全 文 ：参考文献
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The effect of Liuweidihuang Wan，Jinkuishenqi Wan and Jianguerxian Wan differentiation-related genes
expression in the process of rat BMSCs adipogenic differentiation
Wei Jianan，Han Ling，Cheng Zhian，Sun Jing，Duan Xiaodong
(The Second Affiliated Hospital，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006)
Objective:To study the efficacy of tonifying Qi of the kidney on rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs)adipogenic differen-
tiation． Methods :Whole bone marrow were cultured，to obtain BMSCs by anchorage． Then BMSCs were treated with Liuweidihuang Pill，or
Jinguishenqi Pill，or Jianguerxian Pill-containing serum (on behalf of tonifying kidney-YIN，tonifying kidney-YANG and kidney-tonifyng
bone-invigorating formula，respectively)in the process of rat BMSCs adipogenic differentiation． Reverse transcription，real time-fluorescent
quantitative-PCR (RT real time-FQ-PCR)was used to determine Lpl，Fabp4 and PPARγ mRNA expression level． Results :As compared to
the control group(10% serum) ，expression level of Fabp4 mRNA in either the kidney-Yin groups or the kidney-YANG group(10% drug-
containing serum)decreased by 33%，but no statistical significance;Lpl mRNA expression levels in the kidney-YANG group and kidney-
tonifyng bone-invigorating group also decreased，of the total kidney-YANG group was statistically significant (P ＜ 0． 05)． Change of Pparγ
mRNA expression was not significant in all groups． Conclusions :Significant change of transcription factor expression level does not occur，
but a significant down-regulation of its downstream target genes exists in the process of adipogenic differentiation by Chinese medicine for toni-
fying Qi of the kidney． Tonifying Kidney-YANG is most effective in the process，so this indicates that Tonifying kidney-YANG inhibits adipo-
genic differentiation of BMSCs more effective than other formulas．
Key words Liuweidihuang Pill(六味地黄丸) ;Jinguishenqi Pill(金匮肾气丸) ;Jianguerxian Pill(健骨二仙丸) ;bone marrow mesenchy-
mal stem cells;adipogenic differentiation
含红芪与含黄芪玉屏风散含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞
增殖和抗衰老作用的比较研究
*
鲍英存1，张李峰1，2，程卫东1＊＊，李雪嫣1，李中锋1，蒲建中1
(1兰州大学中西医结合研究所;2兰州大学基础医学院免疫学研究所，兰州 730000 )
摘 要 目的:运用中药血清药理学方法，比较含红芪与含黄芪玉屏风散含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞增殖和抗衰老的影
响。方法:用相同剂量的红芪替换玉屏风散中的黄芪后，观察两方高、中、低剂量对老龄小鼠脾脏、胸腺指数和脾淋巴细胞增殖能力
的影响，确定最佳剂量;采用 MTT法确定最佳剂量含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞刺激增殖作用的最佳稀释浓度和作用时间;用最
佳稀释浓度的含药血清与老龄小鼠脾淋巴细胞作用最佳时间后观察衰老细胞的阳性率，检测细胞内总超氧化物歧化酶( T-SOD) 活
性、丙二醛( MDA) 和活性氧( ROS) 含量的变化。结果:与空白组比较，各剂量组均能提高脾脏、胸腺脏器指数和脾淋巴细胞增殖能
力，以中剂量( 0． 4ml /20g) 效果最佳。MTT结果表明不同稀释浓度的中等剂量含药血清均可促进体外培养的老龄小鼠脾淋巴细胞
增殖，并表现出一定的时-效和量-效关系，以终浓度为 20%的含药血清培养 72h刺激增殖效果最佳，且红芪玉屏风散优于黄芪玉屏
3中药药理与临床 2012;28(4)
* 基金项目: 中国博士后科学基金资助( 201003073) ;教育部高等学校博士点基金项目( 200807330006) 。 ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2012.04.003
风散; β-半乳糖苷酶染色结果表明含药血清作用于老龄小鼠脾淋巴细胞后，衰老细胞减少，且红芪玉屏风散效果优于黄芪玉屏风散;
红芪和黄芪玉屏风散含药血清均能调节老龄小鼠脾淋巴细胞超氧化物歧化酶( T-SOD) 、丙二醛( MDA) 活性和细胞内活性氧( ROS)
水平，且红芪玉屏风散提高 T-SOD活性作用较黄芪玉屏风散好，其余二者无显著差异。结论:红芪玉屏风散与黄芪玉屏风散在抗衰
老方面有相似作用，且在增强脾细胞增殖能力、提高 T-SOD活性，降低衰老细胞数方面优于黄芪玉屏风散。
关键词 红芪;黄芪;玉屏风散;老龄小鼠脾淋巴细胞;增殖作用;抗衰老作用
红芪(Radix Hedysari)系多序岩黄芪(Radix Astragali)的干
燥根，具有益气、补血等功效，主要用于补气固表、利尿脱毒、排
脓、敛疮生肌，因其皮色红润，故称红芪。红芪自古与黄芪通用，
但其原植物与黄芪同科不同属。我国学者研究表明二者在外
观、成分、效用等方面均有区别［1］。研究表明，红芪与黄芪都具
有免疫调节作用，但二者的免疫效应存在一定差异，余黎发现
黄芪和红芪水提物均可激活正常巨噬细胞，但黄芪的效应强于
红芪［2］;杨小虎等报道黄芪和红芪水提液的体外清除自由基作
用相近，而红芪稍强［3］;Liu Jing 等报道红芪和黄芪中的氨基
酸、黄酮和皂苷的免疫效应有差异［4］。但有关二者在免疫老化
方面的比较研究未见报道。复方是中医治疗疾病的主要手段，
玉屏风散由黄芪、白术和防风三味药组成，具有益气固表止汗
的功效。动物实验表明，玉屏风散能够增强免疫力［5，6］。本实
验采用血清药理学方法，以红芪替换玉屏风散中的黄芪，探讨
二者对老龄小鼠脾细胞抗衰老作用的机制，为深入研究黄芪玉
屏风散和红芪玉屏风散抗衰老作用的差异提供实验室依据。
1 材料与方法
1． 1 实验药物 红芪、黄芪、白术、防风均购于兰州市药材市
场，经兰州大学基础医学院中西医结合研究所程卫东教授鉴
定。黄芪玉屏风散按 2010 年中华人民共和国药典［7］配伍，以相
同剂量红芪替代黄芪配伍成含红芪的玉屏风散，常规煎药，然
后将药物浓缩至 1g生药 /ml，4℃保存备用。
1． 2 动物 昆明种青年小鼠 80 只，清洁级，体重 18 ～ 22g，雌雄
各半，由兰州大学实验动物中心提供，合格号:SKXK(甘)
201106-0014;昆明种老龄小鼠 40 只，清洁级，18 月龄，雌雄各
半，由兰州大学实验动物中心提供，合格号:SCXK(甘)2009-
0004。
1． 3 试剂 刀豆蛋白 A、MTT、脂多糖(美国 sigma公司) ;RPMI
l640 培养基(恒星生物工程有限公司) ;EZ-SepTM 小鼠淋巴细
胞分离液(深圳达科为生物技术有限公司) ;胎牛血清(杭州四
季青生物制品公司) ;Bradford 蛋白浓度测定试剂盒、细胞衰老
β-半乳糖苷酶染色试剂盒(碧云天生物技术研究所) ;超氧化物
歧化酶、丙二醛、细胞内活性氧试剂盒(南京建成生物工程研究
所)。
1． 4 仪器 CO2 细胞培养箱(日本 SANYO公司) ;680 型酶联
仪(美国 BIO-RAD 公司) ;XL 型流式细胞仪(美国贝克曼
COULTER公司) ;JY92-2D超声波细胞破碎机(宁波新芝公司)。
1． 5 方法
1． 5． 1 含药血清的制备 取老龄昆明小鼠 70 只，随机分为 7
组(空白组，黄芪玉屏风散高、中、低剂量组，红芪玉屏风散高、
中、低剂量组) ，按体重分别给予高、中、低剂量组(0． 2ml /20g、
0． 4ml /20g、0． 6ml /20g)生理盐水和相应的中药水煎液，1 次 /d，
连续 14 d。末次给药后，取胸腺、脾脏，分别计算脏器指数;MTT
法检测各剂量组脾淋巴细胞的增殖能力。根据胸腺和脾脏指
数、脾淋巴细胞增殖能力选择各中药最佳剂量组(0． 4ml /20g) ，
再作用于青年小鼠，2 次 /d，连续 5d，末次给药 1h 后，制备含药
血清［8］。
1． 5． 2 老龄小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 颈椎脱臼处死小
鼠，无菌取脾脏，严格按照 EZ-SepTM 小鼠淋巴细胞分离液说明
书提取脾淋巴细胞，加入适量含 10%胎牛血清的 1640 培养液，
调整细胞浓度为所需浓度备用。
1． 5． 3 脾淋巴细胞增殖活性的测定 将上述制备的老龄小鼠
脾淋巴细胞悬液，加入 96 孔板中，每孔 100μl;然后加入不同稀
释浓度的含药血清 100μl，使其终浓度分别为 0． 625%、1． 25%、
2． 5%、5%、10%、20%、40%，每个浓度设 12 个复孔，同时设不
加含药血清的老龄小鼠和青年小鼠脾淋巴细胞作为对照，分别
培养 48、72 和 96h 后，加入浓度为 5mg /ml MTT 10μl，孵育 4 h
后，加入 100μl 10%的 SDS，37℃过夜后摇匀，用酶标仪于 570
nm处测定 OD值。根据 MTT的结果选择含药血清的最佳稀释
浓度和培养时间，与老龄小鼠脾淋巴细胞培养后用于下述实验。
1． 5． 4 衰老脾淋巴细胞的检测 取各组脾淋巴细胞按照细
胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书进行操作。在显微镜
下，随机选择 5 个视野，计算衰老细胞阳性率。
1． 5． 5 脾淋巴细胞总超氧化物歧化酶活力、丙二醛水平的检
测 将收集的脾淋巴细胞用细胞超声破碎仪破碎后，严格按照
试剂盒说明书绘制标准曲线，计算各组蛋白浓度。然后，按照试
剂盒说明书检测各组 T-SOD活力和 MDA含量。
1． 5． 6 脾淋巴细胞活性氧水平的测定 将收集的细胞严格按
照活性氧(ROS)试剂盒说明书处理后，用流式细胞仪于 488nm
激发波长，525nm发射波长处检测其荧光强度。
2 结果
2． 1 中药水煎液各剂量组对老龄小鼠胸腺和脾脏脏器指数的
影响 红芪玉屏风散和黄芪玉屏风散中剂量组均能提高小鼠
胸腺指数，红芪玉屏风散中剂量组可提高脾脏指数(P ＜ 0． 01) ;
而高低剂量组对脾脏和胸腺指数无显著性差异，二者中剂量组
之间比较对提高胸腺指数无显著性差异(P ＞ 0． 05) ，红芪玉屏
风散中剂量组提高脾脏指数效果优于黄芪玉屏风散中剂量组
(P ＜ 0． 01) ，见表 1。
表 1 含黄芪和含红芪的玉屏风散对小鼠免疫器官指数的影响(珋x
± s ，n = 10)
组别 剂量(g /kg) 脾脏指数(mg /g) 胸腺指数(mg /g)
空白对照 2． 57 ± 0． 914 2． 03 ± 0． 929
黄芪玉屏风散 3 2． 49 ± 0． 087△△ 2． 12 ± 0． 211
黄芪玉屏风散 6 2． 78 ± 0． 668△ 2． 68 ± 0． 976△△
黄芪玉屏风散 12 2． 53 ± 0． 148△ 2． 39 ± 0． 110
红芪玉屏风散 3 2． 45 ± 0． 134△△ 2． 49 ± 0． 173
红芪玉屏风散 6 3． 72 ± 0． 535△△ 2． 85 ± 0． 800△△
红芪玉屏风散 12 2． 73 ± 0． 096 2． 58 ± 0． 104
与对照组比较 △ P ＜0． 05，△△ P ＜0． 01
4 中药药理与临床 2012;28(4)
2． 2 各剂量组水煎液对脾淋巴细胞增殖功能的影响 表 2
显示，空白组脾淋巴细胞增殖明显小于药物组(P ＜ 0． 01) ，红芪
玉屏风散和黄芪玉屏风散各剂量组能不同程度的提高老龄小
鼠淋巴细胞增殖反应，其中以中剂量组效果最佳;二者相比，红
芪玉屏风散组较黄芪玉屏风散组作用显著(P ＜ 0． 05)。故选用
中等剂量的红芪玉屏风散和黄芪玉屏风散灌胃制备含药血清
(见表 2)。
表 2 含黄芪和含红芪的玉屏风水煎液对淋巴细胞增殖活性的影
响(珋x ± s ，n = 10)
组 别 剂量(g /kg) 淋巴细胞增殖活性
空白对照 1． 189 ± 0． 108
黄芪玉屏风散 3 1． 590 ± 0． 033△△
黄芪玉屏风散 6 2． 306 ± 0． 114△△
黄芪玉屏风散 12 1． 440 ± 0． 043△△
红芪玉屏风散 3 1． 503 ± 0． 037△△
红芪玉屏风散 6 2． 104 ± 0． 091△△
红芪玉屏风散 12 1． 314 ± 0． 021△△
与对照组比较 △ P ＜ 0． 05，△△ P ＜ 0． 01
2． 3 含药血清对老龄小鼠脾细胞增殖活性的影响 不同稀
释浓度的黄芪玉屏风散和红芪玉屏风散中剂量含药血清均能
提高老龄小鼠的脾淋巴细胞增殖活性，并表现出一定的时-效和
量-效关系。随着含药血清浓度的升高和细胞培养时间的延长，
脾细胞的增殖活性先增加后减少。与对照组比较，培养 72h 的
增殖活性优于 48 和 96h，终浓度为 20%的含药血清组脾淋巴细
胞增殖活性高于本组其他浓度组(P ＜ 0． 05) ，且红芪玉屏风散
效果稍优于黄芪玉屏风散，与青年组比较均有统计学差异。因
此，将各中药水煎液中剂量含药血清 20%终浓度和培养 72h 作
为后续实验研究的条件，见表 3。
2． 4 衰老脾淋巴细胞的检测结果 显微镜下可见，衰老的老
龄小鼠脾淋巴细胞内有大量蓝染颗粒，衬染的核呈蓝色，蓝染
细胞胞体增大，老龄小鼠对照组衰老细胞阳性率为 24． 24%;青
年小鼠对照组蓝染细胞数明显少于老龄小鼠对照组，用含药血
清作用后的老龄小鼠脾淋巴细胞衰老细胞阳性率低于老龄小
鼠对照组，且红芪玉屏风散优于黄芪玉屏风散(P ＜ 0． 01) (见图
1 和表 4)。
表 3 含黄芪和含红芪的玉屏风散含药血清对脾细胞增殖的时效
量效关系(珋x ± s ，n = 10)
分 组
浓度
(%)
时间
48h 72h 96h
青年对照组 3． 328 ± 0． 079 4． 730 ± 0． 200 1． 044 ± 0． 055
老龄对照组 0． 980 ± 0． 097△△ 1． 185 ± 0． 134△△ 1． 167 ± 0． 063
红芪玉屏风散 0． 625 1． 078 ± 0． 177△△ 1． 113 ± 0． 098△△ 1． 088 ± 0． 142
红芪玉屏风散 1． 25 0． 907 ± 0． 061△△ 1． 078 ± 0． 137△△ 1． 481 ± 0． 691△
红芪玉屏风散 2． 5 1． 087 ± 0． 215△△ 1． 164 ± 0． 042△△ 1． 112 ± 0． 073
红芪玉屏风散 5 1． 364 ± 0． 135＊＊△△ 1． 207 ± 0． 164△△ 1． 275 ± 0． 101
红芪玉屏风散 10 1． 471 ± 0． 077＊＊△△ 1． 592 ± 0． 238＊＊△△ 1． 547 ± 0． 158△
红芪玉屏风散 20 2． 929 ± 0． 431＊＊ 3． 241 ± 0． 446＊＊△ 2． 892 ± 0． 089＊＊△△
红芪玉屏风散 40 2． 037 ± 0． 189＊＊△ 1． 945 ± 0． 390＊＊△△ 1． 972 ± 0． 059＊＊△△
黄芪玉屏风散 0． 625 0． 601 ± 0． 025△△ 0． 970 ± 0． 088△△ 0． 589 ± 0． 038
黄芪玉屏风散 1． 25 0． 399 ± 0． 023△△ 1． 162 ± 0． 135△△ 0． 660 ± 0． 235
黄芪玉屏风散 2． 5 0． 886 ± 0． 162△△ 0． 978 ± 0． 152△△ 0． 675 ± 0． 089
黄芪玉屏风散 5 1． 294 ± 0． 095△△ 1． 459 ± 0． 192△△ 0． 840 ± 0． 655
黄芪玉屏风散 10 1． 643 ± 0． 120＊＊ 1． 734 ± 0． 042＊＊△△ 0． 500 ± 0． 161＊＊△
黄芪玉屏风散 20 2． 505 ± 0． 215＊＊ 3． 429 ± 0． 028＊＊△ 1． 545 ± 0． 953＊＊△
黄芪玉屏风散 40 2． 105 ± 0． 161＊＊ 1． 997 ± 0． 245＊＊△△ 1． 299 ± 1． 235
空白血清组 0． 625 0． 832 ± 0． 139△△ 1． 220 ± 0． 315△△ 1． 054 ± 0． 160
空白血清组 1． 25 0． 676 ± 0． 083△△ 1． 098 ± 0． 180△△ 0． 932 ± 0． 216
空白血清组 2． 5 0． 894 ± 0． 133△△ 1． 264 ± 0． 181△△ 1． 091 ± 0． 321
空白血清组 5 1． 009 ± 0． 031△△ 1． 015 ± 0． 095△△ 1． 085 ± 0． 128
空白血清组 10 1． 352 ± 0． 068△△ 1． 349 ± 0． 133△△ 2． 834 ± 0． 087＊＊△△
空白血清组 20 1． 590 ± 0． 054＊＊ 1． 792 ± 0． 207＊＊ 1． 745 ± 0． 125＊＊△△
空白血清组 40 1． 080 ± 0． 998＊＊ 1． 264 ± 0． 191△△ 2． 116 ± 0． 029＊＊△△
同时间下与模型组比较 * P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01;
与对照组比较 △ P ＜0． 05，△△ P ＜0． 01
表 4 含黄芪和含红芪的玉屏风散对脾衰老细胞的影响(珋x ± s ，n
= 10)
组 别 剂量(g /kg) 阳性率(%)
青年对照组 2． 429 ± 0． 384＊＊
老龄对照组 24． 24 ± 1． 237△△
空白血清组 23． 28 ± 0． 827△△
红芪玉屏风散 6 16． 47 ± 0． 930＊＊△△
黄芪玉屏风散 6 17． 96 ± 0． 751＊＊△△
与模型组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01;与对照组比较△P ＜ 0．
05，△△P ＜ 0． 01
A:空白血清组; B: 老龄小鼠对照组; C:青年小鼠对照组; D: 红芪玉屏风散中剂量组; E:黄芪玉屏风散中剂量组
图 1 含药血清培养 72h后老龄小鼠脾淋巴细胞 β-半乳糖苷酶染色变化( 40 × )
2． 5 含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞总超氧化物歧化酶活性
和丙二醛含量的影响 与青年小鼠对照组比较，老龄小鼠对照
组总超氧化物歧化酶活性显著下降(p ＜ 0． 01) ，丙二醛水平升
高(p ＜ 0． 05) ;与老龄小鼠对照组相比，红芪玉屏风散和黄芪玉
屏风散均能提高体外老龄小鼠脾淋巴细胞总超氧化物歧化酶
活性(p ＜ 0． 01) ，且红芪玉屏风散优于黄芪玉屏风散(p ＜ 0．
01) ;同时，红芪玉屏风散和黄芪玉屏风散均能降低脾细胞丙二
醛水平(p ＜ 0． 05) ，但红芪玉屏风散与黄芪玉屏风散之间无显
著性差异(见表 5)。
5中药药理与临床 2012;28(4)
表 5 含黄芪和含红芪的玉屏风散对脾细胞自由基总超氧化物歧
化酶、丙二醛的影响(珋x ± s ，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
总超氧化物歧化酶
(U /mg·prot)
丙二醛
(nmol /mg·prot)
青年对照组 7． 894 ± 1． 008* 1． 225 ± 0． 870*
老龄对照组 2． 382 ± 0． 674△△ 2． 545 ± 2． 432△
空白血清组 2． 289 ± 0． 468△△ 1． 492 ± 0． 732
黄芪玉屏风散 6 5． 555 ± 1． 322＊＊△△ 0． 952 ± 0． 444*
红芪玉屏风散 6 7． 819 ± 1． 313＊＊ 1． 099 ± 0． 398*
与模型组比较 * P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01;
与对照组比较△P ＜0． 05，△△P ＜0． 01
2． 6 含药血清老龄小鼠脾淋巴细胞活性氧水平的影响 由
表 6 可知，老龄小鼠对照组脾淋巴细胞中活性氧含量明显高于
青年小鼠对照组(p ＜ 0． 01) ;用含药血清作用于老龄小鼠脾淋
巴细胞后，细胞中活性氧含量降低，以红芪玉屏风散含药血清
效果最佳，但红芪玉屏风散和黄芪玉屏风散含药血清之间差异
无统计学意义(p ＞ 0． 05) ;空白血清组与老龄对照组比较差异
无统计学意义。
表 6 含黄芪和含红芪的玉屏风散对脾细胞活性氧的影响(珋x ± s ，n
= 10)
组别 剂量(g /kg) 活性氧
老龄对照组 13． 300 ± 2． 507
青年对照组 7． 425 ± 0． 443＊＊
空白血清组 12． 375 ± 1． 771
红芪玉屏风散 6 9． 600 ± 0． 721＊＊
黄芪玉屏风散 6 10． 255 ± 1． 776
与模型组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01
3 讨论
红芪最早记载于《神农本草经》黄芪项下，为豆科植物多序
岩黄芪的干燥根，与黄芪同科不同属，主要产于甘肃的岷县、武
都、宕昌等地，临床上常将两药混用。《中国药典》1985 年版将
红芪单列为一味中药。研究表明，红芪和黄芪在成份上有一定
区别，赵健雄［9］等采用 HPLC 法准确可靠地鉴别了红芪和黄芪
的化学成分。
中药复方成分复杂，如直接加入离体反应系统，会严重影
响实验结果，产生假阳性或假阴性，很难反应药物真实性，而血
清药理学方法在一定程度上弥补了上述缺陷。中药血清药理
学方法即给动物灌服中药或复方制剂一定时间后，采血并分离
血清进行体外药理实验的方法［10］，该法克服了中药体外实验的
诸多不利因素。本实验首先用高、中、低剂量含红芪的玉屏风散
和含黄芪的玉屏风散给老龄小鼠灌胃，通过观察小鼠胸腺、脾
脏脏器指数和脾淋巴细胞增殖活性确定红芪和黄芪玉屏风散
中剂量组为最佳剂量组，进一步采用中剂量给青年小鼠灌胃制
备相应的含药血清，通过 MTT法确定含药血最佳清稀释浓度和
作用时间，以此为条件继续后续实验。
衰老细胞中存在一种具有高酶活性的的半乳糖苷酶(SA-
β-Gal) ，SA-β-Gal是一种溶酶体酶，随细胞的衰老其活力逐步
累积，是评价细胞衰老程度的重要指标。本实验发现，老龄小鼠
脾细胞衰老阳性率为 24%，而青年小鼠仅为 2． 43%;红芪玉屏
风散含药血清培养的老龄小鼠脾细胞衰老阳性率为 16． 47%，
黄芪玉屏风散含药血清培养的脾细胞衰老阳性率为 17． 96%，
而空白血清作用后脾细胞衰老阳性率为 23． 28%，表明红芪玉
屏风散和黄芪玉屏风散可以延缓细胞的衰老，降低衰老细胞的
阳性率。超氧化物歧化酶(SOD)是一种抗氧化酶，是判断组织
器官氧化损伤程度的重要指标。丙二醛(MDA)是细胞膜脂质
过氧化的终产物，其含量可间接反映机体细胞氧化损伤的程度。
研究表明，体内的 SOD 活性下降，MDA 含量升高，是引起衰老
和老年性疾病的重要因素［11，12］。本实验研究发现，老龄小鼠脾
淋巴细胞中 SOD活性低于青年小鼠、MDA 水平高于青年小鼠;
黄芪玉屏风散和红芪玉屏风散含药血清作用后，可显著提高
SOD活性，降低 MDA水平。
活性氧(ROS)参与机体生物学反应的多种过程，Karbows-
ki［13］等研究发现活性氧可导致线粒体膨大，引起细胞凋亡。本
实验采用流式检测发现，老龄小鼠脾淋巴细胞中活性氧荧光强
度明显高于青年小鼠;红芪玉屏风散和黄芪玉屏风散含药血清
可显著降低活性氧水平，空白血清作用不明显，说明红芪玉屏风
散含药血清在降低细胞内活性氧含量，发挥抗衰老的作用方面
好于黄芪玉屏风散。
综上所述，红芪替代玉屏风散中的黄芪后可显著提高老龄
小鼠脾淋巴细胞增殖能力和超氧化物歧化酶活性，降低细胞内
活性氧含量。为开发甘肃道地药材红芪的药用价值和深入研究
红芪(黄芪)、白术和防风组方抗衰老作用机制提供实验室依
据。
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Comparative study of Radix Hedyseri and Radix Astragali alternative Yupingfeng San
on spleen lymphocyte proliferation and anti-aging in aging mice
Bao Yingcun1，Cheng Weidong1，Zhang Lifeng1，2，Li Xueyan1，Li zhongfeng1，Pu Jianzhong1
(1 Institute of Integrated Chinese and Western Medicine;2 School of Basic Medical Science，Lanzhou University，Lanzhou 730000)
Objective:To use serum pharmacology method，comparative study the Radix Hedyseri and Radix Astragali alternative Yupingfeng san
serum containing on spleen lymphocyte proliferation and anti-aging of aging mouse． Methods:Using the same dose of Radix Hedysari to re-
place the Yuping fengsan of Radix Astragali，we observe high、medium and low dose group of two compound on the influence of the thymus
and spleen index and lymphocyte proliferation activity in aging mice． Thus determine the optimal dose group(0． 4ml /20g)． MTT method ob-
servation the best dose group of medicine serum to aging mice splenic lymphocytes stimulate proliferation role of does-time effect relationship;
determine the optimal Concentration and time ． reagent kit for the detection of spleen cells Senescence β-Galactosidase staining assay、aged
mice spleen cell superoxide dismutase (SOD)activity，malondialdehyde (MDA)levels，ROS levelst． Results:Three doses groups of yupin-
feng Radix Hedysari and yupinfeng Radix Astragali all can improve the thymus and spleen index and lymphocyte proliferation activity in mice，
The clinical equivalent dose(meddle doses)is the best． MTT results showed that meddle doses of Radix Astragali alternative Yupingfeng san
serum containing in vitro proliferation of splenic lymphocytes have distinct stimulative effect，and show some of the-effect and quantity-activity
relationship，to an end for 20% of drug concentration with serum training 72 h stimulate proliferation best effects，Radix Hedyseri yupingfeng
san superior than that of the Radix Astragali yupingfeng san． β-galactosidase staining experiment results showed that the aging of mouse splen-
ic lymphocytes senescence number significantly more than young mice，with medicated serum on spleen cells，found in senescent cells re-
duced，The effect of including the Radix Hedyseri is better than the original． Containing Radix Hedysari and containing Radix Astragali of Yu-
ping Feng San can modulate immune aging mouse spleen lymphocyte SOD，MDA activity and intracellular reactive oxygen species (ROS)
level，there were no significant differences between the Yuping Feng San containing Radix Hedysari and Radix Astragali． Conclusion:Radix
Hedyseri，compatible with Rhizoma Atractylodis Macrocephalae compared to Yupingfeng oral liquid in anti-aging has a similar role，and in
the regulation of T-SOD、ROS and grow old cell better than Yupingfeng of Radix Astragali．
Key words Radix Hedyseri(红芪)and Radix Astragali(黄芪) ;Yupingfeng San(玉屏风散) ;aging mice splenic lymphocytes;prolifera-
tion activity
补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜 MUC5ACmRNA与蛋白表达的影响
刘晓玲，王汝俊，赵琪琪
(广州中医药大学，广州 510006)
摘 要 目的:观察脾虚大鼠胃粘膜 MUC5ACmRNA 与蛋白表达的变化及补中益气汤对其表达的影响，并探讨相关作用机
制。方法:SD大鼠称重随机分为空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予
100%大黄水煎剂灌胃，一天 2 次，连续 10 天。第 11 天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗 7 天，第 18 天，除空白对照组外的另
外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用逆转录 PCR ( RT-PCR) 检测 MUC5ACmRNA，用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法
( ELISA) 检测 MUC5AC蛋白。结果:与非脾虚损伤组比较，脾虚损伤组大鼠胃粘膜 MUC5AmRNA、蛋白表达有所下降，但无统计学
意义;与脾虚损伤组比较，补中益气汤组大鼠胃粘膜MUC5AC蛋白表达显著升高。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜MUC5AC蛋
白表达显著下调，提示脾虚时胃粘液凝胶层防御能力下降，补中益气汤可提高脾虚大鼠 MUC5AC蛋白的表达，提示该方可通过粘液
蛋白 MUC5AC促进胃粘液凝胶层的形成，增加胃粘液屏障防护功能，并与 TFF1 发挥协同增效作用，这可能是补中益气汤胃粘膜保
护的机制之一。
关键词 补中益气汤;脾虚大鼠;MUC5AC
黏蛋白是一组高度糖基化的不同糖蛋白的总称，广泛存在
于消化道，是维持粘液层厚度及胶体形态的主要成分，在胃黏
膜的防御和修复过程中扮演着重要的角色。分泌型 MUC5AC
是胃肠道凝胶的主要黏蛋白之一，这也是粘液层流变学特点的
主要成因［1］。正常情况下，MUC5AC与 TFF1 配合结合，发挥更
好的粘膜防御保护作用。前期实验发现，补中益气汤可上调脾
虚大鼠胃粘膜 TFF1 的表达来促进胃粘膜保护，降低胃粘膜易
损性。本实验在前期研究的基础上，继续观察补中益气汤对脾
虚大鼠胃粘膜 MUC5AC表达的影响，进一步探讨该方的作用机
制。
7中药药理与临床 2012;28(4)