全 文 ： Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志
·1044· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
Chinese
* 国家食药监总局药化注册司民族药专项，中药质量与安全标准研究创新团队
** 通信作者 马双成：Tel：（010）67095272；E-mail：masc@nifdc.org.cn
郑 健：Tel：（010）67095739；E-mail：fzswx2012@163.com
第一作者 Tel：（010）67095711；E-mail：liqian_19901117@163.com
蒙药材草乌叶 DNA条形码研究 *
李谦 1，2，王维宁 3，过立农 2，刘杰 2，郑健 2**，马双成 2**
（1. 中国药科大学，南京 210009；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050；3.辽宁省药品检验检测院，沈阳 110036）
摘要 目的：建立草乌叶与其易混品的分子鉴定方法。方法：通过聚合酶链式反应（PCR）对草乌叶及 9种
混伪品的候选序列（ITS、ITS2、matK、rbcL、psbA-trnH）进行扩增，比较各序列的扩增效率和测序成功率，并
进行种内、种间遗传变异分析和 barcoding gap分析。结果：ITS和 ITS2序列 GC含量较高，种间变异明显大
于种内变异，根据 barcoding gap图显示种内、种间遗传距离重叠较小，适合物种的区分，基于 K2P距离进行
聚类分析，ITS序列呈现较好的单系性。结论：ITS序列可应用于蒙药材草乌叶与其混伪品的鉴定，为民族
药鉴定提供新方法。
关键词：民族药；蒙药；草乌叶；混伪品；基因检测；DNA条形码；分子鉴定；物种鉴定；基原鉴定；聚合酶链
式反应（PCR）；ITS序列
中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793（2016）06-1044-09
doi：10.16155/j.0254-1793.2016.06.15
DNA barcodes of Aconiti Kusnezoffii Folium as Mongolian medicine*
LI Qian1，2，WANG Wei-ning3，GUO Li-nong2，LIU Jie2，
ZHENG Jian2**，MA Shuang-cheng2**
（1. China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China；2. National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China；
3. Liaoning Institutes for Drug Control，Shenyang 110036，China）
Abstract Objective：To establish a molecular identification method for Aconiti Kusnezoffii Folium and its
adulterants．Methods：The candidate sequences（ITS，ITS2，matK，rbcL，psbA-trnH） of Aconiti Kusnezoffii
Folium and nine adulterants were amplified with polymerase chain reaction（PCR）．The amplification efficiency
and success rate of sequencing were compared．The inter-specific and intra-specific variations，as well as the
barcoding gap was analyzed．Results：ITS and ITS2 sequences had higher GC content，and the inter-specific
divergence was more obvious than intra-specific variation．The figure of barcoding gap showed that the overlap
between inter-specific distances and intra-specific distances was smaller than other loci，which was more suitable
for species identification．The NJ trees based on K2P distances showed that ITS sequences revealed better monophyly．
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·1045· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(6)
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草乌叶为蒙医常用药材，《认药白晶鉴》记载其
“味辛，涩，性平。有小毒”，具有“杀粘（菌），消炎，止
痛”的功效［1］。草乌叶在蒙药临床应用中占有重要
地位。《蒙医金匮》记载含草乌叶的处方 25个，约占
所载处方数的 1.25%；《临床验方集》共计载含草乌
叶的处方 5个，约占所载处方数的 1.3%；《蒙药方剂》
中记载含草乌叶的处方共 4个，约为所载处方数的
1.4%；《高世格梅林方》记载含草乌叶处方共 6个，约
占所载处方数的 1.35%［2］。
中国药典 2010年版收载草乌叶基原为毛茛科
乌头属植物北乌头（Aconitum kusnezoffii Reichb.）的
干燥叶［3］，而一些蒙医认为开紫色花且具有块根的乌
头属植物均可作草乌使用，这对草乌叶的使用上造成
了一些混肴；藏药中也使用草乌叶，其草乌叶的来源
为铁棒锤（Aconitum pendulum Busch）和伏毛铁棒锤
（Aconitum flavum Hand.-Mazz.）的干燥叶，由于蒙医
与藏医有着不可分割的渊源，造成乌头属植物使用的
混乱现象［4］；北乌头还未大量栽培，草乌叶的来源多
为野生，但乌头属植物种类繁多，形态变异复杂，分类
十分困难，对于采集者和无经验的检验及使用者难以
准确鉴别，因此常出现川乌等同属近缘物种的叶作为
草乌叶混用的现象。乌头属植物具有毒性，不同物种
的毒性有所差别，因此不能轻易混用［5］。
DNA条形码分子鉴定法是利用一段公认的、相
对较短的 DNA序列来进行物种鉴定，是对传统鉴定
方法的有力补充［6-7］，由加拿大动物学家 Hebert等［8］
首次提出 COⅠ序列已作为动物的通用 DNA条形码
可对 98%的动物进行鉴定，由于 COⅠ基因在植物
中的进化速率较慢，不适合作为植物的 DNA条形码，
植物 DNA条形码的研究从单一条形码到组合条形
码，但仍无法实现其通用性［9-11］。本研究希望对植物
DNA条形码的研究提供一些参考，并为民族药的基
原鉴定提供新的思路。
1 仪器、材料
1.1 仪器 PCR仪（ABI Veriti），电泳仪（Amersham，
EPS-301），全自动凝胶成像系统（Bio-Rad 1708195）。
分析天平（Mettler AB135-S），球磨仪（Retsch MM400），
纯水仪（Millipore Milli-Q advantage A10），水浴锅（泰
斯特 DK-98-II）。
1.2 材料 植物基因组 DNA提取试剂盒（DP305，
天根生化科技有限公司）；Ex taq（RR001B，TaKaRa）；
dNTP Mixture（4030，TaKaRa）；GelRed（41003，
Biotium）；琼脂糖（BIOWEST）；Tris-base（Sigma）；冰
醋酸（分析纯）；EDTA-Na2·2H2O（国药集团化学试
剂有限公司）；引物（上海捷瑞生物工程有限公司）。
本实验所用乌头属植物 10个物种，共计 73批样品
（见表 1），分别来自其主产区内蒙、辽宁、吉林，由辽
宁省药品检验检测院王维宁主任中药师鉴定。
Conclusion：ITS sequence can be used to differ Aconiti Kusnezoffii Folium from adulterants，and be employed as
a new method for identification of ethnodrug.
Keywords：ethnodrug；Mongulian medicine；Aconiti Kusnezoffii Folium；adulterants；genetic testing；DNA
barcodes；molecular identification；species identification；origin identification；polymerase chain reaction（PCR）；
internal transcribed spacer of nuclear ribosomal DNA
表 1 样品信息表
Tab. 1 Samples information for testing potential barcodes
拉丁名（Latin name） 凭证样品号（voucher No.） 产地（locality）
北乌头（Aconitum kusnezoffii Reichb.） WT20130713-1 内蒙古兴安盟（Xing’anmeng Nei Menggol）
WT20130713-2 内蒙古呼伦贝尔盟（Hulunbeiermeng，Nei Monggol）
WT20130713-3 内蒙古呼伦贝尔盟（Hulunbeiermeng，Nei Monggol）
WT20130713-5 内蒙古锡林郭勒盟（Xilinguolemeng，Nei Monggol）
WT20130713-6 内蒙古呼伦贝尔盟（Hulunbei’ermeng，Nei Monggol）
WT20130713-7 吉林省白山市（Baishan，Jilin）
WT20130713-8 内蒙古呼伦贝尔盟（Hulunbei’ermeng，Nei Monggol）
WT20140730-9 内蒙古呼伦贝尔盟（Hulunbei’ermeng，Nei Monggol）
WT20141001-12 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
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拉丁名（Latin name） 凭证样品号（voucher No.） 产地（locality）
WT20141003-14 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20141004-16 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
WT20141005-19 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20141006-25 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20141007-27 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20141022-31 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
WT20150501-33 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150502-37 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150502-38 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
WT20150502-39 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150509-42 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150509-43 辽宁省鞍山市（An’shan Liaoning）
WT20150510-53 辽宁省辽阳市（Liaoyang，Liaoning）
WT20150510-54 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150510-55 辽宁省辽阳市（Liaoyang，Liaoning）
WT20150524-56 辽宁省沈阳市（Liaoyang，Liaoning）
WT20150705-60 吉林省白山市（Baishan，Jilin）
WT20150705-63 吉林省通化市（Tonghua，Jilin）
WT20150705-64 吉林省通化市（Tonghua，Jilin）
WT20150730-66 内蒙古通辽市（Tongliao，Nei Monggol）
WT20150725-69 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
宽裂北乌头［Aconitum kusnezoffii Reichb.） var.
Gibbiferum （Reichb.） Regel］
WT20141008-28 辽宁省大连市（Dalian，Liaoning）
WT20141009-29 辽宁省鞍山市（Anshan，Liaoning）
WT20150509-48 辽宁省鞍山市（Anshan，Liaoning）
WT20150510-50 辽宁省辽阳市（Liaoyang，Liaonign）
WT20150510-51 辽宁省鞍山市（Anshan，Liaoning）
宽叶蔓乌头（Aconitum sczukinii Turcz.） WT20140924-10 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20141005-20 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20141006-23 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150509-45 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150509-47 辽宁省鞍山市（An’shan Liaoning）
WT20150704-58 吉林省磐石市（Panshi Jilin）
狭叶蔓乌头（Aconitum volubile Pall） WT20150815-71 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20150818-72 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20150828-73 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
黄花乌头［Aconitum coreanum（Levl.） Rapaics］ WT20140927-11 辽宁省辽阳市（Liaoyang，Liaoning）
WT20150502-35 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150502-36 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
WT20150508-40 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150509-41 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150510-49 辽宁省辽阳市（Liaoyang，Liaonign）
WT20150510-52 辽宁省鞍山市（An’shan，Liaoning）
WT20150525-57 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
表 1（续）
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2 方法
2.1 DNA提取及测定 分别将草乌叶样品用 75%
乙醇浸湿的棉球擦拭干净，晾干后用球磨仪粉碎成超
细粉，称取 10~20 mg备用。按照植物基因组 DNA提
取试剂盒操作步骤进行 DNA提取。利用 Nano Vue
Plus（GE）测定 A260/280、A260/230及 DNA浓度。
2.2 聚合酶链式反应及测序 PCR扩增的反应条件
见表 2。PCR反应体系 25 μL：dNTP（2.5 mmol·L-1）
2 μL，反应缓冲液 2.5 μL，上下游引物各 1 μL，Taq
DNA聚合酶 0.2 μL，DNA模板 1 μL，高压蒸汽灭菌去
离子水 17.3 μL。PCR产物经纯化后使用 ABI 3730XL
测序仪（Applied Biosystems Co.，USA）进行双向测序。
拉丁名（Latin name） 凭证样品号（voucher No.） 产地（locality）
低矮华北乌头［Aconitum soongaricum Stapf var.
jeholense （Nakai et Kitag.） W.T.Wang］
WT20150801-67 内蒙古赤峰市（Chifeng，Nei Monggol）
WT20150820-74 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
牛扁（Aconitum barbatum Pers.var.puberulum Ledeb.） WT20150821-75 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
WT20150725-77 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
两色乌头（Aconitum alboviolaceum Kom.） WT20141001-13 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20141003-15 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20141004-18 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
WT20141005-22 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20141006-24 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20141006-26 辽宁省抚顺市（Fushun，Liaoning）
WT20150501-34 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
WT20150705-59 吉林省通化市（Tonghua，Jilin）
WT20150705-61 吉林省通化市（Tonghua，Jilin）
WT20150705-62 吉林省白山市（Baishan，Jilin）
草地乌头（Aconitum umbrosum（Korsh.） Kom.） WT20141004-17 辽宁省丹东市（Dandong，Liaoning）
WT20141005-21 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
WT20150712-68 辽宁省本溪市（Benxi，Liaoning）
吉林乌头（Aconitum kirinense Nakai） WT20140812-30 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
WT20141023-32 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
WT20150809-70 辽宁省铁岭市（Tieling，Liaoning）
表 1（续）
表 2 引物及 PCR反应条件
Tab. 2 Primers and PCR reaction conditions
序列名称
（sequence name）
引物名称
（primer name）
引物序列
（primer sequence）（5’-3’）
PCR反应条件
（PCR reaction condition）
ITS2 ITS2F ATGCGATACTTGGTGTGAAT 94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s；72 ℃ 45 s；
35 cycle；72 ℃ 10 minITS3R GACGCTTCTCCAGACTACAAT
psbA-trnH fwd GTTATGCATGAACGTAATGCTC 94 ℃ 5 min；94℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，
35 cycle；72 ℃ 10 minrev CGCGCATGGTGGATTCACAATCC
matK 3F_KIM CGTACAGTACTTTTGTGTTTACGAG 95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，
35 cycle；72 ℃ 10 min1R_KIM ACCCAGTCCATCTGGAAATCTTGGTTC
rbcL rbcLa_F ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC 95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，52 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，
35 cycle；72 ℃ 10 minrbcLa_R GTAAAATCAAGTCCACCRCG
ITS ITS4 TCCTCCGCTTATTGATATGC 95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，
35 cycle；72 ℃ 10 minITS5 GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG
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2.3 数据处理 测序峰图使用 CodonCode Aligner
3.7.1（CodonCode Co.，USA）校 对 拼 接，去 除 引
物区段。将所有序列利用 MEGA5.0（molecular
evolutionary genetics analysis）分析比对。基于 K2P
模型进行遗传距离分析，用 NJ法（Neighbor-Joining
Tree）建立聚类树，通过 bootstrap（1 000次重复）对
各分支进行支持率检验。
3 结果
3.1 不同 DNA条形码候选序列 PCR扩增效率及
测序成功率 分别分析 5条序列的扩增效率和测序
成功率（见图 1），ITS2和 rbcL 2条序列的扩增效率
和测序成功率均为 100%，matK序列的测序成功率
最低。
3.2 草乌叶药材不同 DNA条形码候选序列信息及
种内变异分析 对所有样品的序列特征进行分析
图 1 扩增效率和测序成功率
Fig. 1 Amplification efficiency and success rate of sequecing
（表 3），ITS2序列和 pabA-trnH序列长度较短，均
在 160~330 bp之间，matK序列的长度最长，为 793~
796 bp。ITS序列和 ITS2序列的 GC含量较高，均在
50%以上，matK序列的 GC含量最低，仅为 31%左右。
表 3 草乌叶与同属样品的序列特征
Tab. 3 The sequence characteristic of Aconiti Kusnezoffii Folium and adulterants
拉丁名 （Latin name） 序列信息（sequence characteristic） matK rbcL psbA-trnH ITS ITS2
A.kusnezoffii Reichb. 长度（lengh）/bp 796 701 314~315 636~637 229~210
GC含量（GC content）/% 30.7 43.1 36.8 62.6 64.4
A.kusnezoffii Reichb.var.Gibbiferum
（Reichb.） Regel
长度（lengh）/bp 796 701 315 636~637 220
GC含量（GC content）/% 30.7 43.1 36.8 61.6 64.3
A.sczukinii Turcz. 长度（lengh）/bp 796 701 315 636~637 219~220
GC含量（GC content）/% 30.7 43.1 36.8 61.7 64.4
A.volubile Pall. 长度 （lengh）/bp 796 701 315 636~637 220
GC含量（GC content）/% 30.7 43.1 36.8 61.2 64.5
A.coreanum （Levl.） Rapaics 长度（lengh）/bp 796 701 315 637 222
GC含量（GC content）/% 31.3 42.9 36.5 59.9 61.7
A.soongaricum Stapf var.jeholense
（Nakai et Kitag.） W.T.Wang
长度（lengh）/bp 796 701 315 636 220
GC含量（GC content）/% 30.7 43.1 36.5 60.2 64.1
A.abarbatum Pers.var.puberulum
Ledeb.
长度（lengh）/bp 796 701 321~326 636 221
GC含量（GC content）/% 31.6 42.9 35.5 59.0 60.1
A.umbrosum （Korsh.） Kom. 长度（lengh）/bp 793~796 701 319 464 160
GC含量（GC content）/% 31.0 42.9 36.4 49.4 51.3
A.kirinense Nakai 长度（lengh）/bp 796 701 314~323 636 221
GC含量（GC content）/% 31.6 43.0 35.9 59.0 60.5
A.barbatum Pers.var.puberulum Ledeb. 长度（lengh）/bp 796 701 321~324 636 221
GC含量（GC content）/% 31.6 42.9 35.9 59.0 60.5
3.3 草乌叶药材不同 DNA条形码候选序列种内及
种间遗传距离分析 对草乌叶的种内变异及种间变
异进行分析；结果（表 4）表明，所有序列的平均种间
距离均大于平均种内距离，除 psbA-trnH序列外，其
他序列的平均种间最小距离均大于平均种内最大距
离，且 ITS和 ITS2序列最为明显。
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3.4 草乌叶不同 DNA条形码候选序列 barcoding
gap检验 理想条形码应种内变异足够小而种
间变异足够大，并在两者之间形成明显的间隔
区［12］。 根究 barcoding gap图（图 2）可看出，rbcL
序列和 matK序列种间距离较小，且与种内距离接
近。psbA-trnH序列种内距离与种间距离重合较多，
无明显 barcoding gap。ITS和 ITS2序列种间距离基
本呈现正态分布，虽然 barcoding gap不明显，但种
内遗传距离与种间遗传距离重叠较小，有利于物种
区分
表 4 种内种间遗传距离分析
Tab. 4 Analysis of intra-specific and inter-specific K2P distance
平均值（mean） matK rbcL psbA-trnH ITS ITS2
平均种间距离（average inter-specific distance） 0.018±0.003 0.004±0.001 0.031±0.006 0.067±0.006 0.081±0.013
平均种间最小距离（average inter-specific minimum distance） 0.013±0.003 0.003±0.001 0.017±0.001 0.086±0.006 0.118±0.010
平均种内距离（average intra-specific distance） 0.001±0.001 0.001±0.001 0.017±0.004 0.002±0.001 0.001±0.001
平均种内最大距离（average maximum intra-specific distance） 0.002±0.001 0.002±0.001 0.050±0.001 0.008±0.001 0.007±0.001
图 2 候种内种间遗传距离分布图
Fig. 2 Relative distribution of inter-specific divergence between intra-specific variation
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3.5 草乌叶药材及其同属混品的 ITS/ITS2序列
聚类分析 根据以上数据分析，ITS和 ITS2序列
更有利于物种区分，基于 ITS序列和 ITS2序列建
立草乌叶与混伪品的 NJ树（图 3、4）；结果表明，
ITS序列能将北乌头与黄花乌头、低矮华北乌头、
牛扁、吉林乌头、两色乌头、草地乌头区分，并呈现
较好的单系性，而 ITS2序列仅能将其与草地乌头
区分。
注（note）：bootstrap 1 000次重复，仅显示支持率≥ 50%的分支［The bootstrap scores（1 000 replicates） are shown（≥ 50%） for each branch］
图 3 基于 ITS序列建立草乌叶与其混伪品的 NJ树图
Fig. 3 Phylogenetic tree of Aconiti Kusnezoffii Folium and adulterants base on the ITS sequences with NJ method
4 讨论
草乌叶作为一种蒙药材在内蒙地区使用量较大，
但由于资源分布量不大，多数采集于东北的辽宁和吉
林地区。但是，在采集过程中发现，吉林地区由于畜
牧业较发达，牧民为防止牲畜误食草乌中毒，将草乌
连根铲除，造成吉林地区资源分布减少，采集困难。
因此本实验样品多数来自于辽宁地区。
结合扩增效率、测序成功率与序列长度、GC含量
的结果，可以看出，序列长度短且 GC含量越高的序列
扩增效率和测序成功率越高，而matK序列长度最长，
且 GC含量相较于其他候选条形码最低，因此其扩增效
率和测序成功率均比较低，不适合作为用于草乌叶鉴
定的条形码。由于中药材大多数为储存时间较长且储
存环境较为恶劣，并且饮片和成药经过各种炮制加工，
导致 DNA有所降解和破坏，因此选择较短且较牢固的
条形码序列对于中药材 DNA条形码鉴定非常重要。
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理想条形码应该种间变异明显大于种内变
异［13-14］。根据种内、种间遗传距离统计及 barcoding
gap图看出，matK、rbcL序列种间变异小，与种内变
异接近，无法区分，已有研究表明，matK、rbcL序列更
适合于不同科属之间的鉴定［15］。psbA-trnH、ITS和
ITS2序列种间变异最为明显，但 psbA-trnH序列为叶
绿体基因，具有很高的变异率［16-17］，导致平均种间最
小距离小于平均种内最大距离，barcoding gap图种
内、种间遗传距离重叠较大，不适用于草乌叶与混伪
品的区分。根据 NJ树图聚类分析可看出 ITS序列由
于序列长度较长，变异位点多，能够将草乌叶与 6种
同属样品进行区分，而 ITS2仅能区分 1种，鉴定效
率较低，因此 ITS序列更适合于草乌叶与混伪品的
区分。
利用 ITS序列并不能将北乌头与宽裂北乌头、宽
叶蔓乌头、狭叶蔓乌头进行区分，宽裂北乌头为北乌
头的变种，其基因变异较小，仅有 3个碱基差异。可
进一步利用化学分析方法研究宽裂北乌头的叶子能
否作为草乌叶的替代品混用。宽裂北乌头与宽叶蔓
乌头、狭叶蔓乌头为乌头属蔓乌头系，其亲缘关系比
较接近［15］，基因变异也非常小，无法通过聚类分析将
其区分。利用 ITS序列可将蔓乌头系与其他乌头系
草乌叶的基原植物为毛茛科乌头属植物北乌头，同时
常用中药材草乌以及蒙药材草乌花、草乌芽均来源于
北乌头。由于同一物种不同药用部位的 DNA分子
相同，因此对草乌叶 DNA条形码的研究同样可适用
于基原为北乌头的其他药材与混伪品的区别和鉴定。
该方法快速、准确，为中药材监管提供有力的技术
支持。
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注（note）：bootstrap 1 000次重复，仅显示支持率≥ 50%的分支［The bootstrap scores（1 000 replicates） are shown（≥ 50%） for each branch］
图 4 基于 ITS2序列建立草乌叶与其混伪品的 NJ树图
Fig. 4 Phylogenetic tree of Aconiti Kusnezoffii Folium and adulterants base on the ITS2 sequences with NJ method
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（本文于 2015年 11月 4日收到）