全 文 ：滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎大鼠腹腔
巨噬细胞分泌 TNF-α的影响＊
李晓红 , 赵永娜 , 李兵兰 , 邵晓霞 , 李顺英 , 张荣平
(昆明医学院药学院 , 云南昆明　650031)　①　
　　摘　要:目的:探讨滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎 (adjuvantarthritis, AA)大鼠足趾肿胀及腹腔
巨噬细胞 (peritonealmacrophages, PMф)分泌肿瘤坏死因子 -α(tumornecrosisfactor-alpha, TNF-α)的影响 。
方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型 , 脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α, 用
酶联免疫吸附法检测 。结果:滇产粗根荨麻水提取部分 (400mg/kg, 200mg/kg)能明显抑制佐剂性关节炎大鼠
的足肿胀 , 并降低大鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α水平 。结论:滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎的治疗
作用可能与其抑制腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α有关 。
　　关键词:佐剂性关节炎;粗根荨麻;肿瘤坏死因子 -α
　　中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1000—2723(2007)06— 0021— 03
　　类风湿性关节炎是一种慢性自身免疫性疾病 ,
主要病理表现为滑膜及软骨组织破坏及多种炎性
因子的浸润 。
荨麻属类植物具有多种药理活性 , 如异株荨
麻不同部位的提取物具有多种药理学活性 , 如镇
痛 、抗炎[ 1] 、 抗前列腺细胞增生 、 抗糖尿病 、 抗
化学性肝损伤等 [ 2] 。滇产粗根荨麻 (Urticamacror-
rhizaHand-Mazz, Ur)是荨麻属植物的一种 , 民间
主要用于祛风除湿 , 治疗风湿病。我们前期工作
表明 Ur粗提物及水提取部分能明显抑制角叉菜胶
所致的大鼠足趾肿胀 [ 3] 。本研究以大鼠佐剂性关
节炎 (adjuvantarthritis, AA)为模型 , 探讨滇产
粗根荨麻水提取部分对大鼠佐剂性关节炎的作用
及可能机制 。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂
荨麻采自云南武定县 , 经中科院昆明植物研
究所鉴定为粗根荨麻 (UrticamacrorhizaHand-
Mazz);粗根荨麻全草 , 70%酒精提取后 , 回收酒
精 , 分别用石油醚 、 乙酸乙酯 、 正丁醇萃取后的
水部分 , 蒸干即得水提取部分;强的松 (Pred-
nisonsacetate, Pre)5mg/片 , 浙江仙踞制药有限公
司 , 批号:060904;完全弗 氏佐剂 (Complete
Freundsadjuvant, CFA), Sigma公 司 , 批 号:
075K8915;RPMI-1640培养基 , 美国 Hyclone,
批号:Nrg0016;小 牛 血 清 , 新 西 兰 , 批 号
DQA0194;脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS大肠
杆菌来源), 批号:011:B4;台盼蓝 , Sigma公
司 , 批号:T-0776;D-hanks平衡盐 , Sigma公
司 , 批号:016K8317。大鼠肿瘤坏死因子 ELISA
试剂盒 , 批号:RTA00, 深圳生物晶美公司。
1.2　主要仪器设备
大鼠足趾肿胀测量仪 , 型号 YLS-7A, 山东
省医学科学院设备站;PALL纯水机 , 美国 PALL
公司;CO2 培养箱 , 型号:TYPB5060, 德国;酶
标仪 , 550型 , 美国 BIO-RAD公司。
1.3　AA模型的建立 [ 4]
S-D大鼠 50只 , 体重 180 ～ 200g, 雌雄各半 ,
由昆明医学院实验动物中心提供 , 许可证号:
SCXK(滇 2005-0008)。分为正常对照组 (nor-
mal);AA模型组;Ur400mg/kg组;Ur200mg/kg
组;阳性对照组 (Pre)。正常组大鼠右后足垫皮
内注入蒸馏水 0.1mL, 其余各组大鼠右后足垫皮内
注入 CFA0.1mL。于致炎后 7d开始灌胃给药 , 受
21
第 30卷第 6期　　　　　　　　　　　　　　　　云南中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol. 30No. 6
　 2007年 12月　　　　　　　　　　　JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine　　　　　　　　　　　　　12. 2007　
①＊基金项目:云南省教育厅科学技术基金重点项目 (04Z294C)
收稿日期:2007— 09— 26　　修回日期:2007—10— 15
作者简介:李晓红 (1978 ～ ), 女 , 山西永济人 , 在读硕士研究生 , 药理学专业 。
试药 Ur(400mg/kg· d, 200mg/kg· d), 阳性组
给予 Pre5mg/kg· d, 连续给药 14d或 21d。采用容
积法测量右后足足踝关节以下体积变化 , 于造模
前 、造模后 7d, 14d, 21d, 28d等不同时间点观察
记录各组大鼠致炎后足趾肿胀情况 , 致炎后体积
减去致炎前体积即为足趾肿胀度。
1.4　大鼠腹腔巨噬细胞的制备和 TNF-α的
诱生[ 5]
分别于造模后 21d、 28d脱颈处死大鼠 , 75%
酒精浸 1min, 固定大鼠于无菌手术台 , 预冷 D-
Hanks液 15mL分次灌洗腹腔 , 获取腹腔巨噬细
胞 , 离心 , 完全 RPMI-1640调整细胞浓度为 2×
10
6 /mL, 行细胞计数 (台盼蓝染色示细胞活力 >
95%), 接种于 96 孔培养板中 , 每孔 200μL,
37℃, 5%CO2培养箱培养 2h后 , 移除上清 , 去除
不贴壁细胞 , 重新加入 190μL完全 1640培养液 ,
加入 0.1mg/mLLPS10μL, 终浓度为 5mg/L继续培
养 24h后收集上清 , -20℃保存待测。
1.5　TNF-α的测定
TNF-α含量采用 ELISA法测定 , 按试剂盒说
明进行检测。
1.6　统计学方法
所有数据用 x±s表示 , 应用 SPSS11.5软件进
行方差分析。
2　结果
2.1　Ur水提取部分对 AA大鼠关节肿胀度的影响
用肿胀抑制率表示 , 对继发病变预防用药的
实验结果表明 , 造模 7d后 , 各处理组大鼠关节较
正常组大鼠肿胀 (P<0.05)。给予药物治疗 7天
后 , Ur水提取部分两个剂量组均对 FCA所致大鼠
关节肿胀有明显抑制作用 , 与 AA模型组比较差异
有显著性意义 (P<0.05, P<0.01)。见表 1
表 1　滇产粗根荨麻水提取部分对 AA大鼠关节肿胀度的影响 (n=10;x±s)
分组 剂量 (mg/kg) 7d 14d 21d 28d
AA - 0.49±1.19 0.59±0.21 0.52±0.20 0.63±0.31
Pre 5 0.55±0.17 0.41±0.15＊ 0.27±0.17＊ 0.35±0.21＊
Ur 400 0.52±0.22 0.45±0.18＊ 0.43±0.24＊ 0.37±0.20＊
200 0.52±0.20 0.43±0.17＊ 0.36±0.23＊ 0.47±0.18＊
正常组 - 　0.13±0.10＊＊ 0.12±0.09＊＊ 0.09±0.05＊＊ 0.07±0.05＊
　　＊P<0.05;＊＊P<0.01与正常组比较
2.2　Ur水提取部分对 LPS诱导 AA大鼠腹腔巨噬
细胞分泌 TNF-α水平的影响
从表 2可以看出 PMфTNF-α的释放 , AA大
鼠 PMф分泌 TNF-α水平在致炎后 d21及 d28均
处于较高水平 , 与正常组相比 。 Ur水提取部分
400mg/kg可降低致炎后 d21及 d28AA大鼠 PMф分
泌 TNF-α水平 (P<0.01, 与模型组比较)。 Ur
水提取部分 200mg/kg可抑制致炎后 d21AA大鼠
PMф分泌 TNF-α水平 。
表 2　滇产粗根荨麻水提取部分对 AA大鼠
腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α水平的影响 (n=5;x±s)
组别 剂量
(mg/kg)
TNF-α水平 (μg/L)
d21 d28
AA - 51.69±19.95 54.83±21.13
Pre 5 24.61±6.07＊＊ 28.15±6.25＊＊
Ur 400 29.02±8.91＊＊ 35.64±8.20＊＊
200 37.53±12.37＊ 45.23±13.33
N - 17.61±4.71＊＊ 21.26±5.72＊＊
　＊P<0.05;＊＊P<0.01与模型组比较
3　讨论
AA大鼠是研究类风湿性关节炎 (RA)及评价
防治 RA药物的常用动物模型之一 [ 6] 。在本实验
中 , 从持续给药动态观察可见 Ur水提取部分
400mg/kg组在注射 FCAd14即表现出明显的抑制
大鼠足趾肿胀作用 , 且逐渐增强 , Ur水提取部分
200mg/kg在实验中亦表现出明显的抑制大鼠足趾
肿胀作用。有研究发现 AA大鼠血清中 TNF-α水
平自致炎后 2w开始随病情发展逐渐升高至第 4w达
高峰 , 第 8w降低[ 7] 。在本实验中 , 选择性观察 Ur
水提取部分对致炎后 21d及 28d大鼠 PMф分泌
TNF-α水平变化影响 , 结果表明 , AA大鼠 PMф
分泌 TNF-α水平 28d高于 21d, Ur水提取部分
400mg/kg可抑制 d21及 d28AA大鼠 PMф分泌 TNF
-α水平 , Ur水提取部分 200mg/kg可抑制 d21AA
大鼠 PMф分泌 TNF-α水平 , 但其抑制大鼠足趾
肿胀及 PMф分泌 TNF-α水平不及 Ur水提取部分
400mg/kg。有研究报道 , 在体内体外实验中均发现
22
2007年　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　云南中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷
异株荨麻能明显抑制 LPS诱导人全血细胞分泌 TNF
-α及 IL-1β , 可能是其治疗类风湿性关节炎的重
要机制 [ 8] 。在本实验中滇产粗根荨麻水提取部分亦
表现出较强的抗炎作用及抑制 AA大鼠 PMф分泌
TNF-α作用 , 抑制 PMф分泌 TNF-α可能是滇产
粗根荨麻水提取部分治疗佐剂性关节炎的重要机制
之一。
[参考文献 ]
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tioninHumanWholeBloodbyExtractumUrticaefoliorum
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(编辑:迟越)
TheEffectsoftheAqueousFractionfromUrticaMacrorrhizaHand-MazzontheProduction
ofTumorNecrosisFactor-alphafromPeritonealMacrophagesinAdjuvantArthritisRats
LIXiao-hong, ZHAOYong-na, SHAOXiao-xia, LIShun-ying, LIBinglan, ZHANGRong-ping
(FacultyofPharmaceuticalSciences.KunmingMedicalColege, Kunming650031, China)
ABSTRACT:Objective:ToexploretheefectsoftheaqueousfractionfromUrticamacrrhizaHand-Mazz
onthelevelofTNF-αfromperitonealmacrophages(PMф)inadjuvantarthritisrats.Methods:Freundscom-
pleteadjuvantwasinjectedinthehindpawofratstoinduceadjuvantarthritis(AA)ratmodel.Theedemaofthe
hindpawwasmeasuredatdiferenttime.ThelevelofTNF-αfromPMфwasmeasuredbyELISAmethod.Re-
sults:Comparedwithadjuvantarthritisgroup, theaqueousfractionfromUrticamacrorrhizaHand-Mazzatadose
rangeof200mgto400mgcansignificantlyrelievethepawedemaandinhibitLPSinducedreleaseofTNF-αfrom
PMфinAArats.Conclusion:AqueousFractionfromUrticamacrhizaHand-Mazzwasfoundtoinhibittheproduc-
tionofTNF-α, adjuvantarthritisrats, itmightberelatedtothemechanismsofitsanti-inflammation.
KEYWORDS:AdjuvantArthritis;UrticaMacrrhizaHand-Mazz;TumorNecrosis
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第 6期 李晓红 , 等:滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α的影响＊