全 文 ：药学实践杂志 2 0 6年第 24卷第 3期
作用的角度 ,研究苦参素对 胃癌细胞侵袭和转移作
用的影响 。 肿瘤转移扩散起始于肿瘤细胞降解并穿
过基底膜向其邻近组织的侵袭浸润 。 肿瘤细胞侵袭
转移能力与其产生降解细胞外基质的蛋白酶能力密
切相关 。 阻抑癌细胞产生蛋 白水解酶 , 降低癌细胞
对基底膜的侵袭性是抑制肿瘤细胞转移 的重要措
施 。 肿瘤细胞分泌产生包括肝素酶 、 组织蛋白酶 B 、
弹性蛋 白酶及金属蛋 白酶等多种蛋白水解酶 , 参与
降解细胞外基质 。 在 中性 p H 环境 中 ,金属蛋白酶
几乎能分解所有的大分子蛋白 , 是影响肿瘤细胞侵
袭转移的限速酶 。 在正常生理条件下 , W型胶原酶
在其合成 、分泌及降解活性上受到严格控制和调节 。
在肿瘤细胞侵袭转移过程中W 型胶原酶活性增强 ,
促进癌细胞侵袭和转移 。 高转移性的癌细胞比低转
移性的癌细胞有更强的降解 W型胶原能力 。 在转移
性癌细胞所侵袭的基底膜部位 , W 型胶原缺失 [` 」。
实验结果表明 , 苦参素能剂量依赖性的降低胃
癌细胞 M K N 一 4 5 产生 MM P 一 2 、 M M P 一 9 的蛋白分
泌量 , 同时对分泌 MM P 。 的蛋白酶解活性有较好的
抑制作用 。 胃癌是危害人民健康的主要恶性肿瘤之
一 ,它的转移及复发是导致治疗失败及死亡的主要
原因 。 目前在临床上对于已经有转移的患者主要应
用以药物治疗为主的综合治疗 ,虽然 胃癌对药物治
疗较为敏感 ,但联合化疗方案疗效仅为 40 % 左右 ,
且药物副作用较大 。 手术 、 放射和化学治疗等方法
对肿瘤治疗的效果 已进人平台期 , 开发针对转移过
程和微小转移灶的抗恶性肿瘤药 , 是提高肿瘤治愈
率 、 降低复发和死亡率 、 延长患者生命的重要途径 。
本研究为苦参素用于抗胃癌的转移治疗提供了进一
步依据 。
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收稿 日期 : 2 0 6 一 01 一 15
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4`
J.resL
不同产地褚实子提取物体外抗氧化作用及其质量比较
庞素秋 ’ , , , 黄宝康 ’ , 张巧艳 ’ ,秦路平 “ (l . 第二军医大学药学院生药学教研室 , 上海 20 04 3 ; 2 . 中国人民解放军第 180 医
院药械科 , 福建 泉州 3 62 0 00)
摘要 目的 : 对 10 个不 同产地褚实子的 乙醇 、 水提物进行体外抗氧化作用研究 ,并按中国药典部分质量标准
对不 同产地的褚 实子进行质量比较 。 方法 : 采用不 同产地的褚 实子醇 、 水提取物对大鼠肝组织匀桨脂质过氧
化作用的抑制 ,评价其体外杭氧化作用 , 并对不 同产地的褚实子的灰分及提取物含量进行比较 。 结果 : 不 同
产地褚 实子的抗氧化能力差别较大 , 其中安徽 、 山 西和广西产的褚实子抗氧化能力最强 , 灰分含量以山 东 、 浙
江和广 东三产地 的较好 。 结论 : 不 同产地褚 实子的质量有很大差异 ,其提取物有较 明显的体外抗氧化活性 ,
并建议中国药典再版时收载褚实子提取物含量标准 。
关键词 褚 实子 ;灰分 ;体外抗氧化 ; 丙二醛
中图分类号 : R 9 3 1 . 7 文献标识码 : A 文章编号 : 10 0 6 一 0 1 1 1 ( 20 0 6 ) 0 3 一 0 14 9 一 0 4
基金项目 : 国家自然科学基金资助项 目( N O . 3 04 0 595 ) .
作者简介 : 庞素秋 ( 19 7 2 一 ) , 女 ,汉族 , 硕士研究生 ,主管药师 .
通讯作者 : 秦路平 , T e l : ( 0 2 1 ) 2 50 7 0 3 9 4 , E 一 m a i l : lp q i n @ s m rn 。 . e d u . c n
Jo un rl af OP h am r
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中药褚实子又名毅实 、 毅子 、褚桃 、褚实 、谷实 、
谷桑 、 野杨梅等 , 为桑科植物构树 B or 揣on et ia p a p , -
r诉 ar ( L . ) Ve nt . 的干燥成熟果实 。 以补肾人药应
用有几千年的历史 , 《神农本草经 》 、 《名医别录 》俱
列为上品川 。 性甘 、味寒 ,无毒 。 《抱朴子》 : “ 服之 ,
老者成少 ,令人彻视见鬼神 ,道者染须年七十 , 眼之
更少壮 , 到百 四十岁 , 能行及走马 ” 。 刘汉基《药性
通考 》载 “ 褚实子 , 能充肌肤 , 助腰膝 ,益气力 ,补虚
劳 , 悦 颜 色 , 壮筋 骨 , 明 目。 补 阴 妙 品 , 益髓 神
膏 ’ , 〔’ 1 。 我国在中医临床上褚实子已用于治疗老年
痴呆症并有较好效果 , 其水溶性粗提取物能显著改
善衰老模型小 鼠的学习记忆能力 〔’ ,’J 。 衰老问题一
直是人类关注的焦点 ,经过许多科学家的研究证实 ,
老化与细胞氧化作用息息相关 ,抗氧化在某种意义
上等同于抗衰老 [’ 1 。 笔者研究 了不同产地 的褚实
子水浸出物对大鼠肝组织匀浆脂质过氧化作用的抑
制程度 。
褚实子原植物在 中国分布较广 , 药材主产于河
南 、湖北 、湖南 、 山西 、甘肃等省地 ,为考查不同产地
褚实子药材的质量 ,采集了 10 个不同地区的样本进
行抗氧化作用比较并对其部分药典质量指标进行考
查 ,为确立优质药材产地提供一定的理论依据 。
1 材料和方法
1
.
1 样品来源 样品为 20 04 年 7 一 1 月采于不同
产地的构树成熟果实 ,均经鉴定 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 不同产地 的褚实子的灰分的测定 (中国药
典 2 0 05 年版附录 ix K 〔6 j) 褚实子干燥至恒重 的供
试品 3 9 , 放人 炽灼 至恒 重 的柑祸 , 称重 (准 确 至
0
.
0 19 )
,缓缓炽热至完全炭化后 ,逐渐升温至 50 -
6 0 0℃ ,至完全灰化 ,冷却称重 。 据残渣重量计算供
试品中总灰分的含量 。
将上述总灰分加 1omL 稀盐酸混匀 ,用表面皿盖住
柑祸 ,于水浴加热 or 而 n ,用热水冲洗表面皿 ,洗液并人
柑塌 ,用无灰滤纸滤过 ,残渣用水洗于滤纸上 ,至洗液
不显 lC 一反应为止 。 滤纸和滤渣于柑涡中干燥 ,灼烧至
恒重 。 称量并计算酸不溶性灰分的含量 。
1
.
2
.
2 不同产地褚实子浸 出物的制备 褚实子内
含较多油性物质 ,且 目前在临床上主要供中医配方
用 ,故用热水 、热乙醇浸法 。 按 2 005 年版 中国药典
附录 x A 浸出物测定法项下的热浸法测定操作 〔6〕 。
1
.
2
.
3 丙二醛法测定褚实子提取物对小鼠肝匀浆
M l )A 的影响①肝匀浆制备 :取健康小白鼠 10 只 ,雌雄
各半 ,颈椎脱臼处死 ,立即取肝脏 ,置于 4℃冷生理盐水
中洗尽残血 ,滤纸拭干 ,称重 ,用 4℃生理盐水制成 10%
肝组织匀浆 。 (雾肝匀浆丙二醛 ( M DA )的测定 : 取 10%
新鲜肝匀浆 1 . smL ,分别加人褚实子提取物 0 . lmL ,
5印m留碑L 维生素 E 0 . lmL 、无水乙醇 0 . l rnL 、 生理盐水
0
.
l rnL
,
37 ℃温浴振荡 1 . hs ,按丙二醛测定试剂盒说明
书操作 。 532n m 处比色测定各管吸光度值 ,计算丙二
醛 ( MDA )值及抑制率。 采用考马斯亮兰法测定肝匀浆
中的蛋白含量 。
抑制率 ( % ) = ( 自氧化组 MD A 值一褚实子提取
物组 M D A 值 ) / 自氧化组 M D A 值 x 10 %
2 结果
2
.
1 不同产地的褚 实子的灰分及浸 出物的含量
结果显示 , 10 个不同产地的褚实子 以山东烟台的褚
实子的总灰分含量最小 , 为 4 . 4 % , 酸不溶性灰分
以广东广州的最小为 0 . 17 % ,水浸出物以新疆乌鲁
木齐和安徽芜湖的两个产地 的含量较高 , 分别为
9
.
4 1% 和 9 . 14 % ,醇浸 出物 以安徽芜湖的最高 , 达
1
.
7%
。 详情见表 1 。
药学实践杂志 2 0 60 年第 24 卷第 3期
表 l 不同产地褚实子的浸出物及灰分的含量 ( n 二 3 , x 士 s )
产地 酸不溶灰分 (% )
新疆乌鲁木齐
山西长治
河南遂平
广东广州
广西桂林
贵州贵阳
湖北武汉
安徽芜湖
山东烟台
浙江东阳
总灰分 ( % )
7
.
2 8 士 0
.
1 13
7
.
0 1 士 0
.
0 2 5
7
.
4 5 士 0
.
13 5
7
.
36 土 0
,
05 1
7
.
4 9 士 0
.
119
7
.
5 1 土 0
.
13 2
7
.
9 8 土 0
.
0 9 8
7
.
7 1 士 0
.
10 1
4
.
4 4 土 0
.
0 8 9
5
.
2 6 士 0
.
10 7
0
.
6 6 士 0 . 0() 8 l
0
.
5 2 士 0
.
0 2 5 1
0
.
9 6 士 O
,
0 12 0
0
.
17 土 0
.
0 0 3 1
0
,
5 0 士 0
.
0 16 8
0
.
8 2 士 0
.
0 2 3 6
0
.
69 士 0
.
0 19 6
1
.
09 土 0
.
0 60 1
0
.
34 士 0
.
0 20 1
0
.
74 上 0 . 0 30 5
水浸出物 ( % )
9 4 1 士 0
.
19 5 5
7
.
2 3 士 0
.
09 84
5
.
7 2 土 0
.
12 0 1
6
.
2 1 生 0
.
0 5 8 9
6
.
9 0 士 0
.
0 6 2 】
7
.
8 2 士 0 . 10 6 2
5
.
2 3 士 0
.
0 8 16
9
.
14 士 0
. 】8 2 0
5
.
5 2 士 0
.
0 4 0 3
6
.
8 1 士 0
.
0 3 9 6
醇浸出物 ( 弧 )
3
.
7 士 0
.
0 84 2
6
.
6 土 0
.
0 6 8 2
4
.
8 土 0
.
0 3 89
4
.
4 土 0
.
0 7 5 2
7
.
6 土 0
.
0 68 1
4
.
6 土 0
,
0 52 8
4
.
5 士 0 . 04 5 2
】1 . 7 士 ( ) . 03 4 5
5
.
0 土 0
.
0 25 9
5
.
0 士 0
.
04 2 7
2
.
2 不 同产地褚实子提取物对 小鼠肝组织 中丙二
醛的影响 实验结果表明 ,各产地褚实子醇 、 水提取
物均可抑制小鼠正常肝组织 自氧化 MD A 的产生 ,
且山西 、 广西及安徽 三个产地的褚实子醇提物 的抑
制肝组织脂质过氧化反应的作用优于维生素 E ( 50
m群 L ) 二 详情见表 2 。
表 2 不同产地褚实子的水浸出物对小鼠肝匀浆脂质过氧化产物 M D A 的影响 ( 。 = 3 , x 土 S )
组别 水浸出物浓度
( g 生药材 / m L ) 抑制率 (
% )
醇浸出物浓度
( g 生药材 / m )L
M D A
, 1 : 11` ) l / : 1 , g )
1
.
2 5 土 O
.
o l l J )
1
.
0 8 土 0 0 2 3 ] )
1
.
2 4 士 0
.
0 3 8 1 )
1
.
3 1 士 0
.
04 2
几 )
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、
1 1 士 0
.
0 1 1 1 )
1
.
2 6 土 0
.
( )2 4 1)
1
.
19 士 0
.
0 3 ] I )
1
.
10 士 0
.
0 13 1)
1
.
2 3 土 0
.
0 2 6 1 )
1
.
18 士 0
.
0 4 1 1 }
抑制率 (% )
1.1J,1
t,1.1
新疆乌鲁木齐
山西长治
河南遂平
广东广州
广西桂林
贵州贵阳
湖北武汉
安徽芜湖
山东烟台
浙江东阳
自氧化组
维生素 E 组
3 0
.
9 4
4 0
.
3 3
3 2
.
6 0
2 7
.
6 2
3 8
.
6 7
3 0
.
3 9
3 4
.
2 5
3 9
.
2 3
3 2
.
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.
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.
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1
.
5 5 土 0 0 3 1 ] )
1
.
3 2 士 0 . 0 16 ] )
1
.
5 2 土 0 02 6 1、
1
.
5 1 土 0 0 3 2 1 )
1
.
8 1 士 0
.
0 10
1
.
13 士 0 . 0 18 1 ) 37 5 7
与自氧化组 比较 : ’ )尸 < 0 . 05
3 讨论
3
.
1 褚实子原植物构树在我国大部分地区均有分
布 ,历年药典均以灼烧后的灰分为其药材质量评价
指标 , 以灰分含量越少质量越优 。 从实验结果发现 ,
10 个产地的药材总灰分的含量均低于药典规定 的
标准 8 . 0% , 酸不溶性灰分低于 1 . 2% 〔6 J , 山东烟台 、
浙江东阳和广东广州三个产地的褚实子的灰分含量
远低于药典规定的标准 , 从这一点说为上品 。 近年
来研究发现褚实子水提取物有改善衰老模型实验动
物的记忆能力 ,水提物及醇提物有抗疲劳作用和比
较显著的耐缺氧作用 ,对正常小鼠疲劳 、 缺氧等刺激
因子具有增强应激保护效用〔7 1 , 而本实验研究也发
现褚实子的水 、醇提取物有较明显 的抗小鼠肝匀浆
脂质过氧化的作用 , 因此建议中国药典再版时收载
水 、 醇浸出物含量 。
3
.
2 衰老的自由基学说认为 ,衰老是由自由基引起
组织损伤的结果 f ’ 了。 临床发现 , 体内脂质过氧化产
物增多 , 抗氧化酶活性降低是 衰老的重 要生理 变
化 18〕 。 脑衰老过程中 ,神经元脂质过氧化物 ( L P o )
降解 ,形成丙二醛 ( M DA ) 、烷烃等终末产物发生生
物大分于交联作用 ,造成细胞内衰老色素和脂褐素
堆积 ,形成常见 “ 寿斑 ” 。 其中 M DA 的含量可直接
反应机体氧化损伤的程度 。 本实验证实 , 无论褚实
子水或醇提物都有抑制小鼠肝组织中 MD A 生成的
作用 ,这正验证了褚实子中医临床上 的抗衰老的作
用 ,也为将褚实子开发成抗衰老或保健药提供一定
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199 9 : 13 4
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收稿 日期 : 2 0 5一9一 2
褶合光谱法检测限预测 系统
陈 岚 , ,朱臻宇 , ,吴玉 田 2 , 柴逸峰 2 , 曹颖瑛 2 , 孙连娜 2 (1 . 南京军区杭州疗养院海勤疗养区 , 浙江 杭州 31 0 2 ; 2 . 第
二军医大学药学院 , 上海 2004 3 )
摘要 目的 : 建立褶合光谱法检测限预测系统 。 方法 : 分别采用两种方法对检测限进行预测 。 结果 : 在两个
混合体 系中 ,预测方法与实际测得结果相符 。 结论 : 检测限预测 系统操作快速 、 简便 ,有利于方法的比较与选
择 。
关键词 限量检查 ;检测 限 ;褶合光谱法 ;预测 系统
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 10 0 6 一 0 1 1 1 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一 0 1 5 2 一 0 3
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在药物分析中 , 常需对与主成分紫外吸收光谱
相似的杂质作限量检查 。 因杂质含量低 ,其往往被
吸收相似的主成分所掩盖 ,一般采用色谱技术加以
分离后再进行测定 〔’浏 ,较为繁琐 。 褶合光谱法 的
模式识别系统 ,可揭示杂质吸收对整个紫外可见光
区的光吸收特性细微变化 , 以检出杂质的存在 ,在实
际应用中具有灵敏度高 , 无需分离的优点 [ ’ ,’l 。 本
文通过建立褶合光谱法杂质检测 限智能预测系统 ,
给予用户一个方法效能指标的估计参数 , 简化了化
学操作 , 为方法的选择提供依据 。
1 原理
根据紫外可见光谱的两个基本属性— 线性和加和性 ,混合物光谱可采用混合物中各单组分的实
际光谱 ,按浓度比例进行纯数学加和后 ,再加人模拟
的仪器噪声分布来构造 ,其公式 :
a 二 C l p + C
Z丫 + … + e ( 1 )
式中 a 为混合物光谱向量 , p 、 , 为各单组分的
光谱向量 , C 飞 、 C : 为相应单组分的浓度 , e 为混合物
光谱中的误差向量 。 本文提出以下二种方法对误差
分布进行模拟 [ 5 , 6 〕 :
1
.
1 偶然误差分布法 仪器噪声分布的大小和方
向有较强的随机性 ,可采用符合一定标准偏差正态
分布的模拟信号替代 , 通过对一个样品进行实测得
出的检测限 ,从一系列标准偏差中 ,找出最符合采样
仪器误差分布实际情况的一个 , 构造检测限预测系
统 。
1
.
2 基线采样法 因仪器噪声随采样过程 ,可能会
出现定向漂移等非偶然性变化 。 为在检测限预测过
程中 ,更好地估计这些因素对结果的影响 ,我们可采
用基线采样法估计误差分布 。 其过程是 : 以空白替
代样品 ,采集其基线吸收数据组群 , 以获得仪器在实
际采样时 ,可能出现的误差分布 ,并以其作为误差向
量 ,构造检测限预测系统 。
2 仪器与试药
UV / iV s 一 W 褶合光谱仪 (第二军医大学研制 ) ;
十万分之一电子天平 (梅特勒 ,美国 ) ;( 液体涡旋混