全 文 ：文章编号:1001 - 4829(2007)01 -0120 - 03
　　收稿日期:2006 - 04 - 15
　　基金项目:云南省科技厅项目重要濒危药材(丽江山慈菇)引种
驯化研究(2002ZY-17)
作者简介:袁理春(1968 -), 男 ,副研究员 ,主要从事药用植物
育种及栽培研究工作。
丽江山慈姑秋水仙碱 HPLC测定
袁理春1 ,徐中志 1 ,赵　琪 1 ,吕丽芬 1 ,杨丽云 1 ,
陈　翠 1 ,周　敏 2 ,周志宏 2 ,胥　勇3 ,杨永红3
(1.云南省农业科学院高山经济植物研究所 ,云南 丽江　 674100;2.云南植物药业 ,云南 昆明　 650019;3.云南农业大学植物保护
学院 ,云南 昆明　650201)
摘　要:采用 HPLC法测定丽江山慈姑鳞茎不同部位及云南省西北部和四川省越西县野生居群秋水仙碱含量。 结果表明:丽江山
慈姑地上部分基本不含秋水仙碱 ,鳞茎秋水仙碱含量由外及内依次降低 ,其中外膜质层为 0. 134%和鳞茎外层为 0. 171%;22个
野生丽江山慈姑居群中 ,丽江红岩(GS01)含量最高 ,达 0. 61%,永胜板桥乡(GS22)最低 ,为 0. 13%,平均秋水仙碱含量为 0. 40
% 。
关键词:丽江山慈姑;HPLC法;秋水仙碱含量
中图分类号:S644. 1　　　文献标识码:A
Determ ination of colchiane in Iphigenia ind ica Kunth et Benth. by HPLC
YUAN Li-chun1 , XU Zhong-zh i1 , ZHAO Q i1 , LU Li-feng1 , YANG Li-yun1 ,
CHEN Cu i1 , ZHOU M in2 , ZHOU Zhi-hong2 , XU Yong3 , YANG Yong-hong3
(1. The Research In stitu te ofA lp ine E conom ic Plan t, Yunnan A cadem y ofAg ricu ltu ralS ciences, Yunn an L ijiang 674100, Ch ina;2. Yunnan
Phytopharmaceu tical Co. , L td, Yunnan Kunm ing 650109, C hina;3 P lan t Protection Co llege ofYunnan Agricu ltu ralUn iversi ty, YunnanKun-
m ing 650201, C hina)
Abs tract:Simu lataneousHPLC determ ine th e colchicine in differen t part of bu lb of Iph igenia ind ica Kun th etB enth. and thew ild popu lation
of th e northw estw ard of Yunnan p rovince and Yuex i coun ty in S ichuan. Th e resu lt show s:The up-ground parts of Iph igen ia ind ica Kun th et
Ben th. con tain few colch icin e. The colch icine gradually reduce from outside to inn er in the bu lb of Iph ig en ia ind ica Kun th etB en th. , the ou t-
er-ep iderm is con tain 0. 134%, the outer of bu lb con tain 0. 171%. The con ten t of colchicine in the tw en ty-tw o w i ld popu lationsGS01 is 0.
61% and GS22 is 0. 13%. The average con ents of these colchicine is 0. 40%.
Key words:Iph ig en ia ind ica Kun th et Benth. ;HPLC;conten t of colch icine
　　丽江山慈姑 Iphigenia indica Kunth et B enth.为
百合科益辟坚属植物 。主要分布于中国西藏 、四川
和云南中部及西北部 。主要生于海拔 1900 ～ 3300
m的草地 、沟边及松林中的酸性砂壤土及红土地带 。
主要有效成分为秋水仙碱 (Co lchicine)(约 0. 14 %
～ 0. 2 %)、N-甲酰去乙酰秋水仙碱 (N-Fo rmy l-N-
deacety lgo lich icine)及 β-光秋水仙碱 (B-Lum ico lch-
icine)[ 1] ,中国最早收载于云南省药品标准 1974
版 [ 2] 。它在医药上主要用于治疗癌症 、痛风等 [ 3] ,
在农业上秋水仙碱广泛用于多倍体植物育种。丽江
山慈姑的主要用途为提取医药原料药秋水仙碱 ,因
此其质量优劣应以秋水仙碱含量高低为标准 ,根据
原丽江山慈姑质量标准的相关检验项目 ,结合项目
《云南省重要濒危药材 (药用动植物 )引种驯化研
究———丽江山慈姑》中对丽江山慈姑研究的试验数
据 ,建立适应现代制药业生产需求的丽江山慈姑质
量标准 ,指导企业生产 ,从而避免资源浪费和降低生
产成本。
1　材料与方法
1.1　仪器与材料
岛津 LC-10A高效液相色谱仪;二极管阵列检
测器;秋水仙碱对照品;甲醇 、冰乙酸 、二乙胺 、异丙
醇均为 AR试剂;水为重蒸馏水;野生丽江山慈姑鳞
茎于 2000 ～ 2002年采自云南省西北部及四川省越
120
西　南　农　业　学　报
Sou thw est Ch ina Journal of Agricu ltu ral Sciences
　　　　　　　　　　　　　　 2007年 20卷 1期
Vo l. 20　　No. 1
图 1　丽江山慈姑全草及各部分示意图
Fig. 1　The sketch of Iph igen ia ind ica Kun th et Ben th.
西县 ,经云南省农科院高山经济植物研究所袁理春
副研究员鉴定为丽江山慈姑 Iphigenia ind ica Kunth
et Benth. 。
1.2　对照品与供试品溶液制备
1. 2. 1色谱条件 　色谱柱:Angilan t ex tengd Bonus
RP-C18(4. 6 cm ×250mm)
流动相:甲醇 -异丙醇 -冰乙酸 -二乙胺 -水
(20∶5∶0. 25∶0. 5∶75), 检测波长:254 nm ,流速:1. 0
mL /m in, 柱温:40℃。
1. 2. 2　对照品溶液制备　取秋水仙碱对照品适量 ,
60 ℃减压干燥至恒量 ,精密称定 ,加 80 %甲醇制成
每 1 mL含 0. 1 mg的溶液 ,即得 。
1. 2. 3　供试品溶液制备　称取本品 5 g,粉碎 ,放入
100mL圆底烧瓶中 ,加甲醇回流提取 3次 ,每次回
流 2 h。第 1次加甲醇 40 mL,第 2次 、第 3次分别
加甲醇 30 mL。合并 3次提取液于 100 mL量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,取上清液用 0. 45 μm微
孔滤膜过滤 ,取过滤液即得 。
1. 2. 4　系统适用性研究　取 10mL量瓶 1只 ,取供
试品溶液 5mL,其中一份中精密加入秋水仙碱对照
品 1mg,用甲醇稀释至刻度制成参比溶液;分别取供
试品溶液 、参比溶液 、对照品溶液各 5 μl,注入高效
液相色谱仪 ,比较它们的色谱图:参比色谱图和供试
品色谱图中 ,在与对照品色谱图主峰相应保留时间
处均有一色谱峰 ,而参比溶液色谱图与供试品色谱
图相比 ,除该色谱峰高度明显高外 ,其他中的各色谱
峰均与供试品溶液色谱峰一致。
1. 2. 5　精密度试验　取秋水仙碱对照品溶液 ,重复
进样 5次 , 记录每次对照品峰的积分面积。计算
RSD为:0. 64% (n =5)。
1. 2. 6　重复性试验　分别取同一批药材样品 5份 ,
按含量测定项下的方法和操作测定 ,计算 RSD( %)
为 1. 1 %(n =5)。
1. 2. 7　稳定性试验　取一份供试品溶液 ,分别在第
0, 2, 4, 6, 8, 10 , 12h时进行测定 ,结果表明 ,本溶液
在 12h内稳定 ,其峰面积 RSD分别为 1. 4 %(n =
7)。
1. 2. 8　线性关系考察　取秋水仙碱对照品溶液 ,按
含量测定项下的色谱条件 ,分别进样 2、5、8、11、14、
17、20μl,记录秋水仙碱的峰面积 ,以秋水仙碱对照
品进样量为纵坐标 ,其峰面积为横坐标 ,绘制标准曲
线。统计学处理 ,得回归方程为:
Y =4. 16147E - 7X , 　　r=0. 9997,
说明样品在 0. 2 ～ 2. 0 μg线性关系良好 。
1. 2. 9　样品回收率试验精密称取已测知含量的样
品适量 5份 ,分别精密加入定量的秋水仙碱对照品 ,
按样品测定方法测定 ,外标法计算 。秋水仙碱的平
均回收率为 100. 9%,RSD分别为 1. 4 %(n =5)。
1. 2. 10样品含量测定　按含量测定项下的方法和
操作 ,分别测定 21批丽江山慈姑中秋水仙碱含量 ,
其平均含量为 0. 4 %,考虑到工业上的成本和药效 ,
本标准暂时规定其含量限度为平均含量的 75%,即
丽江山慈姑中秋水仙碱不得低于 0. 3%。
2　结果与分析
2.1　丽江山慈姑药材不同部位有效成分的分布
取丽江山慈姑全草鲜品药材 ,分成地上部分和
地下部分 (图 1),地下部分又分为以下几部分:
鳞茎外包皮 ,褐红色 ,质轻;鳞茎外层 ,白色 ,厚
度约 2 mm;鳞茎中层 ,白色 ,厚度约 4 mm;鳞茎内
层 ,白色 ,直径约 0. 5 cm。
　　分别取药材全草的各部位 ,在 50℃烘干 、粉碎
进行含量测定 ,结果见表 1。
表 1　丽江山慈姑全草各部分秋水仙碱含量测定结果
Tab le 1　The con tents of colch icine of d ifferent part of Iphigenia ind ica Kunth et B enth.
部位
Part
鲜重(g)
Fresh w eigh t
干重(g)
Dry weigh t
水分( %)
M oistu re
秋水仙碱含量(%)
The con tents of colch icine
地上部分
Part of ground
8. 9414 8. 0741 9. 7 0. 00003
地下部分
Part of underground
鳞茎外包皮 Outer-epiderm is 0. 2989 0. 2831 5. 3 0. 134
鳞茎外层 The ou ter of bu lb 2. 1896 1. 1101 49. 3 0. 171
鳞茎中层 Th e m idd le of bu lb 8. 3783 3. 6781 56. 1 0. 009
1211期 　　　　　　袁理春等:丽江山慈姑秋水仙碱 HPLC测定
表 2　丽江山慈姑不同产地(野生居群)的秋水仙碱含量测定结果
Tab le 2　The conten ts of colch icine of differen t p roducing areas of Iph igen ia indica Kun th et Ben th.
产地
Produ cing area
鲜重(g)
Fresh w eight
干重(g)
D ry w eigh t
水分(%)
M oisture
秋水仙碱含量( %)
The con tents of co lch icine
丽江红岩(GS01) 9. 5472 4. 1458 56. 6 0. 61
巨甸金河邓家河(GS02) 11. 1465 4. 8241 56. 7 0. 55
丽江石鼓(GS03) 14. 0846 6. 4270 54. 4 0. 53
虎跳峡(GS04) 9. 4855 5. 2411 44. 7 0. 47
丽江象山(GS05) 22. 8763 10. 3864 54. 6 0. 47
丽江龙蟠(GS06) 15. 6298 7. 5251 51. 9 0. 46
丽江茨科(GS07) 15. 9775 7. 3618 53. 9 0. 45
九河水库(GS08) 16. 8282 8. 9083 47. 1 0. 38
大理剑川(GS09) 35. 1930 8. 0071 59. 0 0. 44
大理鹤庆(GS10) 21. 1853 9. 7664 53. 9 0. 33
大理宾川(GS11) 15. 0903 7. 3880 51. 0 0. 19
香格里拉马场二社(GS12) 9. 6554 3. 9794 58. 8 0. 48
永胜县城西山(GS13) 6. 2952 3. 0013 52. 3 0. 50
永胜县仁和镇(GS14) 21. 4985 9. 7900 54. 5 0. 49
永胜县白华村(GS15) 13. 2712 6. 1097 54. 0 0. 42
永胜西山大坪(GS16) 20. 8182 10. 1104 51. 0 0. 40
永胜东风角(GS17) 8. 8323 6. 4406 27. 1 0. 39
永胜县东山大长坪(GS18) 42. 7313 9. 8063 58. 6 0. 30
华坪县大兴乡(GS19) 11. 2690 5. 0970 54. 8 0. 28
华坪文罗(GS20) 8. 8474 3. 8750 56. 2 0. 28
永胜县干海子(GS21) 13. 4124 6. 4518 56. 5 0. 27
永胜板桥乡(GS22) 14. 0846 6. 4270 54. 4 0. 13
2.2　丽江山慈姑有效成分与不同产地 (野生居群 )
的相关性分布
为进行种质资源收集和优化 ,对不同野生丽江
山慈姑居群进行了含量测定 ,结果见表 2
3　讨　论
丽江山慈姑地上部分基本不含秋水仙碱 ,就提
取秋水仙碱而言 ,地上部分没有利用价值;秋水仙碱
主要集中在鳞茎部分 ,并且含量由外及内依次降低 ,
主要集中在最外面的膜质层 (外包皮)和鳞茎外层 ,
中层和内层含量很少 。因此 ,在采收丽江山慈姑时 ,
应尽量保持膜质层的完整 ,同时对成熟丽江山慈姑
而言 ,同等重量的药材 ,鳞茎越小 ,表面积越大 ,秋水
仙碱含量就高。对分布在云南省西北部及四川省越
西县的 22个野生丽江山慈姑居群测定表明 ,分布在
金沙江两岸贫瘠砂砾土壤上的丽江红岩居群秋水仙
碱含量最高 ,达 0. 61 %,而生长在较肥沃的草丛中
的永胜县板桥乡居群仅为 0. 13 %,这说明丽江山慈
姑秋水仙碱含量与生境土壤 、土质有很大关系 ,在今
后的丽江山慈姑 GAP种植中应进一步探讨土壤及
土壤微生物与秋水仙碱含量的关系。本试验所测的
22个居群 ,代表了当前中国丽江山慈姑的主要分布
区 ,其秋水仙碱含量平均为 0. 40 %,这一指标可以作
为现阶段中国制定丽江山慈姑药材质量标准的参考。
参考文献:
[ 1] J. L. Kau l, B. K. M oza, F. San tavy, et a.l Subs tan ces from th e Plan ts of
the Sub fam ily Wu rmbaeideae and Th eir Derivatives. LIX:Isolation of
A lk aioid s from Plan ts of the Sub fam ily[ J] . Col lec.t C zech. Chem.
C ommun, 1964, 29(7):1689 - 1701.
[ 2]云南省卫生局. 云南省药品标准 [M ] . 昆明:云南科技出版社 ,
1974. 36.
[ 3]王宗玉. 中国原料植物药 [ M ] . 昆明:云南科技出版社 , 2002.
179.
[ 4]郭　勇 ,林桂芸 ,孙雁霞 ,等.喜树叶片中喜树碱含量的季节变化
研究 [ J] .西南农业学报 , 2006, 19(1):143 - 145.
[ 5]弓成林 ,汪小伟.灰色关联度和层次分析法在葡萄品质评价上的
应用 [ J] .西南农业学报 , 2002, 15(1):79 -82.
[ 6]汪禄祥 ,刘家富.药用龟板的氨基酸和矿质元素分析 [ J] .云南农
业科技 , 2006(1):36 - 37.
(责任编辑　谢晓慧)
122 西　南　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20卷