全 文 ：FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2010年 第 35卷 第 5期
The determination of quercetin content by high performance liquid
chromatography and the technology optimization of extracting total
flavonoids from lysimachia fortunei maxim
GONG Shou-ji, HUANG Yao-feng, TENG Cui-qin, XU Qing*
(Guilin Medical College, Guilin 541004)
Abstract: Objective:To determine the quercetin content by HPLC and optimize extracting technology of total
flavonoids from Lysimachia fortunei Maxim. Methods: Quercetin content was determined from Lysimachia
fortunei Maxim by HPLC. The HPLC method for the analysis of quercetin on ZORBAX SB-C18 column (250
mm×4.6 mm，5 μm) was established with simplicity and good reproducibility, by using methanol-0.2.0% glacial
acetic acid solution (42∶58, v/v) as mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min and 25 ℃. Results: The calibration
curves showed good linearities(r=0.9964) and content of quercetin is 3.25 mg/g. The total flavonoids yield reaches
3.83%. The optimum extraction conditions are extracting 2 times,1 hour each, with 60% ethanol-solvent ratio 1∶
30 at 60 ℃. Conclusion: These methods have certain instructive significance for the production and research of
flavonoids from Lysimachia fortunei maxim.
Key words: lysimachia fortunei maxim; flavonoids; HPLC; quercetin
龚受基， 黄耀锋， 滕翠琴， 徐 庆 *
(桂林医学院，桂林 541004)
摘要： 目的：以高效液相色谱法(HPLC)测定大田基黄中槲皮素含量，并优化大田基黄总黄酮的提
取工艺。方法：高效液相色谱法测定大田基黄中槲皮素含量，色谱柱为 ZORBAX SB-C18(250
mm×4.6 mm，5 μm)，流动相: 甲醇-0.20%冰醋酸水溶液(42∶58)，流量 1.0 mL/min，检测波长
360 nm，柱温 25 ℃，进样量 20 μL；以总黄酮含量为考察指标，采用正交设计的方法研究提取
大田基黄总黄酮的工艺条件。结果：HPLC法分析槲皮素时色谱峰的峰面积与含量呈良好的线性
关系(r=0.9964)，大田基黄中槲皮素含量 3.25 mg/g。乙醇浓度 60%，温度 60 ℃，料液比 1∶30，提
取时间 1 h，提取 2次时大田基黄总黄酮得率可达 3.83%。结论：该方法对大田基黄黄酮类化合
物的研究开发具有一定的指导意义。
关键词： 大田基黄；黄酮；高效液相色谱法；槲皮素
中图分类号： R 284.2 文献标志码： A 文章编号： 1005-9989(2010)05-0199-05
大田基黄中槲皮素含量分析和
总黄酮的提取工艺优化
收稿日期： 2009-07-14 *通讯作者
基金项目： 广西区教育厅课题(200829)。
作者简介： 龚受基(1970—)，男，讲师，硕士，主要从事天然产物有效成分研究工作
大田基黄广西民间用于治疗肝硬化、肝腹水、 高血压病等，鲜用或晒干，全草入药，有活血散
提取物与应用
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淤、利水化湿之功效。研究证明大田基黄含降血
压作用的多糖[1]，富含黄酮类化合物，现代药理研
究表明黄酮类化合物具有多种生物活性，主要表
现为对心血管系统的作用、护肝作用、抗炎作
用、抗菌抗病毒作用、免疫激活作用、抗氧化
作用等[2-3]。一些黄酮类化合物还可以作甜味剂，在
食品行业中可作为食品添加剂或直接应用于食品
中增加其保健作用。槲皮素具有抗肿瘤、抗炎、
抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多种生物
活性[4]。本研究以大田基黄为研究对象，分析大田
基黄中槲皮素含量，并探讨大田基黄总黄酮的提
取工艺，为开发利用大田基黄黄酮类化合物提供
科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料与试剂
大田基黄全草：市售，经广西植物研究所黄
定中高工鉴定为报春花科排草属植物红根排草
(Lysimachia fortunei Maxim)。
芦丁对照品：南京替斯艾么中药技术研究所，
批号，TCM027-080118；槲皮素对照品：中国药
品生物制品检定所，批号，10081-9905；亚硝酸
钠、结晶氯化铝、乙醇、丙酮、冰醋酸、盐酸、
乙醚、氢氧化钠等：分析纯；甲醇分别为分析纯
和色谱纯。
1.2 仪器与设备
高效液相色谱仪：Waters 600，美国；紫外分
光光度计：UV2401PC，日本；电子恒温水浴锅：
HH-6，常州国华仪器有限公司；光栅分光光度
计：722型，上海精密科学仪器有限公司；电子分
析天平：BP2218，赛多利斯科学仪器有限公司；
循环水式多用真空泵：SHB-Ⅲ，郑州长城科工贸
有限公司。
2 实验方法
2.1 HPLC法测定大田基黄中的槲皮素
色谱条件: 色谱柱为ZORBAX SB-C18(250 mm×
4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.20%冰醋酸水溶
液 (42:58)，流量1.0 mL/min；检测波长360 nm；
柱温25 ℃；进样量20 μL。
供试溶液的制备：准确称量4 g大田基黄粉末，
于索氏提取器中乙醚脱色， 然后用80 mL甲醇和
20 mL 的25%盐酸混合提取2 h，提取液过滤，甲
醇定容到100 mL，0.45 μ微孔滤膜滤过，备用。
对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品
5.000 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，
制成0.1 mg/mL的储备液。分别量取储备液0.5、
1.0、1.5、2.0、2.5 mL于10 mL容量瓶中，甲醇定
容，配制成质量浓度分别为0.005、0.010、0. 015、
0.020、0.025 mg/mL的溶液。
标准曲线制作：分别进样20 μL对照品溶液，
在色谱条件下测定峰面积，以峰面积为纵坐标，
进样量为横坐标，得标准曲线方程：Y=2.08C+
75.80，r=0.9964。
2.2 大田基黄总黄酮提取条件优化
2.2.1 芦丁标准溶液的制备和标准曲线的绘制
精确称取20.000 mg芦丁对照品，以60%乙醇
超声溶解并定容至100 mL，浓度为0.2 mg/mL。
取8 mL芦丁标准液于25 mL的容量瓶，加入
0.50 mol/L的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，摇匀静置5
min，加入0.30 mol/L氯化铝溶液1.00 mL，摇匀静
置5 min，加入1.00 mol/L氢氧化钠溶液5.0 mL，摇
匀显色后，用60%乙醇水溶液定容，10 min后用1
cm比色皿在波长360~600 nm区间扫描，确定最大
吸收波长为504.6 nm。
分别移取上述芦丁标准液 0、 1.00、 2.00、
4.00、6.00、8.00、10.00 mL于7个25 mL的容量瓶
中，显色后用60%乙醇水溶液定容，于波长504.6
nm处比色测定，空白试剂为参比液，绘制标准曲
线，得标准回归方程：A=2.353C-0.037，回归系数
r=0.9986，吸光度与芦丁浓度有很好的线性关系。
2.2.2 大田基黄中总黄酮含量的测定 黄酮苷元
易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，难溶于水，
而黄酮苷易溶于水，难溶于有机溶剂，因此可用
水或不同浓度的有机溶剂来提取。
准确称取0.5 g大田基黄粉末，用溶剂提取，
测定提取物中黄酮化合物含量。以芦丁为标样，
采用亚硝酸钠-三氯化铝比色法[5]，在可见光504.6
nm处测定其吸光值，计算总黄酮含量。提取率(%)
=(黄酮类化合物质量/干物料质量)×100。
3 试验结果
3.1 槲皮素含量测定分析
3.1.1 精密度试验 精密吸取上述0.1 mg/mL对照
品溶液20 μL，色谱条件分析，重复进样6次，测
定槲皮素峰面积，计算RSD为1.89%。
3.1.2 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20 μL，
按色谱条件分析，分别于0、2、4、6、8 h测定槲
提取物与应用
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皮素峰面积，根据结果计算RSD为2.43%。
3.1.3 重现性试验 精密吸取供试品溶液20 μL，
按色谱条件分析，重复进样6次，测定槲皮素峰面
积，计算RSD为0.89%。
3.1.4 样品含量测定 取4批样品，制备供试品溶
液，吸取供试品溶液进样，记录色谱图(见图1)，
测定峰面积，计算槲皮素平均含量3.25 mg/g。
3.1.5 加样回收率试验 精密吸取制备的4份供试
品溶液各2 mL，分别精密加入0.4 mL的槲皮素对
照品溶液(浓度0.1 mg/mL)，按色谱条件进样20 μL
分析测定含量，计算平均加样回收率99.95%，
RSD为0.62%(见图2)。
3.2 提取条件对总黄酮得率的影响
3.2.1 提取溶剂对总黄酮得率的影响 一定量的
大田基黄粉末在60 ℃水浴下，用6倍量不同浓度的
甲醇、乙醇、丙酮提取2次，每次2 h。由图2可见，
3种溶剂中乙醇得率最高，甲醇次之，丙酮最低。
考虑得率、价格、安全等因素，提取溶剂选用乙
醇溶液。
3.2.2 乙醇浓度对总黄酮得率的影响 一定量的
大田基黄粉末7份分别置于不同的50 mL圆底烧瓶
中，分别加入不同浓度的乙醇溶液(20%、30%、
40%、 50%、60%、70%、80%)10 mL，于60 ℃水
浴中回流提取2 h，定容到50 mL容量瓶，测定总
黄酮含量。
从图3可见，随着乙醇浓度的增加，提取率亦
随之增大，当乙醇浓度达到70%时，总黄酮得率最
高，而后随乙醇浓度增加，总黄酮得率减小。
3.2.3 温度对总黄酮得率的影响 一定量的大田
基黄粉末7份分别置于不同的50 mL圆底烧瓶中，
加入70%的乙醇10 mL，分别在不同温度(50、60、
70、80 ℃)回流提取2 h，提取液定容到50 mL容量
瓶，测定总黄酮含量。
由图4可以看出，随着提取温度的升高，总黄
酮提取量先升高后降低，当温度达到60 ℃时总黄
酮得率最大。
3.2.4 时间对总黄酮得率的影响 一定量的大田
基黄粉末7份于不同的50 mL圆底烧瓶中，加入
70%的乙醇10 mL，分别在60 ℃下回流提取1次，
每次时间为0.5、1、2、3、4 h，提取液定容到50
mL容量瓶，测定总黄酮含量。
由图5可以看出，提取时间在0.5~4 h范围
内，当提取时间为2 h总黄酮得率最大。
3.2.5 料液比对总黄酮得率的影响 一定量的大
田基黄粉末7份分别置于不同的50 mL圆底烧瓶中，
分别加入70%的乙醇5.0、7.5、10.0、12.6、15.0、
表 1 样品测定结果(n=4)
批号 槲皮素含量/(mg/mL) 槲皮素含量/(mg/g)
1 0.1264 3.16
2 0.1316 3.29
3 0.1296 3.24
4 0.1323 3.31
平均 3.25
图 1 对照品和供试品 HPLC色谱图
485.0
227.5
-30.0
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0
对照品
供试品
表 2 加样回收率试验结果
样品质量/
μg
加入量/
μg
测得量/
μg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/
%
2.107 3.333 5.462 100.04 99.95 0.62
2.193 3.333 5.441 98.46
2.160 3.333 5.452 99.25
2.205 3.333 5.652 102.05
图 2 不同溶剂对提取率的影响
40
35
30
25
20
15
10
5
0
得
率
/%
40 50 60 70 80 90
浓度/%
甲醇
乙醇
丙酮
图 3 不同乙醇浓度对提取率的影响
40
30
20
10
10 20 30 40 50 60 70 80
乙醇浓度/%
得
率
/%
图 4 不同温度对黄酮得率的影响
30
29
28
27
26
25
得
率
/%
40 50 60 70 80 90 100
温度/℃
提取物与应用
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表 5 验证试验结果
质量/g 总黄酮质量/mg 得率/% 平均得率/%
0.5 191.231 3.82 3．83
0.5 193.016 3.86
0.5 190.561 3.81
17.5 mL，分别在60 ℃ 下回流提取1次，时间为2
h，提取液定容到50 mL容量瓶，测定总黄酮含量。
由图6可以看出，料液比为1∶30的时候总黄酮
得率最高。
3.2.6 提取次数对总黄酮得率的影响 一定量的
大田基黄粉末7份分别置于不同的50 mL圆底烧瓶
中，加入70%的乙醇10 mL，分别在60 ℃下回流提
取1、2、3、4次，总时间为2 h，提取液定容到50
mL容量瓶，测定总黄酮含量。
从图7可以看出，在其他条件相同的前提下，
增加提取次数可以提高总黄酮得率，但提高幅度
不大，当提取次数达到3次时已基本将大田基黄中
总黄酮提取完全。
3.2.7 正交试验各因素对总黄酮得率的影响 在
以上单因素试验的基础上，对影响大田基黄中总
黄酮得率的因素：乙醇浓度、温度、料液比、提
取时间、提取次数进行L16(45)正交试验，按设计提
取分析测定总黄酮含量。
3.2.8 验证实验 由表3的极差分析和表4的方差
分析可知，5种因素对总黄酮得率影响大小依次
为D>E>C>A>B，5种因素的最佳组合为60%乙醇
溶液，料液比1 ∶30，在60℃温度下提取2次，每
次1 h。
依照所得最佳提取工艺条件，进行大田基黄
中总黄酮提取并测定含量。结果表明，该工艺条
图 5 不同时间提取对总黄酮得率的影响
40
35
30
25
20
得
率
/%
0 1 2 3 4
时间/h
图 6 不同料液比对总黄酮得率的影响
35
30
25
20
15
10
得
率
/%
1∶10 1∶15 1∶20 1∶25 1∶30 1∶35
料液比/(g/mL)
图 7 不同提取次数对总黄酮得率的影响
40
30
20
10
得
率
/%
0 1 2 3 4
提取次数/次
表 2 正交试验因素水平表
水平
因素
提取温
度/℃A
提取时
间/h B
提取次
数/次 C
乙醇浓
度/% D
料液比
E
1 50 1 1 50 1∶20
2 60 2 2 60 1∶25
3 70 3 3 70 1∶30
4 80 4 4 80 1∶35
表 3 正交试验结果
实验号
因素 总黄酮
得率/%A B C D E
1 1 1 1 1 1 2.793
2 1 2 2 2 2 3.432
3 1 3 3 3 3 3.507
4 1 4 4 4 4 3.041
5 2 1 2 3 4 3.724
6 2 2 1 4 3 3.530
7 2 3 4 1 2 3.081
8 2 4 3 2 1 3.450
9 3 1 3 4 2 3.310
10 3 2 4 3 1 3.627
11 3 3 1 2 4 3.258
12 3 4 2 1 3 3.232
13 4 1 4 2 3 4.103
14 4 2 3 1 4 2.829
15 4 3 2 4 1 3.580
16 4 4 1 3 2 3.112
K1 3.193 3.434 3.173 2.984 3.363
K2 3.446 3.355 3.492 3.596 3.234
K3 3.357 3.357 3.274 3.493 3.593
K4 3.406 3.209 3.463 3.365 3.213
R 0.253 0.225 0.319 0.576 0.380
表 4 总黄酮得率的方差分析
方差
来源
离均差
平方和 自由度 F值 F临界值 显著性
A 0.0387 3 1.43 F(0.01)=5.34
B 0.0265 3 0.98 F(0.05)=9.12
C 0.0700 3 2.59
D 0.2147 3 7.95 *
E 0.0914 3 3.39
误差 0.0812 9
提取物与应用
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件下总黄酮得率较高，得率稳定。
4 讨论
大田基黄中的槲皮素含量丰富，在色谱柱为
ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动
相：甲醇-0 .20%冰醋酸水溶液 ( 42 ∶58 )，流量
1 .0 mL/min；检测波长360 nm；柱温25 ℃；进样
量20 μL的条件下进行测定，峰面积与进样量呈较
好的线性关系，r=0.9964，槲皮素平均含量为3.25
mg/g。
以芦丁为对照品，NaNO2-AlCl3系统显色，分
光光度法504.6 nm处测定吸光度，所得标准曲线线
性良好，回归方程为A=2.353C-0.037, r=0.9986，
吸光度与芦丁浓度有很好的线性关系。通过单因
素实验和正交实验，确定大田基黄中总黄酮最佳
提取工艺参数为：乙醇浓度60%、温度60 ℃、料
液比1∶30、提取时间1 h、提取2次。验证实验结果
表明，该提取工艺具有稳定性好，得率较高，测
定大田基黄中总黄酮含量高达3.82%。
总黄酮的测定方式一般有分光光度法和高效
液相色谱法[6-7]，高效液相色谱法虽然重现性、稳
定性等指标较好，但仪器设昂贵，操作复杂，费
用较高，而且对于一些化学成分研究缺乏深入的
研究，不容易得到对照品，在具备对照品的情况
下也只能测定确定的黄酮，要测定总黄酮含量实
际上也是通过测定几种含量较多的成分，然后再
进行换算。黄酮类化合物结构上的酚羟基及其还
原性进行显色，用氯化铝-亚硝酸钠为显色剂，生
成铝鳌合物，在分光光度计上测定吸光度，并计
算含量，从而测定总黄酮类化合物含量，该法仪
器普通，方法简单，一般实验室就可测定，是测
定大田基黄中总黄酮含量比较方便的方法。
参考文献：
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物实验研究[J].时珍国医国药,2009,20(3):579-580
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及其季节动态[J].植物学通报,2006,23(3):269-274
提取物与应用
木瓜是人生活中常见的一种事物，殊不知，经常吃木瓜，可
以强身健体。
木瓜的作用，不可低估。木瓜肉色橙黄或红橙，可食率高,果
实含有丰富的木瓜酶、维生素 C、钙、磷、钾、及矿物质，营养
高，易吸收，具有保健、美容、预防便秘等功效。木瓜果实营养
丰富，果实含有丰富的胡萝卜素、蛋白质、钙盐、苹果酸、酒石
酸、柠檬酶和维生素甲、乙、丙和 C。 木瓜种子及叶入药。木瓜
种子含番木瓜碱及番木瓜甙、胆碱等。
我们来看看木瓜的 5大法宝。
1.富含维生素 C：木瓜维生素含量是苹果的 48倍。维生素 C
具有多种生理功能，能够清除氧自由基、增加肝细胞的抵抗力，
稳定肝细胞膜，促进肝细胞再生和肝糖元合成，从而促进受损肝
脏的修复。
2.富含多种氨基酸：慢性肝病患者多存在营养不良，氨基酸
缺乏。木瓜含有多种氨基酸成分，都是人体所必需的，能够满足
肝病患者营养需求。
3.富含齐墩果酸：齐墩果酸是一种具有护肝降脂、抗炎抑菌
等功效的化合物，以“齐墩果酸”为主要成分的齐墩果酸片，是
一种常用的保肝药物。
4.促进消化：木瓜的乳液中含有一种蛋白酶，能够分解肉食
中的蛋白质。慢性肝病患者常有食欲减退、饭后饱胀不适等消化
功能减退的表现，食用木瓜有助于改善这些症状，促进消化吸收。
5.抗癌作用：亚硝胺是肝癌的诱生物，而木瓜具有阻止亚硝
胺合成的本领，有一定的防癌作用。
因此，肝不好、常喝酒或压力过大的人，不妨每天吃半个木
瓜，可为“肝”的健康保驾护航。木瓜是贵族水果之王，它的功
效除了保肝护肝之外，还可以起到丰胸，养颜，瘦腿，减肥 (降
脂)，降血压，同时还是抗衰老的功效。
夏、秋季采集成熟果实，生食或熟食，或切片，晒干备用。
叶全年可采，鲜用或晾干备用。此外，番木瓜果实可加工制成木
瓜糖、果酱、果脯及罐头。青果的乳汁富含番木瓜酶，有消化蛋
白质的功能，在工业上用途极广。
果实含有丰富木瓜酶，维生素 C、B及钙、磷及矿物质，营
养丰富，果实含大量丰富的胡萝卜素、蛋白质、钙盐、蛋白酶、
柠檬酶等，具有防治高血压、肾炎、便秘和助消化、治胃病，对
人体有促进新节代谢和抗衰老的作用，还有美容护肤养颜的功效。
木瓜，养肝护肝效果最佳的水果
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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