全 文 ：20 8年 11月 第 10卷 第 1 1期 中国现代中药 Mo de rnC hi s e e nMe di ei e n No v . 2) 0( 8 Vo l . 10 No . 11
质 .标准
褚实子与构树叶中总黄酮含量测定
迟玉新 , 窦德强 ’
(辽宁中医药大学药学院 , 辽宁 大连 n 66 0 0
〔摘要」目的 : 建立褚实子与构树叶中总黄酮含量的测定方法 。 方法 : 利用分光光度计通过测定吸光度计算总
黄酮的含量 。 结果 : 试验建立了总黄酮的标准曲线 , 测得褚实子中总黄酮平均含量为 3 . 2% , R SD 二 1. 4 % ( n = 6 ) ;
构树叶中总黄酮含量为 6 . 05 % , R SD 二 1 . 6% ( n = 6 ) 。 结论 : 建立了褚实子与构树叶中总黄酮含量的测定方法 , 该
法简单 、 快捷 , 重现性好 , 可用于褚实子与构树叶的质量控制和定量分析 。
〔关键词 〕褚实子 ; 构树叶 ; 总黄酮
桑科植物构树 B or o s o net ia 尸叩厂诉m ( L ) v e n t . ,
在我国华北 、 华中 、 华南 、 西南 、 西北各省均有分
布 , 尤其是南方地区极为常见川 。 褚实子为构树的干
燥成熟果实 , 具有很强的抗病性 , 具有补肾清肝 , 明
目 , 利尿的功效 , 临床上用于治疗腰膝酸软 、 虚劳骨
蒸 、 头晕目昏 、 目生翁膜 、 水肿胀满 , 还可以治疗顽
癣 、 神经性皮炎 、 湿疹等皮肤病〔’ “ ] 。 褚实子不仅具
有开发治疗老年性疾病新药的潜力 , 还可以制成美容
保健类的产品〔’ 占〕 。 构树皮即构树的树皮 , 可鲜用或
阴干 。 目前国内关于构树的文献报道较少 , 本文对褚
实子与构树叶中总黄酮含量进行了测定 , 为其资源合
理的开发利用及质量控制提供理论依据 。
1 仪器与试药
1
.
1 仪器
U V
一
2 10 0 紫外分光光度计 (上海 U N IC O ) 、 F A -
or o 4 分析天平 (上海精科天平厂 ) 、 CQ一250 超声波
清洗器 ( 仁海超声仪器厂 ) 。
1
.
2 试药
芦丁 对照 品为 自制 , 经 H P LC 纯 度检 验为
98
.
47 %
。 亚硝酸钠 、 硝酸铝 、 氢氧化钠 、 甲醇等均
为色谱纯 。 褚实子 、 构树叶经辽 宁中医药大学药学
院窦德强教授鉴定为桑科植物构树的干燥成熟果实
和叶 。
2 试验方法
2
.
1 供试品的制备
取褚实子粉末 (过 20 目筛 ) 约 2 9 , 精密称定 ,
加人石油醚 50 m L , 冷浸 h8 后超声 30 m in 。 抽滤后残
渣再加石油醚 ( 6 0 一 9 0℃ ) 5 0 m L , 超声 3 0 m i n , 如此
反复 3 次 。 之后取残渣 60 % 甲醇超声 30 m in , 反复 3
次 。 过滤 , 合并滤液 , 减压浓缩并定容至 25 m L 容
量瓶 。 精密吸取 l m L 再定容至 25 m L 容量瓶中备用 。
取构树叶粉末约 2 9 , 精密称定 , 加人石油醚
(60
一
90 ℃ ) l o m L , 用索氏提取器脱脂 6 h 。 脱脂后
粉末加人 lo m L 60 % 甲醇索氏提取器提取 h6 。 过
滤 , 减压浓缩并定容至 25 m L 容量瓶 。 精密吸取 l m L
再定容至 25 m L 容量瓶中备用 。
2
.
2 总黄酮含量测定 〔` 〕
2
.
2
.
1 芦丁对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品 4 . 75 mg , 用 印% 甲醇溶解后
定容于 50 mL 容量瓶中 , 配成浓度为 95 此 · mL 一 ’ 的芦丁
对照品贮备液。 精密吸取 lmL 芦丁对照品溶液 , 定容
至 10mL , 制成浓度为 9 . 5此 · mL 一 ’ 的芦丁对照品溶液。
2
.
2
.
2 标准曲线的绘制
精密吸取浓度为 9 . 5卜g · m L 一 ’ 芦丁对照品溶液
o
,
1
.
0
,
4
.
o m L 及 95 卜g · m L 一 ’ 的芦丁 对照 品溶液
1
.
0
,
2
.
0
,
3
.
0
,
4
.
s m L 于 7 只 10 m L 具塞比色管中 ,
分别加人 5% N a N 0 2溶液 0 . 3m L , 摇匀 , 放置 6 m i n
后各加人 10% A I ( N O 3 ) 3溶液 0 . 3 m L , 摇匀放置
6 m i n
。 分别加人 4% N a 0 H 溶液 4 . o m L , 用 6 0% 甲
醇稀释至刻度 , 摇匀 , 放置 or m in 。 在 5 05 n m 处 测
定吸光 度 。 回归方程 : Y = 1 . 193 7 x 一 0 . 0 01 1 ,
矿 二 0 . 9 9 7 。 其中 Y 为吸光度 , x 为芦丁对 照品溶
液浓度 ( m g · m L 一 ’ ) 。 结果表明 , 芦 丁 在 0 . 0 01 -
0
.
04 3 m g
·
m L
一 ’ 呈良好的线性关系 。
2
.
2
.
3 方法学考察
2
.
2
.
3
.
1 精密度试验 精密吸取 95 卜g · m L 一 ’ 芦丁对
照品溶液 1 . o m L 置于 or m L 具塞比色管中 , 同 2 . 2 . 2
[通讯作者〕
·
16
·
` 窦德强 , E 一m ia l : d o u d e q i a n gZ o 3@ y ha 0 0 · c o m · c n
DOI : 10. 13313 /j . i ssn. 1673 -4890. 2008. 11. 013
2(X )8年 n月 第 0 1卷 第 n期 中国现代中药 Md or n eh C in e s e M ed i e in eN v o. 2《X 8 V ) ol . 0 1N o. 11
试验方法项下进行显色和测定 , 记录吸光度 , 吸光
度的 R SD 为 0 . 5 1% ( n 二 5 ) 。
2
.
2
.
3
.
2 重现性试验 精密称取 2 9 同一批褚实子药
材 5 份 , 按 2 . 1 及含量分析项下进行操作 , 制得 5
份供试液 , 各取适量 , 同 2 . 2 . 2 试验方法项下进行
显色和测定 , 记录吸光度 , 吸光度的 R SD 为 1 . 5%
(
n 二 5 )
。 精密称取 2 9 同一批构树叶药材 5 . 份 , 按
2
.
1 及含量分析项下进行操作 , 制得 5 份供试液 , 各
取适量 , 同 2 . 2 . 2 试验方法项下进行显色和测定 ,
记录吸光度 , 吸光度的 R SD 为 1 . 8% ( n = 5 ) 。
2
.
2
.
3
.
3 稳定性试验 精密吸取 95 此 · m L 一 ’ 芦丁对
照品溶液 1 . o m L , 同 2 . 2 . 2 项下进行显色 , 分别在
15
,
2 0
,
30
,
4 5
,
6 0
,
1X() m i
n 测定 , 结果表明样品
在 巧 一 60 m in 稳定 。 同法精密吸取已知浓度的褚实
子和构树叶供试品溶液 1 . o m L , 同 2 . 2 . 2 项下进行
显色 , 分别在 15 , 2 0 , 3 0 , 4 5 , 6 0 , l 0() m i n 测定 ,
结果表明样品在 15 一 60 m i n 稳定 。
2
.
2
.
3
.
4 回收率试验 采用加样回收法 , 在已知含
量的样品中加人一定量的芦丁对照品 , 按样品项下
同法测定吸光度 , 结果见表 1 一 2 。
表 1 构树叶加样回收率
2
.
2
.
4 供试品总黄酮含量测定
精密吸取褚实子供试品溶液 3流于 10 m工具塞比色
管中 , 同上述显色法测定其吸光度 A = 0 . 375 , 带入标
准曲线回归方程 , 得浓度为 0 . 37U 2此
·
mL
一 ` , 计算褚
实子中总黄酮平均含量为 3 . 2% , SR D = 1 . 4% ( n = 6 ) 。
精密吸取构树叶供试品溶液 lmL 于 or mL 具塞比
色管中 , 同上述显色法测定其吸光度 A 二 0 . 2 5 , 带人
标准曲线回归方程 , 得浓度为 0 . 193 6此 · mL 一 ’ , 计算
构树 叶 中 总 黄 酮 平 均 含 量 为 6 . 05 % , sR D =
1
.
6% (
n = 6 )
。
3 讨论
3
.
1 检测波长的确定
分别测定显色后的供试品及芦丁对照品最大吸
收波长 , 确定总黄酮测定波长为 505 n m 。
3
.
2 超声提取与索氏提取方法的比较
精称供试品 4 份 , 分别采用超声提取及索氏提
取 , 并分别按 2 . 2 . 2 、 2 . 2 . 3 显色方法测定其吸光
度 , 计算总黄酮含量 。 结果构树叶超声提取法测得
总黄酮含量明显低于索氏提取 , 故选用索氏提取 ;
而褚实子超声提取法测得总黄酮含量明显高于索氏
提取 , 故选超声提取法 。 吐口
组分
98013%7
加人量
/ m g
0
.
0 6 1 5
0
.
0 6 1 1
0
.
0 6 2 2
0
. 《拓 1 2
0
.
0 6 1 4
0
.
06 2 8
测得量
/ m g
0
.
1 83 5
0
.
1 84 1
0
.
1 88 3
0
.
1 83 2
0
.
1 82 6
0
.
1 86 3
样品中含 回收率 平均回收 R S D
量 / m g / % 率/ % / %
0
.
12 3 2
0
.
12 2 4
0
.
124 3
0
.
12 2 6
0
.
12 3 7
0
.
12 5 4
9 2
.
6 3
表 2 褚实子加样回收率
组分 加人量
/ mg
0
.
0 6 1 5
0
.
06 1 1
0
.
06 2 2
0
.
06 1 2
0
.
0 6 1 4
0
.
0 6 2 8
测得量
/ m g
0
.
12 3 8
0
.
12 5 6
0
.
12 5 9
0
.
12 4 0
0
.
12 5 3
0
.
12 8 6
样品中含
量 / m g
回收率
/ %
平均回收
粼%
0
.
(拓 4 2
0
.
06 3 9
O
,
(拓 4 4
0
. 肠4 1
0
.
06 3 8
0
. 砚X闷 0
R S D
/ %
2 7 1
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(收稿 日期 200 8习 l 一 19 )
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D e t e r m i n a it o n o f T o alt F l
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[ A b s tr a ct 」Oj e e it v e : T o e s t a b il s h th e d e t e mr i n at i o n m e th o d s o f t o tal fl a v o n i d s for m fur it an d l e a v e s o f p a p e r
m u l b e叮 . M e ht o d s : hT e e o n t e n t s o f t o tal fl a v o n id s w e er d e t e mr i n e d b y s p e e t or P h o t o m e坷 . eR sul st : C al ib ar t i o n
e u vr e w e er e o n s utr
e t e d fo r t o tal fl a v o n id s
.
T h e 。 o n t e n t s o f ot t al fl va o n id s w e er 3
.
2% RS D = 1
.
4% (
n = 6 ) an d
6
·
0 5% SR D
= 1
.
6% (
n = 6 ) i
n
frU i t an d l
e va e s of p a p e r m u lb e叮 . C o cln 心 o n : hT e m e t h o d s we er fa s t , er li a b l e , a e -
e u
art
e a n d s u i t a b l e fo r an al y s i s o f t o tal fl a v o n id s an d q
u al i yt e o n otr l i
n
fur i t
a n d l e a v e s o f p a p e r m u l b e叮 .
[ K盯 w o r ds ] Fur i t an d l e a v e s Of p叩 e r mu l b e盯 ; T o alt fl va o n id s
·
1 7
·