
de
n u da it
n B (川 , 及 N 一异丁华一反 2一反 4 一癸 二烯 酸胺 ( H I ) 。 前 两者互为立体异构体 。 ( )I 为活性 强 ,
选择性强的血小板活化因子阻断剂 , 对抑制血小板活化因子引起的血小板聚集作用 (l )I 较 ( I )弱 , ( 11 1 )
无作用 。
石楠藤为胡椒科植物石楠藤 PI eP r w a il -
c h i i ( M i q
·
) H a n d
一
M a z z 的藤茎 , 为民 lb] 草药 ,
有祛风湿通络止痛的作用 , 用于治疗风寒湿痹
筋骨疼痛 。滇南本草记载治寒湿痹伤筋 ,本草纲
目记载煮汁服治上气咳嗽 “ ’ 。 石楠藤针剂治疗
心绞痛冠心病有效 `“ , 。 对其药理及化学研究尚
未见报道 。 最近报道 `“ , 自中药海风藤中分离出
海风藤酮 K a ds 盯 e n o en 有抑 制 血 小板活化因
子与受体结合的活性 ,活性强 ,选择性强 。 血小
板活化因子 P l a t e l e t A e t i v a t i n g F a e t o r P A F )
是近五年来发现的一种脂类介质 , 它与风湿 ,
气喘 , 过敏性休克 , 炎症 , 变态反应等有关
系 , 能使血管的渗透性增加 。 由于石楠藤为海
风藤的同属植物 , 以及上述民间药用记载 , 我
们以 P A F 引起的血小板聚集实验为指标 “ ’ , 作
有效部份及有效成分的寻找 , 分离得活性成分
海凤藤酮 ( I ) 及其立体异构体 d e n u d a t i n B ( 11 )
以及无活性成分 N 一异丁基 一反 2一反 4一癸 二 烯
酸胺 ( 111 ) 。 ( I ) ( 1 1) 的分得为石楠藤作为抗风
湿 , 治疗气喘等用途提供了解释 , 找到了海风
藤酮的新资源 。 本文报道化合物 ( I ) ( 11 ) ( 111 )
的分离 , 结构鉴 定及抑制 P A F 活性结果 。
由 于 化 合 物 ( I ) ( 11) 只 是 在 3 a 位 的
一 O C H 3 是 a 位或 刀位的差别 , 因此柱层层析
分离困难 , 而由制备薄层 , 重复展开而分得 。
化 合 物 ( )I 为 无 色 油 状 物 , 高 分 辨 质 谱
3 5 6
.
16 1 7
。 分子式为 C 2 1H 2 4 0 。 。 U V 氰六“ 2 8 6 . 5 ,
I R 1 6 7 5 e m
一 ` 示烯酮结构 , 无经基吸收 。 ’ H N -
M R 1
.
1 0
,
3 H
, 双峰 , J 二 7 H z , 示含 C H 3 。
3
.
1 3
,
3 11
, 尖单峰示含脂肪一 O C H 3 。 3 . 8 8 ,
单峰 , 6 H 示含 2个芳香一 O C H 3 。 6 . 7 9一 6 . 5 6
多重峰 3 H , 示含 3 取代芳环 。 ` H N M R 光谱
与海风藤酮标淮品 `“ ’ 的核磁共振光谱几乎完全
一致 , 故 ( )I 为海风藤酮 。 化合物 ( H ) 也为无色
油状物 ,质谱 ,分子量 35 6 ,分子式 C 2 1 H 2 40 。 , 质
谱的主要碎片峰与化合物 ( )I 相同 。 ’ H N M R 图
谱与化合物 ( )I 的相比较 , 只是 3 位 H 的 d 值
由 2 . 6 5 移向高场 2 . 18 外 , 其它各化学位移值
几乎完全一致 , 与文献报道的 d e n u d at in B 的
, H N M R 几乎完全一致 `。 , , 故 化合物 ( H )确定
结构为 d e n u d at in B 。 另外 , 自二氯 甲烷有效
部分 , 经硅胶柱层析分离 , 纯制 得 白 色结晶
( H l )
, 其紫外 、 红外及 ’ H N M R 谱与已知化合
物 N 一异丁基 一反 2一反 4一癸二烯酞胺 ` “ ’ 的 相应
光谱比较几乎完全一致 , 故证明 ( 111) 为此化合
物 。
海风藤酮 , d en u d a it n B , 及 N 一异丁基 -
反 2 一反 4 一癸二烯酞胺皆首次 自石楠藤分离 。
药学院 85 、 86 届毕业生 。
.2 4 4
·
六 `尸 0
1:
。
\ 尹产 \ 丫 / 、
4 8 1
( I ) R = 刀一 O C H :
(11) R = a 一 O C H .
实 验 部 分
熔点用 K fo ler 显微熔点仪 测定 , 熔点未
校正 ,紫外光谱用 B ac k m an D u 一 7 B 型仪测定 ,
红外光谱用 N i co le t 5 D x 一 F l 型仪测定 , 核磁
共振谱用 J E O L F x 一 1 00 型及 F x 一 90 Q 型仪测
定 , T M S 为内标 , 质谱 用 Z A B 一 H S 型 仪 测
定 , 层析用硅胶为 青 岛 海 洋 化 工 厂 硅胶 H
( 1 0~ 连。 拜 )及硅胶 G F Zo 4 。 石楠 藤原料 购自湖
南长沙药材公司 。
一 、 提取分离 :
石楠藤粗粉 3 k g , 分别以 二氯 甲 烷 , 甲
醇 , 水冷浸提取 , 减压浓缩 , 得二氯甲烷 , 甲
醇 , 及水三种提取物 , 以 P A F 引起 的血小板
聚集实验为指标 , 证明二氯甲烷提取部份有抑
制活性 。 取二氯甲烷提取物 65 9 , 用硅胶柱层
析 , 石油醚 : 乙酸乙醋 ( 9 : 1) , 逐渐 增加 乙酸
乙醋的比例 , 进行梯度洗脱 , 最后以甲醇洗脱 ,
每 1 0 m l 为一流份 , 以 T L C 检识 , 合讲斑点
组成类似的流份 。 减压浓缩 , 共得 7 部份 。 以
P A F 引起的血小板聚集实 验为指标 , 测定活
性 , 其中第 4 、 5 两部份抑制 活性 较明显 。 两
部份合供共 n g 。 取其中 7 9 , 以硅胶柱层析 ,
石油醚 : 乙醚 ( 10 : 1) 洗脱 , 每 10 m l 为一流份 ,
仍如上操作 , 共得 5部份 。 其中第二部分抑制
血小板聚集作用最强 。 再以柱层析分离第二部
份 ( 60 0 m g ) 以二氯甲烷 : 乙酸乙醋 ( 1 9 : 1 ) , 梯
度洗脱 , 如上操作 , 又分得 10 部 份 , 经血小
板聚集活性测定 , 共中第二部份最强 。 再将此
部份作制备 T L C , 硅胶板 , 以二氯甲烷 : 乙酸
乙醋 ( 4 : 1) 连续重复展开 5 次 , U V Z o 4 下检识 ,
呈三条色带 。 其中带二洗脱的流份 , 对血小板
聚集实验呈活性 。 将带二再以制备 T L C 分离 ,
以石油醚 : 乙醚 ( 4 : 1) 重复展开 4次 , 得化合物
( I )及化合物 ( 11 ) 。
另取二氯甲烷提取物 2 . 6 9 , 经三次 硅胶
柱层析 , 石油醚 , 丙酮梯度洗脱 , 得 5 部份 。
取部份 4 ( 。 . 3 9 )经硅胶柱层析 (乙醚 :二氯甲烷
5 : 1 洗脱 ) , 得固体物 , 石油 醚 重结 晶得白色
针品 ( 1 11 ) 。
二 、 结构鉴定 :
化合物 ( I ) : 无 色 油 状 物 ; M S (m / e ) :
3 5 6
.
1 6 2 7 (M + ) (分子式为 C Z : H Z` 0 。 ) 3 2 5 , 1 7 8
( 1 0 0% ) 1 6 3
, 1 5 1 ; I R v 二忿二e m 一 , : 2 9 3 5 , 1 6 7 5 ,
1 6 4 8 , 1 6 2 0 , 15 1 0
,
1 2 6 0
,
1 1 7 5 , 10 6 0 , 9 2 5 ;
U V 久氛嘿H ( 。 ) : 2 3 4 ( 1 3 8 2 2 ) , 2 8 6 ( 5 6 9 9 ) ; ’ H N -
M R 占p p m ( C D C 13 ) : 1 . 1 0 ( 3 H , d , J = 7 H z ,
C H 3
一 3 )
, 2
.
6 3 ( I H
,
m
, H 一 3 )
, 3
.
13 ( 3 H
,
S
,
C H 30
一 3 a )
,
3
.
1 4一 3
.
2 4 ( Z H
,
m
, H 一 s )
, 3
.
5 6
( 6 H
,
S
,
C H 3O 一芳环 ) , 5 . 0 6一 5 . 2 1 ( 3 H , m ,
H一 2 , H一 10 )
, 5
.
7一 5
.
9 0 ( I H
,
m
,
H
一 9 )
, 5
.
8 2
( I H
, S
,
H 一 7 )
, 6
.
2 8 ( I H
, S , H 一 4 )
, 6
.
7 9 -
6
.
8 6 ( 3 H
,
m
,
A r H )
。
化合物 ( x l ) : 无色油状 物 。 M S (m / e ) 3 5 6
( M
+
)
, 3 2 5 , 17 8 ( 1 0 0% )
, 1 6 3 , 1 5 1 , U V久票火, ,
( 。 ) : 2 3 4 ( 1 8 7 5 1 ) , 2 8 5
.
5 ( 7 2 2 1 )
, 2 9 9
.
0 ( 6 3 36
,
S h ) ; I R v欲梦二e m 一 ’ : 2 9 3 5 , 1 6 7 5 , 1 6 4 3 , 1 6 2 2 , 9 2 6 ,
, H N M R 占P Pm ( C D C 13 ) : 1 . 1 7 ( 3 H , d , J 二 7
H z
,
C H 3
一
3 )
,
2
.
1 8 ( I H
,
m
,
H 一 3 )
,
3
.
1 3 ( 3 H
,
S
,
C H 3O
一 3 a )
,
3
.
1 8 ( Z H
,
m
, H一 8 )
, 3
.
8 8 ( 6 H
,
S
, Z A r 0 C H 3 )
, 5
.
0 6一 5
.
3 ( 3 H
,
m
,
H
一 1 0 ,
H 一 2 )
, 5
.
7 一 6
.
0 ( I H
,
m
, H 一 9 )
, 5
.
8 1 ( I H
,
S
,
11一 7 )
,
6
.
2 ( I H
, S , H 一 4 )
,
6
.
7 6 一 6
.
8 ( 3 H
,
m
, A r 一 H )
。
化合物 ( 11 1) : 白色针晶 , m p 8 6 . 5~ 8 8 o C ,
溶于二氯甲烷 、 丙酮 、 甲醇 、 乙醇 ; M s( m e/ ,
% )
, 2 2 3 ( M 十
,
6
.
4 5% )
, 2 0 8 (M一 C H 3 , 5 . 6 5% ) ,
O
l}
1 6 6 ( M
一 C 4H g , 7
.
2 6% )
, 1 7 9 ( M
一
C 一 N H Z ,
6
.
5% )
, 1 5 2 ( M
一
C 4 N H ,。 , 1 0 0% ) , 5 7 ( C 4 H 。 ,
1 6
.
9% ) ; U V 只盘at H ( 。 ) : 2 5 8 . 5 ( 2 9 5 1 2 ) ; I R
v 盖奢二e m 一 , : 5 2 9 7 , 3 2 a 4 , 2 9 5 6 , 2 9 2 9 , 1 6 5 6 ,
·
2 4 5
.
9 9 7 ;’ H N M Rd PP m ( C D C 13 ): 0
.
9 2 ( g H
,
d
,
J = 7 1
一
12
,
3 C H 3 )
, 2
.
3 ( 6 H
, 宽 峰 3 C H Z ) ,
1
.
8 ( 1 }1
,
m )
,
2
.
1 8 ( Z H
,
m )
, 3
.
1 8 ( Z H
,
t
,
J = 7 H z ) 5
.
5 ( I H
, 宽峰 N H ) 。
三 、 引起血小板聚集实验 ` 4 ’ :
取抗凝兔血 , 离 心 分离 富 血 小 板 血桨
( P R P )
。 于比浊小管内加人一定量 P R P , 以亚
最大剂量的 P A F 为致聚剂量引起 血小 板聚集
(最大聚集度调为 10 。% ) , 观察样品对 P A F所
致聚集的影响 (见表 ) 。
聚集抑制% 一对照管聚集% 一样品管聚集 %对照管聚集%
x 1 0 0%
参 考 文 献
表 各化合物的不同剂量对 P A F
所致聚集的影响
化 合 物 浓 度 抑制率 %
nU内O舟O八nU6亡ù.且
,上óO内D八曰n丹nUnùn八`皿件d
111
10拼 g /m l
5产g /m l
5 x 10
一 s
m o l / m l
10 召g /m l
5 产g / m l
5 x 1 0
一 。
m o l /m l
1 0产g /m l
5 1, 9 /m l
1 0 0
1
. 江苏新医学院 , 中药大辞典 下册 . 上海科学技术出版社
1 9 7 7 : 15 5 6
.
2
. 钟惠平等 . 海凤藤注射液的制备 . 中草药通讯 1 9 7幻 :2
2 4
.
3
.
C h a n g M N
,
e l a l
.
N e o l i g n a n f r o m P IP e r f u t o k a d
-
s u r a
.
P h y t o e h e m i s t r y 1 9 8 5 ; 2 4 ( 9 )
: 2 0 7 9
.
4
.
S a n
一 B a o H w a n g
,
e t a l
.
s P e e i f i e R e e e P t o r S i t e s f o r
l
一 。 一A I k y l一 2一 0 一 a e e t y l一 S n 一 g l y e e r o 一 3一 P h o s P h o e h o l i n e
( P l a t e l e [ A e t i v a t i n g F a e t o r ) o n R a b b i t P l a t e l e t
a n d G u i n e a P ig S m o o t h M
u s e l e M e m b r a n e s
B i o e h e m i s t r y 1 9 8 3 , 2 2
: 4 7 5 6
.
5
.
T o s h i y u k i L i d a
, e t a l
.
N e o l i g n a n s f r o ln M a g n o l i a
D e n u d a t a P h y t o e h e m i s t r y 19 8 2 , 2 1 : 2 9 3 9
.
6
.
B a n e r J I A
,
e t a l
.
I s o l a t i o n o f N
一
i s o b u t y l d e e a
-
t r a n s一 2 一 t r a n s 一 4 一 d盛e n a !n j d e f r o m P jP o r S y l v a ri c u m
R o x b
.
E x P e r i e n t i a 1 9 7 4 , 5 : 2 23
.
T H E I SO L A T I O N
R E C E P T O R
A N D I D E N T I F I C A T I O N O F P A F
A N T A G O N I S T F R O M P I P E R
W A L L I C H l l (M I Q ) H A N D
一
M A Z Z
S e h o o l o f P h a r m a e e u t i e a l S e i e n e e s H a n G u i
一 q i u
, e t a l
P IP e r w a l l i e h i i ( M i q ) H a n d
一
M a
z z F a m i l y p i p e r a e e a e
,
h a s b e e n u s e d i n C h i n e s e f o l k m e胶贾n e f o r
t h e t r e a t m e n t o f r h e u m a t o i d a r t h r i t i s a n d a s t h m a
.
T w o n e o l i g n a n s ( 1 ) ( 2 ) a
n d o n e a m i d e ( 3 ) w e r e
i s o l a t e d f o r t h e f ir s t t im e f r o m t h i s p l a n t
.
T h e s p e e t r o s e o p i e e v i d e n e e f o r k a d s u r e n o n e ( 1 )
,
d e n u d a t i
n
B ( 2 ) a n d N
一
i s o b u t y l
一 d e e a 一 t r a n s 一 2一 t r a n s 一 4一 d i e n a m i d e ( 3 ) 15 p r e s e n t e d
.
K a d s
u r e n o n e h a s b e e
n r e p o r t e d a s a n o r a l l y a e t i v e s P e e i f i e P A F r e e e p t
o r a n t a g o n i s t r e e e n t l y
.
I n t h e t o s t o f p l a t e l e t a g g r e g a t i o n e a u s e d b y P A F
,
( 2 ) w a s f o u n d l e s s a e t i v e t h a n ( 1 )
,
w h e r e a s ( 3 )
s h o w e d n o P A F a n t a g o n i s t i e a o t i v i盆y .
(上楼第 2 4G页 )
S V T
。 证实旁路已被切断 。 追踪一年再无心动过速发
作 。
讨论 : 预激综合症合供 A V R T 是较常见的心律失
常 . 在合讲房颤时可诱发致命的心室纤颤。 药物仅能
对症治疗 , 并常需终身服药 。 丰术洽疗常能达到根治
的 目的 , 术前需做电生理检查确定旁道的位置 、 不应
期 ; 旁道是否为折返环的组成部份以及是否存在有多
条旁道或房室结双径道 , 以便决定手术或药物治疗。
本例经电生理检查明确旁道位置后手术得以治愈 。