全 文 ：刺头复叶耳蕨总黄酮含量测定方法的建立
*
李辉敏
* 基金项目:江西省教育厅资助项目 (编号 GJJ12737)，江西省卫生厅资助项目 (编号 2012A014)成果之一。
收稿日期:2014 － 10 － 30
通讯作者:李辉敏 (1974 － )，女，博士，副教授，研究方向为中药药效物质基础与作用机制研究。E － mail:
13970280063@ 163. com。
(九江学院基础医学院 江西九江 332000)
摘要:目的 研究建立刺头复叶耳蕨中总黄酮的含量测定方法。方法 利用紫外可见分
光光度法 (比色法)，以芦丁为标准品，测定标准曲线，得到线性回归方程，对测定方法
进行考察。结果 以芦丁为标准品，建立了标准曲线的回归方程为 Y = 0. 0121X － 0. 0322，
Ｒ2 = 0. 9998，线性关系在 17. 20 － 68. 80μg /mL 范围内。总黄酮平均回收率为 101. 36%，
ＲSD为 0. 824% (n = 6)。结论 该方法操作简单，方法精密度、重现性良好，样品溶液在
40min稳定性良好，可用于刺头复叶耳蕨中总黄酮含量的测定，为质量控制提供依据。
关键词:刺头复叶耳蕨，总黄酮，分光光度法
中图分类号:Ｒ 284. 2 文献标识码:A 文章编号:1674 － 9545 (2015)01 － 0064 － (04)
刺头复叶耳蕨 (Arachniodes exilis Ching)为
鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物，广泛分布于世界热带
和亚热带湿润区域，以亚洲东部和东南部种类最
为丰富，我国主要分布于长江流域以南地区及山
东、河南等省，具有清热利湿，抗菌消炎，镇静
作用，民间用于治疗急性黄疸型肝炎、关节炎、
腰腿疼、痢疾、烫火伤等［1］。刺头复叶耳蕨中主
要化学成分为黄酮类化合物，有研究表明鳞毛蕨
类植物有包括抗病毒、抗肿瘤等药理作用，产生
这些药理作用的成分是黄酮类化合物或总间苯三
酚类化合物［2］。本研究根据 《中国药典》2010 年
版 (一部)附录所载紫外 －可见分光光度法［3］，
并参照部分文献［4］，应用对照品芦丁建立了紫外
－可见分光光度法测定刺头复叶耳蕨中总黄酮成
分含量的方法。
1 材料及仪器
1. 1 材料
刺头复叶耳蕨根茎采自江西省星子县，由九
江学院基础医学院高春华教授鉴定为鳞毛蕨科
(Dryopteridaceae)复叶耳蕨属 (Arachniodes)刺
头复叶耳蕨 (Arachniodes lushanensis Ching)的根
茎。芦丁对照品:中国生物制品检定所，批号
100080 － 200306;Al (NO3)3:上海科思精密化
学品公司;其它所有试剂 (均为分析纯):汕头市
西陇化工有限公司;超纯水:自制。
1. 2 仪器
双光束紫外可见分光光度计:TU － 1901，北
京普析通用仪器有限责任公司;电子分析天平:
BT224S 型，德国赛多利斯;旋转蒸发仪:ＲE －
52AA，上海亚荣生化仪器厂。
2 测定方法及方法学考察
2. 1 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品 21. 5mg 于
50mL的容量瓶中，用 70%的乙醇定容至 50mL，
摇匀，即得对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备
精密称取烘干的 60 目刺头复叶耳蕨根茎粉末
2g，置 100mL容量瓶中，加入 50%的乙醇 80mL，
置超声波清洗仪中超声提取 30min，取出放冷至室
温，加 50%的乙醇至刻度，摇匀、过滤，取续滤
液，即得供试品溶液。
2. 3 测定波长的选取
(总第 108 期)
(Sum No. 108)
2015 年第 1 期
No. 1，2015
九江学院学报 (自然科学版)
Journal of jiujiang University (natural sciences Edition)
精密吸取对照品溶液 5mL 置于 50mL 容量瓶
中，加入 5% NaNO2 2mL，摇匀，放置 6min，加
入 10% Al (NO3)3 2mL，摇匀，放置 6min，加入
10% NaOH 20. 0mL，再加水至刻度，摇匀，放置
15min。以溶剂作为空白参比液，在紫外 －可见分
光光度计上，以溶剂为空白，在 200 － 600nm波长
范围内扫描，得到扫描图谱，根据所得图谱中最
大吸收波长确定测定波长。
2. 4 芦丁标准曲线的制备
分别精密吸取标准溶液母液 2、3、4、5、6、
7、8mL 置于 50mL 容量瓶中，加入 5% NaNO2
2mL， 摇 匀， 放 置 6min， 加 入 10% Al
(NO3 )3 2mL，摇 匀，放 置 6min，加 入 10%
NaOH20. 0mL，再 加 水 至 刻 度，摇 匀，放 置
15min，分别为标准品溶液 1、2、3、4、5、6、7。
以溶剂作为空白参比液，然后在 486. 4nm 波长下
测定各标准溶液的吸光度值 (A)，以芦丁标准溶
液浓度为 X (μg /mL)轴，以吸光度值 (A)为 Y
轴作图，得线性回归方程。
2. 5 精密度实验
取对照品溶液 5. 0mL 置于 50mL 容量瓶中，
按 照 标 准 曲 线 制 备 项 下 “加 入 10% Al
(NO3)32mL”起显色，采用紫外 －可见分光光度
计，按标准曲线法分别依法连续 6 次测定吸光度
值，由标准曲线计算得到其测得浓度 (μg /mL)，
计算 ＲSD值。
2. 6 稳定性实验
取同一批供试品溶液 1 份，按照标准曲线制
备项下“加入 10% Al (NO3)3 2mL”起显色，放
置 0、10、20、30、40、50、60、70min，按标准
曲线法测定吸光度值，观察其变化。
2. 7 重复性实验
取同一批烘干的 60 目刺头复叶耳蕨根茎粉末
6 份，按照 “2. 2”法制备供试品溶液，吸取
2mL，置于 25mL容量瓶中，按标准曲线制备项下
“加入 10% Al (NO3)3 2mL”起显色，依法测定
吸光度值，计算 ＲSD值。
2. 8 加样回收率实验
准确称取已知含量的刺头复叶耳蕨根茎 60 目
干燥粉末 6 份，分别加入一定量的芦丁标准品，
依“2. 2”法制备供试品溶液，吸取 2mL，置于
25mL容量瓶中，按标准曲线制备项下 “加入
10% Al (NO3)3 2mL”起显色，依法测定吸光度
值，并计算回收率。
2. 9 刺头复叶耳蕨样品中总黄酮的含量测定
精密量取适量的样品溶液，置于 50mL容量瓶
中，加入 5% NaNO2 2mL，摇匀，放置 6min，加
入 10% Al (NO3)3 2mL，摇匀，放置 6min，加入
10% NaOH 20. 0mL，再加水至刻度，摇匀，放置
15min，即得供试品溶液;以溶剂作为空白参比
液，然后依法连续测定吸光度值 3 次，取平均值，
带入上述线性回归方程中，进一步计算出每克生
药中黄酮含量。
3 结果
3. 1 测定波长
扫描图谱如图 1 所示，芦丁对照品溶液显色
后在 486. 4nm 处具有最大吸收，因此，选择
486. 4nm作为检测波长。
图 1 芦丁对照品溶液的紫外扫描图
3. 2 标准曲线
由图 2 可知，线性回归方程为:Y = 0. 0121X
－ 0. 0322，Ｒ2 = 0. 9998，检测浓度线性范围为
17. 20 － 68. 80μg /mL。
图 2 标准曲线
3. 3 精密度试验结果
同一份标准溶液显色后在 486. 4nm 波长处连
续测定 6 次，吸光度值分别为 0. 480、0. 482、
0. 482、0. 482、0. 482、0. 480。测定结果的相对
标准偏差 (ＲSD 值)为 0. 214%，证明本测定方
法中仪器精密度良好。
3. 4 显色稳定性实验结果
同一批供试液显色后，在 0、10、20、30、
40、60、90min测得的吸光度值在 40min 以内变化
小，在 0、10、20、30、40min 测得吸光度值的相
对标准偏差 (ＲSD 值)0. 27%。因此，在实际工
作时，应该在显色后 40min之内完成测定。见表 1。
·56·第 1 期 李辉敏:刺头复叶耳蕨总黄酮含量测定方法的建立
表 1 稳定性实验结果
测定时间
(t /min)
样品溶液
吸光度
吸光度下降率
(%)
0 0. 483 －
10 0. 483 －
20 0. 483 －
30 0. 482 0. 21
40 0. 480 0. 62
60 0. 464 3. 93
90 0. 459 4. 97
3. 5 重复性实验结果
6 份样品溶液由标准曲线得到测定结果分别为
0. 480、0. 482、0. 484、0. 485、0. 486。的相对标
准偏差 (ＲSD值)为 1. 67%，证明本测定方法重
复性良好。
3. 6 回收率实验结果
回收率测定结果如表 2 所示，5 份样品测得回
收率的均值为 101. 36%，5 次测定结果的 ＲSD 值
为 0. 824% (n = 6)，证明本法测定准确度较高，
符合分析要求。
表 2 回收率测定结果
编号
样品溶液中含
有量 (mg)
加入标准品
量 (mg)
检测值
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
1 0. 394 0. 103 0. 498 100. 20
2 0. 394 0. 103 0. 503 101. 21
3 0. 394 0. 103 0. 508 102. 21 101. 36 0. 824
4 0. 394 0. 103 0. 504 101. 41
5 0. 394 0. 103 0. 506 101. 81
3. 7 含量测定
在本样品溶液制备条件下，根据以上测定方
法计算出每克刺头复叶耳蕨根茎干燥粉末中黄酮
含量为 19. 86mg /g (n = 3)。
4 讨论
植物中总黄酮含量的测定方法一般包括分光
光度法、薄层色谱扫描法、高效液相色谱法等［5］。
其中，薄层色谱扫描法结果不准确，现已少用;
分光光度法仪器较便宜，操作简单方便，结果较
准确可靠;高效液相色谱法结果准确，稳定性、
重现性好，但操作复杂、所需费用较高，且需要
确定测定指标性成份。本实验根据文献调研，采
用芦丁作为标准品，样品通过显色后在 486. 4nm
波长处测定吸光度。经方法学考察，本测定方法
的精密度、重复性、回收率实验均符合测定要求，
样品在显色后 40min 内稳定，从而为刺头复叶耳
蕨中总黄酮的含量测定建立了一种简便可行的方
法。
参考文献:
［1］周道年，阮金兰，蔡亚玲． 复叶耳蕨地上部分黄酮类化合物 ［J］． 中国药学杂志，2008，
43，(16) :1218．
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［4］张玉祥，邱蔚芬． 银杏叶超声波提取工艺研究 ［J］． 时珍国医国药，2006，17 (5):784．
［5］贾薇，陈家仪，曾仪儿，等． 聚酰胺纯化枳实总黄酮的工艺研究 ［J］． 中药新药与临床药
理，2012，23 (5):586．
Determination of Total Flavones from Arachniodes Exilis Ching
LI Huimin
(Basic Medical College of Jiujiang University，Jiujiang，Jiangxi 332000，China)
(下转第 91 页)
·66· 九江学院学报 (自然科学版) 2015 年第 1 期
表 1 两组退热与体征消退时间表比较 (d)
组别 例数 (n) 热退时间 咳嗽消失时间 流涕消失时间
治疗组 43 1. 76 ± 0. 95 4. 05 ± 0. 97 2. 15 ± 0. 55
对照组 43 2. 17 ± 0. 92 4. 80 ± 1. 51 2. 46 ± 0. 42
t 11. 03 8. 01 10. 24
p ＜ 0. 01 ＜ 0. 01 ＜ 0. 01
2. 2 两组疗效比较
两组总有效例数 (显效 +有效)经卡方检验，
x2 = 5. 29，p ＜ 0. 05 ，疗效差异有统计学意义，
详见表 2。
表 2 两组有效性比较 (n，%)
组别 显效 有效 无效 总有效数
治疗组 28 12 3 40 (93. 0)
对照组 22 12 9 34 (79. 0)
2. 3 不良反应发生情况
两组治疗中均复查血常规及尿常规未见异常，
无严重并发症出现，效果肯定，无明显药物不良
反应。
3 讨论
本研究显示治疗组体温、咳嗽及流涕消退时
间明显短于对照组，这与连花清瘟胶囊中的成分
密切相关，达到疏清表邪，芳化湿浊，启肺通窍。
体温消退作用与连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏
仁、石膏中具有解表清热作用相关，同时与板蓝
根、绵马贯众、鱼腥草、连翘、金银花的抑制和
杀灭病原体作用分不开;诸药合用具有清瘟解毒、
宣肺泄热的作用［1］，对热毒袭肺证有很好的疗
效［2］。药理学研究显示:连翘和金银花具有抗病
原微生物的作用，对甲型流感病毒、SAＲS、禽流
感及鼻病毒有抑制作用，还有调节免疫增强流感
患者抗病康复能力，减少流感及肺部感染的反复
发作作用［3］，甘草对甲型流感病毒有抑制和抗炎
作用。在用药过程中安全性好［4］。
上呼吸道感染是门诊常见病，未及时控制会
引起下呼吸道感染及合并其他严重并发症，所以
要积极重视，平时要养成良好的家庭及个人卫生
习惯，传播普及卫生科学知识，帮助人们建立健
康信念和行为方式。
参考文献:
［1］田代华主编． 实用中药词典 (上卷)［M］． 北京:人民卫生出版社，2002． 427．
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临床药理，2005，16 (4):290．
［3］王新功，崔学军，刘新生． 连花清瘟胶囊治疗流行性感冒的临床疗效观察 ［J］中国药房，
2008，19 (27):2146．
［4］杨立波，季振慧，王保群． 连花清瘟胶囊治疗流行性感冒 280 例疗效观察 ［J］． 疑难病杂
志，2005，10 (4):276．
(责任编辑 宁梵西)
(上接第 66 页)
ABSTＲACT OBJECTIVE To establish ultraviolet spectrophotometry for the content determination of total fla-
vones from Arachniodes Exilis Ching． METHODS Total flavones in Arachniodes Exilis Ching were determined by ultravi-
olet spectrophotometry with rutin as the reference substance． ＲESULTS The regression equation of rutin standard curve:
Y =0. 0121X － 0. 0322 was established，the correlation coefficient is 0. 9998． The linear range for rutin was 17． 20 － 68．
80μg /mL． The recovery rate of total flavones was 101. 36%，ＲSD = 0. 824% (n = 6)． CONCLUSION This method
was fit to determine the total flavonids of Arachniodes Exilis Ching for the quality control ，and it was easy to handle with
good credibility，repeatability and stability．
KEY WOＲDS Arachniodes Exilis Ching，total flavones，ultraviolet spectrophotometry
(责任编辑 宁樊西)
·19·第 1 期 汪翠婷:连花清瘟治疗上呼吸道感染 86 疗效分析