全 文 ：3 　讨论
一般认为 SPS/Suc-6-pase系统催化的蔗糖合成
过程是植物叶片蔗糖合成的主要途径 〔4〕。本试验
结果表明 ,沙参叶片 SPS活性在整个生育期呈单峰
曲线变化 ,在生育中期即植株快速生长时期达到最
高峰;而叶片可溶性糖含量也呈单峰曲线变化 ,到生
育中期达到最高值 ,叶片 SPS活性与可溶性糖含量
变化相一致 ,说明 SPS活性与可溶性糖含量密切相
关 。适当施氮可以提高叶片 SPS活性 ,但是过多施
氮并不利于叶片 SPS活性的提高 ,反而使叶片可溶
性糖含量降低 ,生育后期叶片可溶性糖含量表现为
随着施氮量的增加而逐渐升高 ,可能与过多施用氮
肥使沙参叶片衰老进程变慢有关 。总之 ,适当施用
氮肥既可以提高沙参叶片 SPS活性和可溶性糖含
量 ,又能够在收获时期保持叶片较低的可溶性糖含
量 ,提高根中多糖含量和根的产量。
根中 SS的作用主要是催化蔗糖的降解 。本试
验结果表明 ,莱阳沙参根中的 SS活性于生长中期达
最大值。适当施用氮肥能够提高 SS活性 ,增加合成
多糖的底物 ,但过多施用氮肥根中 SS活性反而下
降 ,不利于多糖等有效成分的积累 。
参 考 文 献
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(2006-04-10收稿
2006-09-01修回)
丽江山慈菇最佳采收期研究
袁理春 ,徐中志 ,赵　琪 ,吕丽芬 ,杨丽云 ,陈　翠
(云南省农业科学院高山经济植物研究所 ,云南丽江 674100)
　　摘要　采用 HPLC法测定不同时期 、不同株龄的丽江山慈菇 Iphigeniaindica秋水仙碱含量。结果:鳞茎中秋水
仙碱含量于果实刚饱满时最高 ,果实成熟后慢慢降低 , 至翌年鳞茎刚萌发时最低;一年生实生苗鳞茎含量最高。种
子育苗的采收最佳时期为三年后果熟期 ,即第三年 9月下旬。
关键词　丽江山慈菇;秋水仙碱;积累动态;采收期
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)03-0266-03
作者简介:袁理春(1968-),副研究员 ,主要从事药用植物育种及栽培 , E-mail:ynzhaoqi@163.com, Tel:0888-5187863。
　　秋水仙碱能抑制细胞有丝分裂 ,用以治疗癌症 ,
并广泛用于多倍体植物育种 。欧洲从秋水仙
ColchicumautumnaleL.获得秋水仙碱而我国主要
从丽江山慈菇鳞茎中获得 。
丽江山慈菇 Iphigeniaindica又名草贝母 、假贝
母 、山慈菇 ,为百合科多年生草本 ,分布于我国西藏 、
四川和云南中部及西北部的草地 、沟边及松林中的
酸性沙壤土及红土地带。 1964年曾报道丽江山慈
菇含秋水仙碱(Colchicine,约 0.14% ～ 0.2%)、N-甲
酰去乙酰秋水仙碱(N-Formyl-N-deacetylgolichicine)
及 β -光秋水仙碱(B-Lumicolchicine)〔1〕 ,最早收载于
云南省药品标准 1974版 〔2〕。该标准没有含量测定
项 , “以色白 ,饱满 ,质坚者为佳 ”,基本靠经验判断
药材质量优劣 ,不能适应现代制药业生产发展要求。
因此追踪丽江山慈菇秋水仙碱含量及单位面积生物
量 ,以确定最佳采收期 ,保证质量和经济效益 。
1　仪器与药品
岛津 LC-10A高效色谱仪;MIKRO22R冷冻离
心机(德国 Hetich);二极管阵列检测器;秋水仙碱
对照品。野生丽江山慈菇鳞茎于 2000 ～ 2004年采
自云南省农业科学院高山经济植物研究所 GAP种
植基地。经鉴定为丽江山慈菇 I.indicaKunchet
Benth。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　流动相:甲醇-异丙醇-冰乙酸-二
乙胺 -水(20∶5∶0.25∶0.5∶75),检测波长:254 nm,流
·266· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 3期 2007年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.03.005
速:1.0 ml/min,色谱柱:AngilantextengdBonusRP-
C18(4.6×4.6×250mm),柱温:40℃。
2.2 　对照品溶液制备　取秋水仙碱对照品适量 ,
60℃减压干燥至恒量 ,精密称定 ,加 80%甲醇制成
每 1 ml含 0.1mg的溶液。
2.3 　供试品溶液制备　称取本品 5 g,粉碎(若为
鲜品 ,应切成薄片 ,在 50℃烘干),放入 100 ml圆底
烧瓶 ,加甲醇回流提取 3次 ,每次回流 2小时。第一
次加甲醇 40ml,第二次 、第三次分别加 30ml。合并
三次提取液于 100 ml量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,取上清液用 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤
液 。
2.4 　测定方法　分别精密量取对照品溶液和供试
品溶液 5 μl,注入高效液相色谱仪 ,按外标法以峰面
积计算 。
2.5 　精密度试验　取秋水仙碱对照品溶液 ,重复
进样 5次 ,记录每次对照品峰的积分面积 。计算
RSD为 0.64%(n=5),精密度很好 ,说明测定方法
和仪器稳定正常 ,符合规定 〔3, 4〕。按秋水仙碱色谱
峰理论踏板数计算 ,其平均值为 3015,因此确定其
理论踏板数不得低于 3000。
2.6 　重复性试验　分别取同一批药材样品 5份 ,
按含量测定方法操作 ,计算 RSD为 1.1%(n=5),
说明本方法具有良好的重复性 ,符合药典相关规定 。
2.7 　稳定性试验　取一份供试品溶液 ,分别在 0、
2、4、6、8、10、12 h时测定 ,结果表明 ,本溶液在 12 h
内稳定 ,其峰面积 RSD为 1.4%(n=7)。
2.8 　线性关系考察　取秋水仙碱对照品溶液 ,按
含量测定项下的色谱条件 ,分别进样 2、5、8、11、14、
17、21 μl,记录秋水仙碱的峰面积 ,以秋水仙碱对照
品进样量为纵坐标 ,峰面积为横坐标 ,绘制标准曲
线 。统计学处理 ,得回归方程为:Y=4.16147E-
7X, r=0.9997,说明样品在 0.2 ～ 2.0 μg的范围内
线性关系良好。
2.9 　样品回收率试验　精密称取已测知含量的样
品适量 5份 ,分别精密加入定量的秋水仙碱对照品 ,
按样品测定方法测定 ,外标法计算。秋水仙碱的平
均回收率为 100.9%, RSD为 1.4%(n=5)。符合
相关规定。
2.10　含量测定　按含量测定方法和操作〔5〕 ,分别
测定不同采收期丽江山慈菇中秋水仙碱含量。
3 　结果与讨论
3.1 　丽江山慈菇不同部位有效成分含量　丽江山
慈菇地下鳞茎的外包皮呈褐红色 ,质轻;外层白色 ,
厚约 2 mm;中层白色 ,厚约 4mm;内层白色 ,直径约
0.5 cm。
将全草各部位 ,在 50℃烘干 ,粉碎 ,含量测定结
果(见表 1):地上部分基本不含秋水仙碱 ,没有提取
利用价值;地下部分秋水仙碱含量 ,主要集中在外包
皮和鳞茎外层 。因此 ,在采收丽江山慈菇时 ,应尽量
保持外包皮的完整 ,而且成熟的丽江山慈菇 ,同等重
量的药材 ,鳞茎小 ,秋水仙碱含量高 ,因为外皮所占
表积大。
　表 1 　丽江山慈菇各部分秋水仙碱含量
部位 鲜重(g) 干重(g) 水分(%) 秋水仙碱含量(‰)
地上部 8.9414 8.0741 9.7 0.0003
地下部 鳞茎外包皮 0.2989 0.2831 5.3 1.34
　　　 鳞茎外层 2.1896 1.1101 49.3 1.71
　　　 鳞茎中层 8.3783 3.6781 56.1 0.09
3.2　丽江山慈菇有效成分与采收时间　在同一种
植地的丽江山慈菇各生长期样品含量测定 (见表
2):盛果期含量最低仅为 0.22%,果实饱满期最高
达 0.36%,果熟期 0.34%。为获得整株高秋水仙碱
含量的最佳时期应为果熟期 。
　表 2 　丽江山慈菇有效成分与采收时间
采样时间 物候期 鲜重(g) 干重(g) 水分(%)秋水仙碱含量(%)
2004-7-24 挂果初期 19.5621 7.8053 60.1 0.13
2004-8-9 盛果期 18.8977 7.6158 59.7 0.22
2004-9-5 果实饱满 17.9987 7.4155 58.8 0.38
2004-9-20 果熟期 20.1121 8.4672 57.9 0.36
2004-10-10 倒苗期 21.1109 9.2255 56.3 0.34
2004-11-11 全部倒苗 18.9971 8.8906 53.2 0.35
3.3　丽江山慈菇有效成分与种植年限　人工种植
的丽江山慈菇取样 ,考察其生物增长量及秋水仙碱
的积累情况 ,结果见表 3。
　表 3 　丽江山慈菇有效成分与种植年限
生长年限 球茎个数 鲜重(g) 干重(g) 秋水仙碱含量(%)
1年生 103 5.3800 2.3585 0.51
2年生 25 8.7292 3.8047 0.24
4　小结
丽江山慈菇地上部分基本不含秋水仙碱 ,没有
提取利用价值 。秋水仙碱主要集中在鳞茎部分 ,含
量以最外面的膜质层(外包皮)和鳞茎外层最高 ,中
层和内层含量很少 。因此 ,在采收时 ,应尽量保持膜
质层的完整。同等重量的成熟丽江山慈菇药材 ,鳞
茎越小 ,表面积越大 ,秋水仙碱含量越高 。
此外 ,种子播种一 年后亩产鳞茎 30 ～ 35kg,播
·267·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 3期 2007年 3月
种两年后亩产鳞茎 70 ～ 80 kg,但鳞茎很小 ,采收不
便 ,且鳞茎缺损较多;播种四年后 , 亩产鳞茎可达
230 ～ 250 kg,但秋水仙碱含量低 ,且种植周期长 ,投
入资金大 ,不利于农民收回成本。播种三年的鳞茎
相对较大 ,亩产有 130 ～ 150kg,且便于采收 ,秋水仙
碱含量也较高 。可获得较大经济效益 。因此 ,人工
种植丽江山慈菇一般在种植第三年即采收较为划
算 。
参 考 文 献
[ 1] KaulJL, MozaBK, SantavyF, VrblovskyP.Substances
fromthePlantsoftheSubfamilyWurmbaeideaeandtheir
Derivatives.LIX:IsolationofalkaioidsfromPlantsofthe
subfamily.Collect.Czech.Chem.Commun, 1964, 29
(7):1689-1701.
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社 , 1974:36.
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2002:179.
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材科技 , 1983, (2):25-27.
(2006-05-22收稿
2006-10-30修回)
·资源 ·
化橘红 rDNAITS序列特征的初步分析
陈晓颖 1 ,高晓霞 1 ,罗源生2 ,蔡岳文 3 ,吴苑燕 1
(1.广东药学院 ,广东广州 510006;2.广东广弘药材有限公司 ,广东广州 510080;3.广东省中药研究所 ,广
东广州 510520)
　　摘要　目的:研究化橘红及其近缘种 rDNAITS区碱基序列的特征及差异 。方法:利用 PCR产物直接测序 ,并
作序列变异分析。结果:5个植物样品的 rDNAITS序列长度为 675bp-683bp,其中 5.8SrDNA长度为 165bp,编码区
较保守。基于 K2P参数遗传距离模型构建的化橘红与沙田柚 、柑橘 rDNAITS序列遗传距离分别为 1.05和 2.29。
结论:化橘红与其近缘品种 rDNAITS序列有明显的差异。
关键词　化橘红;沙田柚;rDNAITS序列
中图分类号:R282.71　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)03-0268-03
PreliminaryStudyonrDNAITSSequencingandCharacteristicsofCitrusgrandisvar.tomentosa
CHENXiao-ying1 , GAOXiao-xia1 , LUOYuan-sheng2 , CAIYue-wen3 , WUYuan-yan1
(1.GuangdongUniversityofPharmacy, Guangzhou510006, China;2.GuangdongGuanghongMedicine＆DrugCompanyLimited,
Guangzhou510080, China;3.GuangdongResearchInstituteofTraditionalChineseMediicne, Guangzhou510520, China)
Abstract　Objective:TostudythediferenceofrDNAITSsequencesbetweenCirtusgrandisvar.tomentosaanditsrelatives.
Methods:TherDNAITSgenefragmentwasamplifiedbyPCRwithuniversalprimersofrDNAITSandsequenced.Results:TheDNA
sequencesofITSrangedfrom 675 to683 bpandthe5.8Sgeneofallofthesamplesare165 bpinsize.DistancevaluesofITSse-
quence, estimatedaccordingtoKimuratwo-parametermodelsbetweenC.grandisvar.tomentosaandC.grandisvar.shatin-you, C.
grandisvar.tomentosaandC.reticulatawere1.05 and2.29 respectively.Conclusion:TherearesomediferencesinrDNAITSse-
quencesamongC.grandisvar.tomentosaanditsrelatives.
Keywords　Citrusgrandisvar.tomentosaHort;Citrusgrandisvar.shatin-youHort;rDNAinternaltranscribedspacers(ITS)
sequence
　　化橘红为芸香科化州柚 Citrusgrandis`Tomen-
tos或柚 Citrusgrandis的未成熟或近成熟的干燥外
层果皮 。前者习称毛橘红 ,后者习称光七爪 、光五爪
或光橘红 〔1〕。化州柚加工成的毛橘红功效与柚加
工成的药材光橘红功效虽然近似 ,临床上也通用 ,但
一般认为毛橘红的质量较好 ,功效最佳〔2〕。有人认
为:“祛痰止咳的功效 , 柚皮远远赶不上化州橘
红”〔3〕。
·268· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 3期 2007年 3月