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[收稿日期 ]　 2002-05-05　　 [修回日期 ]　 2002-12-12
[本文编辑 ]　尹　茶 ,曹　静
· 实验研究·
楮实子的氨基酸及脂肪油成分分析
黄宝康 , 秦路平* , 郑汉臣 , 张巧艳 (第二军医大学药学院生药学教研室 ,上海 200433)
[摘要 ]　使用氨基酸自动分析仪对楮实子的游离与结合氨基酸进行分析 ,用气相色谱 -质谱联用仪分析测定其脂肪酸成分。结
果发现楮实子含有 14种以上的氨基酸 ,主要为谷氨酸、精氨酸等。 油中的脂肪酸组成主要为亚油酸以及棕榈酸、硬脂酸等 ,其
中不饱和脂肪酸十八碳 -8, 11-二烯酸占总脂肪酸的 83. 62%。 该结果表明 ,楮实子含有丰富的氨基酸与不饱和脂肪酸 ,其补益
作用可能与之有关。
[关键词 ]　楮实子 ; 氨基酸 ; 脂肪酸
[中图分类号 ]　 R 282. 710. 3　　　 [文献标识码 ]　 B　　　 [文章编号 ]　 0258-879X ( 2003) 02-0213-01
Analysis of amino acid and fatty acid of Fructus Broussonetiae
HU ANG Bao-Kang , Q IN Lu-Ping* , ZHEN G Han-Chen, ZHAN G Qiao-Yan ( Depar tment o f Pharmacognosy , Schoo l of
Pha rmacy , Second M ilitar y Medical Univ ersity , Shanghai 200433, China)
[ABSTRACT]　 To analy ze amino acid and fatty acid of Fructus Broussonetiae. The amino acids o f Fructus Broussonetiae w ere
analyzed with automa tic amino acid inst rument and fa tty acids we re analy zed with GC-M S-Compute r sy stem. More than 14
amino acids w ere analy zed and the fatty acid fr om Fructus Broussonetiae contains 17 compounds, of w hich 8, 11-octadeca-
dienoic acid and Hexadecanoic acid are main com ponents. The abundance o f amino acids and unsatura ted fa tty acid may con-
tribute to the tonic function of Fructus B roussonetiae.
[KEY WORDS]　Fructus Broussonetiae; amino acid; fatty acid
[ Acad J Sec M il Med Univ , 2003, 24( 2): 213 ]
⒇
　 中药楮实子为桑科植物构树 [Broussonetia papy rif era
( L. ) Vent. ]的干燥成熟果实 ,中国历版药典均有收载 ,具有
补肾清肝 ,明目利尿的功效 ,用于腰膝酸软 ,虚劳骨蒸 ,头晕
目昏 ,目生翳膜 ,水肿胀满 [1]。 古本草多记载楮实子为补益
药 ,如《名医别录》载为上品:甘、寒 ,无毒。 功用大补益 ,久服
不饥、不老 ,轻身 [2]。现代文献 [3]也表明其具有抗老年痴呆或
延缓老年痴呆的作用。目前关于楮实子化学成分方面的研究
较少 ,为探讨楮实子的活性成分 ,我们对其含量较高的脂肪
酸及氨基酸进行分析测定。
1　材料和方法
1. 1　样品采集　楮实子于 2001年 8月采自江苏南京地区 ,
采集地点经全球定位仪 ( GPS)精确定位:东经 32°02. 478′,北
纬 118°50. 298′,海拔 32 m ,土壤为酸性腐殖质土。果实晒干 ,
即为药材楮实子。 经作者鉴定为桑科植物构树的成熟果实。
1. 2　样品处理
1. 2. 1　总氨基酸提取　取纯净楮实子粉碎过 60目筛 ,精密
称取 200 mg ,加 6 mo l /L盐酸 5 ml于安瓿中 ,充氮气后熔
封 , 110℃水解 18 h,用 4 mo l / L NaO H调 pH值至中性 ,用
0. 02 mo l / L盐酸稀释至 50 ml,过 0. 45μm微孔滤膜 ,为总
氨基酸分析用样品液。
1. 2. 2　游离氨基酸提取　精密称取过 60目筛样品粉末
1 g ,按文献方法 [4]制备游离氨基酸样品液供分析测定。
1. 2. 3　脂肪酸提取　楮实子 60℃干燥后 ,粉碎装入折好的
滤纸筒内 ,用石油醚 60℃水浴索氏提取 8 h,回收石油醚 ,
95～ 105℃干燥 2 h,称量 ,脂肪油得率为 27. 85%。取适量楮
实子脂肪油按文献 [5]方法制备脂肪酸甲酯样品液 ,用气相
色谱 -质谱联用仪进行分析。
(下转第 217页 )
·213·第 2期 . 赵卫权 ,等 .硝苯地平溶液的光解动力学研究
⒇ [作者简介 ]　黄宝康 ( 1969-) ,男 (汉族 ) ,博士生 ,讲师 .
E-mail: h bk999@ sohu. com
* Corresponding auth or. E-mai l: qinluping@ hotmai l. com
441-449.
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[收稿日期 ]　 2002-05-22　　 [修回日期 ]　 2002-12-17
[本文编辑 ]　邓晓群
(上接第 213页 )
1. 3　仪器及分析条件
1. 3. 1　氨基酸分析　日立 835-50型氨基酸自动分析仪。分
析柱为 2619型阳离子交换树脂柱 ( 2. 6 mm× 150 mm )。 柱
55℃ ,缓冲液泵压力 4. 134～ 4. 479 MPa。 缓冲液流速 0. 225
ml / min。茚三酮检测 ,流速 0. 3 ml /min。进样量 50μl。分析
方法的重复性变异系数 < 2. 5% ,各种氨基酸的回收率平均
为 95%。
1. 3. 2　脂肪酸分析　美国 Finnig an Voyage r气相色谱 -质谱
联用仪。 色谱柱: HP-5石英毛细管色谱柱 ( 30 mm× 0. 25
mm, 0. 25μm )。 柱温: 70～ 300℃ ( 10℃ /min)。 汽化温度:
250℃。进样量: 0. 5μl。载气 (流量 ) He( 1. 0 ml /min)。分流比
为 30∶ 1。质谱检测器为 EI电离源 ,电子能量 70 eV ,离子源
温度 200℃。 测定结果以峰面积归一化法定量。
2　结　果
2. 1　氨基酸测定结果　见表 1。 结果表明 ,楮实子至少含有
16种以上的氨基酸 ,以天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯
氨酸、赖氨酸等为主 ,其中 7种为人体必需氨基酸。 以 100 g
干燥样品计 ,楮实子总氨基酸含量合计为 12. 44 g ,其中人体
必需氨基酸为 3. 92 g ( 31. 5% )。 游离氨基酸含量合计为
34. 37 mg ,其中人体必需氨基酸为 4. 01 g ( 11. 7% )。
2. 2　脂肪酸测定　见表 2,共分离鉴定了 17个脂肪酸成分 ,
主要有亚油酸、棕榈酸、硬脂酸等 ,其中不饱和脂肪酸占 80%
以上。
3　讨　论
楮实子中无论是总氨基酸还是游离氨基酸均十分丰富 ,
尤其是谷氨酸、精氨酸含量较高。氨基酸不仅可以合成机体的
组织蛋白质 ,或转变成为重要的含氮化合物 ,如嘌呤、嘧啶、肾
上腺素、甲状腺素及其他蛋白质、多肽激素等 ,而且可以氧化
分解产生能量 ,尤其是高含量的精氨酸是参与合成肌酸供给
ATP能量的重要原料。 氨基酸作为体内能量的来源或转变成
为一些生理活性物质 ,其作用已为临床所证实。楮实子具有的
补肾与滋补强壮作用可能与其富含的氨基酸有直接关系。
表 1　楮实子水解后游离氨基酸分析
序号 氨基酸 总氨基酸含量
( g /100 g )
游离氨基酸含量
( mg /100 g)
1 天冬氨酸 ( ASP) 1. 50 1. 23
2 苏氨酸 ( T HR)* 0. 36 0. 25
3 丝氨酸 ( SER) 0. 40 0. 89
4 谷氨酸 ( GLU) 2. 18 7. 80
5 甘氨酸 ( GLY) 1. 05 1. 07
6 丙氨酸 ( ALA) 0. 54 0. 38
7 缬氨酸 (V AL)* 0. 68 0. 87
8 蛋氨酸 ( MET)* 0. 09 0. 09
9 异亮氨酸 ( ILE)* 0. 54 0. 32
10 亮氨酸 ( LEU)* 0. 91 1. 60
11 酪氨酸 ( TY R) 0. 40 0. 32
12 苯丙氨酸 ( PHE)* 0. 58 0. 34
13 赖氨酸 ( LYS)* 0. 76 0. 54
14 组氨酸 ( HIS) 0. 34 0. 39
15 精氨酸 ( ARG) 1. 74 18. 28
16 脯氨酸 ( PRO) 0. 30 0. 69
17 胱氨酸 ( CYS) 0. 07 -
　* 为人体必需氨基酸
表 2　楮实子油脂肪酸组成
峰号 化合物 保留时间
( t /min)
相对含量
(% )
1 壬酸 nonanoic acid 10. 727 0. 01
2 月桂酸 l au ric acid 13. 386 0. 05
3 肉豆蔻酸 tet radecanoic acid 15. 761 0. 18
4 十五烷酸 n-pen tadecanoic acid 16. 861 0. 04
5 棕榈油酸 palmi toleic acid 17. 712 0. 18
6 棕榈酸 Hexadecanoic acid 17. 928 11. 22
7 十八碳 -9, 12-二烯酸 18. 687 0. 07
9, 12-octadecadien oic acid
8 十七烷酸 h ep tadecanoic acid 18. 912 0. 12
9 十八碳 -8, 11-二烯酸 19. 679 83. 62
　 8, 11-octadecadien oic acid
10 硬脂酸 N-octadecanoic acid 19. 879 2. 93
11 十九烷酸 n onadecanoic acid 20. 779 0. 02
12 二十碳 -11, 13-二烯酸 21. 421 0. 12
　 11, 13-eicos adienoic acid
13 二十碳 -11-烯酸 11-eicos enoic acid 21. 454 0. 14
14 二十烷酸 11-eicosenoic acid 21. 654 0. 14
15 亚油酸乙酯 Eth yl linoleic acid 22. 913 0. 20
16 二十二烷酸 docosanoic acid 23. 321 0. 08
17 二十三烷酸 tricosanoic acid 24. 105 0. 01
(下转第 227页 )
·217·第 2期 . 封　亮 ,等 .无嘌呤无嘧啶核酸内切酶 /氧化还原因子 1的研究进展
图 4　 X-gal染色检测目的基因的诱导表达
Fig 4　 X-gal histochemical staining for
inducille taiget gene epression
物细胞的可调控基因表达系统相比 ,它具有开 /关调节严格、
背景表达低、完全表达水平高、快速反应性和无多向性效应
等优点。 5LO基因是否具有诱导细胞凋亡等方面的作用尚
不完全清楚 ,为建立 5LO表达系统并避免其可能的毒性作
用 ,我们选择采用诱导表达系统。本实验中我们使用的 pBI-
G质粒是一个双向表达载体 ,其一端插入目的基因 ,另一端
则编码报告基因 lac Z。 5LO传统的检测方法是采用 West-
ern印迹法检测蛋白或用高效液相法检测其作用代谢产物
如 5-HE TE等 ,较不方便。 而在该系统中我们只需采用 X-
ga l进行原位染色或测定细胞半乳糖苷酶活性即可很方便地
进行定性和定量。Pf u酶保真性较好 , 5LO cDNA片段长约 2
kb, PCR扩增的片段经测序证实无碱基错误。
　　本实验中我们成功地在 HeLa细胞上构建了 5LO诱导
表达体系并得到证实 ,为我们深入研究 5LO功能及药物筛
选奠定了基础。
[参 考 文 献 ]
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[收稿日期 ]　 2002-07-21　　 [修回日期 ]　 2002-11-19
[本文编辑 ]　尹　茶
(上接第 217页 )
　　楮实子中脂肪油中主要为亚油酸等不饱和脂肪酸 ,它们
具有降血脂、抗动脉粥样硬化 ,抗血小板聚集及血栓形成以
及促进饱和脂肪酸及脂类、胆甾醇类在血液中的运行 ,以减
少沉积在血管壁上的可能性 ,此外还有抗肿瘤作用。 楮实子
中油的含量较高 ,提示楮实子在防治心血管疾病及保健方面
具有一定的潜力。
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[本文编辑 ]　曹　静
·227·第 2期 . 周　斌 ,等 . 5-脂氧合酶诱导表达系统的建立